Yöntem makalesi

Allojeneik trombosit açısından zengin plazma (PRP) kesitli Aşil tendon sıçan iyileşme süreci üzerine etkileri: metodolojik bir açıklama

8.8K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/55759

⸱

19 Mart 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Experimental Surgery, GIGA-R & Credec, University of Liège, 2Laboratory of Connective Tissues Biology, GIGA-R, University of Liège, 3Department Argenco, University of Liège, 4Department of Clinical Biology, University Hospital of Liège, University of Liège, 5Physical Medicine and Sport Traumatology Department, FIFA Medical Center of Excellence, University Hospital of Liège, University of Liège

Bu makalede

Özet

Bu iletişim kuralı tendon allojeneik trombosit zengin plazma (PRP) ya da tuzlu Çözümle Aşil tendonu parçası çıkardıktan sonra enjekte edilmiş Sıçanlarda şifa değerlendirme işlemini açıklar. Tendon şifa ilerlemesini analizleri farklı türleri kullanarak birkaç saat noktalarda değerlendirilir.

Özet

Bu makalede, PRP olumlu tendon şifa etkileyebilir Eğer gözlemlemek için kullanılan deneysel yordamlar açıklanır. İzlenmesi gereken 4 ana adım vardır: Aşil tendonu; bir lezyon teşvik PRP hazırlamak ve bu (veya tuzlu çözüm); tendon Kaldır; ve biyomekanik, moleküler ve histolojik değerlendirme gerçekleştirmek. Her adımda, kolayca yeniden olabilir bu yüzden usul ve yöntemleri ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Aşil tendon 5 mm uzun bölümünün ameliyatla kesitli (kaldırma) olmuştur. Daha sonra PRP ya da tuzlu çözüm PRP tendon şifa üzerinde olumlu bir etkisi olup olmadığını incelemek için enjekte ettiler. Üç grup (bir toplam 120 sıçan bu çalışmada kullanılmıştır) 40 hayvanların 2 alt gruplar alt: PRP enjeksiyon grubu ve tuzlu bir enjeksiyon kontrol grubu. Fareler zaman puan (Grup A: 5 gün; artırmaya kurban edildi Grup B: 15 gün; C: 30 gün grup) ve tendon çıkarıldı. 90 tendonları biyomekanik transcriptomic analiz yapmadan önce test uygulandı ve 30 kalan tendon histolojik analizi için sunuldu.

Giriş

Koagülasyon, inflamatuar süreç ve trombosit bağışıklık modülasyonu rollerini iyi bilinen1vardır. Son zamanlarda, onlar da şifalı özellikleri2,3var kanıtlanmıştır. Gerçekten de, çeşitli faktörler sitokinler ve büyüme (VEGF, PDGF, TGF-B, IGF-ı ve HGF) trombosit tarafından degranulation sırasında serbest bırakılır. Bu büyüme faktörleri anjiogenezi, doku remodeling ve yara iyileşme (kemik, deri, kas, tendon)2teşvik. Otolog kan centrifuging izolasyon yöntemine bağlı olarak yüksek trombosit konsantrasyonları içeren trombosit zengin plazma (PRP) üretir (3 arasında ve 10 kez kan baseline konsantrasyonu). Gerçekten de, çeşitli PRP hazırlama teknikleri özdeş bir nihai ürün sağlayamaz. Şimdiye kadar bu konuda uluslararası genel anlaşma oldu. Genel olarak, PRP Kronik kas-iskelet, tendinopathy, plantar Fasiit, Osteoartrit ve sendikasız4gibi tedavi için çekici bir tedavi seçeneği olabilir. Bu ilk defa oral Cerrahi ve İmplantoloji4 bir diş implantı koyduktan sonra şifa kemik hızlandırmak ve geliştirmek için kullanıldı. Bu çalışmada, PRP edinme hayvan deney4için sağlar bir tekrarlanabilir yöntemi açıklanmaktadır.

Lezyonlar tendonların sporcular ve fiziksel işçiler sık sık gözlenir beri büyük ilgi5/ geliştirilmesi süreci şifa ve böylece azaltmak belgili tanımlık zaman kurtarma için vardır. Kez gelişmekte olan yeni tedavi yöntemleri büyüme faktörlerinin kullanımı dahil ve endojen büyüme faktörleri4bir karışımı teslim etmek için basit ve minimal invaziv bir şekilde PRP bir ilçedir.

Biyolojik arabulucu, serbest bırakarak trombosit, yüksek düzeyde içeren plazma yönetim biyolojik arabulucu6 serbest bırakarak tendon ve bağ onarım teşvik edebilirsiniz çeşitli vitro veya hayvan çalışmaları göstermiştir ,7,8,9. Ayrıca, diğer çalışmalar PRP ben ve tendon III kollajen sentezinde hücreleri9,10,11türü teşvik edebilirsiniz göstermiştir. Ayrıca PRP matriks metalloproteinazların (MMPs) aktivasyonu azaltmak ve bu nedenle matrix bozulması azaltmak sürülmüştür. İltihap sürecinde söz konusu hücre doku iltihabı12tarafından indüklenen remodeling (fizyolojik ve patolojik) bir rol oynar MMP-9 üretebilir.

Sıçan bir tek PRP enjeksiyon kesitli Aşil tendon içine kurtarma işlemi ve tamir doku mekanik gücünü geliştirmek olabilir ki bu bilgilere dayanarak, biz onaylanmadığına karar. Bu kurtarma işlemi sırasında şifa tendonları biyomekanik özellikleri ölçme ve histolojik ve moleküler analizler remodeling yeni kurulan dokusunda kollajen değerlendirmek için performans test edilir. Çalışmanın amacı allojeneik PRP tek bir enjeksiyon kesitli Aşil tendon şifa etkisi gözlemlemek oldu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bakım ve taşıma hayvanların Bakım Kılavuzu uygun olarak gerçekleştirilen ve kullanım laboratuvar hayvanlarının Ulusal Bilimler Akademisi tarafından hazırlanan ve ulusal kurumları, Sağlık (ABD tarafından) yayınlandı. Avrupa ve ulusal mevzuat dikkatle takip.

1. hayvan hazırlık

  1. 132 2 - ay yaşlı erkek Sprague-Dawley rats vezin 320-450 g (120 sıçanlara deney) ve kan örnekleme, şekil 112 sıçanlara kullanın. Dell13üzerinde bağlı olarak, her grup için 15 sıçan 0,8 (belirtilen etkisi varsa istatistiksel anlamlılık, bulmak % 80 şans) bir güç için yeterli oldu.
  2. Klasik kafesler değişen bir istasyon ile donatılmış bir geleneksel tesiste yalıtım koşullar altında tüm rats ev. Bir IVC (tek tek havalandırılmış cage) raf ıslah özellikle satın SPF (belirli patojen ücretsiz) fareler ile tahrik.
  3. Aşağıdaki konut koşullarını kullanın: sıcaklığı 19-24 ° c; Bağıl nem oranı: % 40-60; Havalandırma: Hava yenileme sıklığı: 10-15-h; Açık/koyu döngüsü: 12 h - 12 h.
  4. Tüm caging ekipman sterilize ve ışınlanmış yatak kullanın. Sistemik kafes zenginleştirme steril karton tepsiler ve havlu içinde kafes yerleştirerek uygulamak.
  5. Bölge sınırlı koşullar altında erişmesine izin vermek: yeni laboratuvar mont, maske, eldiven, Ayakkabı ve saç başlık girişinde.
  6. Geleneksel İmkanları için Felasa14 öneriler göre yıllık bazda kirli yatak üzerinde yer alan nöbetçi hayvanlar üzerinde koloni sağlık izleme dışarı taşımak. 4-5 hayvanlar ile ışınlanmış uygun kafes başına diyet ve sağlamak tutmak su ad libitumacidified. Her gün izlemek.
  7. 2s ameliyat öncesi cerrahi Odalar için üst kafesleri filtreleme içinde cerrahi müdahale için seçilen fareler aktarın.

2. cerrahi müdahale

  1. Cerrahi aletler hazırlamak: ince makas, bir kelepçe, iki kan durdurucu sargı kelepçeler ve bir iğne bağı. Tüm işlemler sırasında eldiven, maske, bir başlık ve bir laboratuar önlüğü giy.
  2. Rastgele fareler (PRP ve tuzlu çözüm) iki gruba ayırın.
  3. Fareyi onun kafes dışına almak ve tartmak. Numaralı kulak Etiketler fareler tanımlamak için kullanın. Kuruma gözleri önlemek için kornea üzerinde waterdrops yerleştirin.
  4. Fareyle intraperitoneally xylazine (10 mg/kg vücut ağırlığı) ve ketamin (80 mg/kg vücut ağırlığı) anestezi. Anesthetization onaylamak için kardiyo solunum izleme ve kontrol için herhangi bir göz refleksleri altında hayvanlar koyun.
  5. Buprenorfin 50 µL subkutan enjekte (0,01-0,05 mg/kg her 8-12 h) ağrı kesici olarak boyun bölgesinde.
  6. Bir Elektrikli tıraş makinesi ile sol arka bacak tıraş, scrubs ISO-betadin/alkol (seyreltilmiş 1:10) çözüm alternatif 3 ile dezenfekte ve bir sıcak yastık (20 ° C) bir diseksiyon mikroskop altında üzerinde fare yer. Fareyi üzerinde üstün bir konumda ameliyat olmak için bacak ile yanal dekübitus yerleştirin. Pençe cerrahi Forseps ile tutun.
  7. Makas kullanarak, küçük yan kesi (20-25 mm) sol Aşil tendonu çevresinde cilt içinde yapmak ve Aşil tendonu karmaşık (şekil 2a) ortaya çıkarmak için iyi makas kullanarak fasya incelemek.
  8. Plantaris tendon makas (şekil 2b) bir çift ile kaldırın.
  9. Aşil tendonu transversally 5 mm proksimal Kalkaneal onun ekleme için kesmek ve makas kullanarak bir 5mm uzun bölümü kaldırın. Tendon (Şekil 2 c, 2d) dikiş değil.
  10. Fasya ve cilt overjet bir dikiş (sürekli dikiş) yapıyor tekrar Emilebilen iplik ile dikiş. Monofilament dikiş cilt cerrahi kesi içine üzerinden esneklik önlemek için de kullanılabilir.
  11. Fareyi bir Isıtma lambası kadar uyanık altında yerleştirin ve sonra fareyi bir kafes (58 x 38 cm) geri içinde yer (Nota bene: yok immobilizasyon uygulanmaktadır).

3. PRP hazırlık15

  1. Xylazine (10 mg/kg vücut ağırlığı) ve ketamin (80 mg/kg vücut ağırlığı) donör farelerle mayi enjeksiyonu ile anestezi. PRP enjeksiyon dışarı 2 h postoperatively herhangi bir re-anestezi olmadan yapılır.
  2. Buprenorfin 50 µL subkutan ağrı kesici enjekte et.
  3. Tam kan toplamak (fare, başına 20 mL son kanama) sodyum sitrat arabelleğe % 3.2 içeren steril tüpler içine kalp ponksiyon tarafından (0.109 M, antikoagülan). Sonra fare İntrakardiyak enjeksiyonu ile ötenazi.
  4. PRP elde etmek için kan vasıl 150 x g ve oda sıcaklığında 10 dakika santrifüj kapasitesi. Bu ilk düşük hızlı Santrifüjü adım iki ayrı aşamada verimleri: kırmızı kan hücrelerinin toplam hacminin yaklaşık % 80-90 hesapları (RBCs) oluşan bir alt aşaması ve trombosit açısından zengin plazma (PRP) (genellikle % 10-20 kan oluşan bir üst aşama örnek).
  5. Yavaşça bir plastik transfer pipet kullanarak ikincil bir plastik tüp PRP (üst aşama) toplamak. PRP ve kırmızı kan hücreleri arasında arayüz çok gevşek olduğu için çok yakın arabirime pipet değil. Doğru şekilde işlediğinden, PRP RBCs kirletici 103 hücreleri x 0,05 aşağıda olmalıdır / µL. atmak kalan alt aşaması ve birincil kan toplama tüp.
  6. Toplanan PRP hacmi belirlemek ve Hematoloji Çözümleyicisi üzerinde trombosit sayısı ölçmek. Bu değerler hesaplamalar trombosit konsantrasyon sonraki adımda ayarlamak için gereklidir. Küre sayısı da RBCs ile potansiyel kirlilik değerlendirmek yararlı ve bu aşamada PRP WBCs. trombosit konsantrasyon genellikle 1 – 1,5 x106/µL.
  7. 1000 x g ve oda sıcaklığında 10 dakika için PRP ikinci bir aralıklarla gerçekleştirmek. Bu yüksek hızlı Santrifüjü adım gevşek trombosit Pelet ve Otolog trombosit-yoksul plazma (PPP) oluşan bir süpernatant verir. Adım 3.6, belirlenen değerleri kullanarak hesaplamak PRP konsantre ve 2.5 son bir konsantrasyon ulaşmak için atılacak süpernatant hacmi x106/µL.
  8. Yavaşça süpernatant (PPP) 3.7 adımda hesaplanan son hacim üçte bırakarak bir plastik transfer pipet kullanarak ikincil bir plastik tüp toplamak. Pelet gevşek olduğu için PPP atılır, bu nedenle potansiyel olarak son istenen konsantrasyon azaltarak trombosit önemli bir miktar kaybolur.
  9. Dikkatle kalan süpernatant ile trombosit Pelet nazik tekrarlanan pipetting tarafından resuspend. Bu konsantre PRP üzerinde trombosit sayısı ölçmek. Gerekirse, son hedef toplama ulaşmak için Otolog PPP uygun hacmi ekleyin.
    Not: PRP 3 h hazırlık içinde kullanın.
  10. 50 µL CaCl2 eklemek (11 mEq 10 mL) trombosit etkinleştirmek için PRP mL başına.
  11. Taze PRP veya tuzlu çözüm 50 µL 21 G iğne ile doğrudan dikilmiş işlemi site ile yaklaşık 1 saat sonra hazırlık enjekte et. Bu süre boyunca, PRP oda sıcaklığında tutmak.
  12. Fareler fonksiyonel iyileşme sırasında gün ameliyat sonrası ve Aşil tendonu kaldırılmasını önce yakından izleriz.

4. kaldırma Aşil tendonu ve biyomekanik test16

  1. 5, 15 veya 30 gün sonra5, tartmak iri fare. O zaman, xylazine (10 mg/kg vücut ağırlığı) ve ketamin (80 mg/kg vücut ağırlığı) ile mayi enjeksiyonu ile anestezi.
  2. Buprenorfin 50 µL subkutan ağrı kesici enjekte et. Tendon fizyolojik şartlarda mümkün olduğunca uzun süre tutmak için hayvan ödün önce kaldırın.
  3. Sol arka bacak tıraş ve fareyi diseksiyon mikroskop altında yerleştirin. Fareyi üzerinde üstün bir konumda ameliyat olmak için bacak ile yanal dekübitus yerleştirin. Pençe parmak ile tutun.
  4. Önceki işlemi site içinde küçük bir insizyon attım (10 mm) yapmak ve triceps suralis maruz kadar genişletir.
  5. Şifa Aşil tendonu kaldırmak için Kalkaneal Kemik transversally 5-10 mm distal, Aşil tendonu eki kesti. O zaman Achilles tendon (şekil 3b) bağlı triceps suralis bir parçası incelemek. Kas parçası cryo-çene (şekil 3 c-d) sığmayacak kadar büyük olmalı. Örnek hemen cryo-çene içine yerleştirin forseps (şekil 3e) kullanarak.
  6. Kas-tendon-kemik karmaşık kaldırdıktan sonra fare tedavisiydi (200 mg/kg) ile İntrakardiyak enjeksiyonla ötenazi. Ölüm kalp ritmi ve solunum 15dk için yokluğunda değerlendirmek tarafından onaylayın.
  7. Kas birim üst çene (şekil 3e) yerleştirin, kapatın ve makine test evrensel dikey olarak yerleştirin (106.2 kN, şekil 3a). O zaman kemik arasında (şekil 3f) makinenin alt kelepçeler saptamak.
  8. Bu bir büyüklük tendon sert ve çekme testi sırasında deforme değil kas dondurmak için üst çene havzaları her ikisi de içine sıvı azot ekleyin.
  9. Dondurucu bölge metal kelepçe sınıra ulaştığında, tendon yapısını korur bu yüzden çekme testi başlatın. Makine Motor hacmi oranı 1 mm/s sabit bir hızda rüptürü kadar ayarla. Son Newton (N) bir bilgisayara verilen çekme dayanımı (UTS) kaydedin.
  10. Kesit alanı hesaplamak için Eliptik bir şekli oluşturan iki kamera birbirlerine dik yerleştirin ve fotoğraf çekmek.
  11. Şifa ve tendonların kesit alanı arasındaki farkı hesaba katan doku tarafından tecrübeli mekanik stres temsil eden birim alana milimetre kare başına (N), UTS normalleştirmek.

5. histolojik analizi

Not: her grubunun 15 tendon histolojik analizi uygulandı.

  1. Onun kaldırıldıktan sonra Aşil tendonu yapısını korumak için hemen % 4 paraformaldehyde içinde daldırın (doku 1 mm Sabit saat için böylece fiksasyon zaman tendon boyutuna bağlı olarak değişir).
  2. Paraformaldehyde % 70 etanol tarafından değiştirin ve bu çözüm içinde en az bir gece için örnek bırakın.
  3. Tendon delikli küçük bir plastik konteyner yerleştirin ve 1 h için taze bir % 70 etanol çözüm konteyner yer.
  4. Yer % 95 etanol için 1 h. kapsayıcısında yineleyin.
  5. Yer 1 h. için % 100 etanol kapsayıcısında yineleyin.
  6. Yer 1 h. için % 100 Ksilen kapsayıcısında yineleyin.
  7. Şimdi tendon içerir, plastik kap Sıvı parafin (56 ° C) yerleştirin ve gece bırakın.
  8. Bir gömme istasyonu (erimiş mum, elektrikli Ocak ve soğuk bir tabak ile donatılmış) kullanarak, en uygun doku örneği bir metal kalıp seçin ve Bankası kaplı küçük bir sıvı parafin ile doldurun.
    Not: dikey bölümleri microtome elde etmek için örnek yönlendirmek.
  9. Örnek doğru şekilde konumlandırıldığında, Sıvı parafin ile kalıp doldurmak ve soğutucu makine yerleştirin. En az 15 dakikadır aşağı soğumaya bırakın.
  10. Parafin blok kaldırmak ve buz için en az 30 dakika yerleştirin.
  11. Birkaç temiz cam slayt hazırlamak ve bazı deiyonize su damlacıkları koy.
  12. Microtome adlı bölümlerde bloklarını 5 mikron (yalnızca kullanım bölümler tendon orta kısmından) keser ve bir slayt üzerinde bölümüne yerleştirir.
  13. Parafin sadece cama doku bond için erimeye başlar slaytları 65 ° C birkaç dakika, Isıtma fırında yerleştirin.
  14. Parafin bölüm bir dilim tutucu içeren slaytlar yerleştirin.
  15. Şimdi deparaffinize ve doku aşağıdaki ardışık banyolarında yerleştirerek rehydrate:
    Ksilen (banyo 1) 8 dk
    Ksilen (banyo 2) 4 dk
    % 100 etanol içinde 2 dk
    % 95 etanol içinde 2 dk
    % 70 etanol içinde 2 dk
    deiyonize su 2 dk
  16. Hematoksilen-Eozin için boyama, doku aşağıdaki çözümleri yerleştirin.
    1. Doku Hematoksilen çözüm (1 g Hematoksilen monohidrat, 0.2 g KIO3, 50 gr AIK (SO4)2.12H2O; 200 mL gliserin; 1 L için distile su ile ayarlamak) 8 dakika bırakın.
    2. Doku altında musluk suyu çalışan 8 min için bırakın.
    3. Doku 30 bırakın Eozin çözüm (içeren su katılmamış asetik asitin 200 µL distile su 100 ml % 0.25 Eozin) s.
    4. Doku altında musluk suyu çalışan 2 min için bırakın.
  17. Masson'ın Trichrome boyama için aşağıdaki adımları izleyin.
    1. Rehidratasyon sonra bölümleri demir şap (0.5 g (NH4) Fe (SO4)2.12H2O 10 mL H2O) içeren bir kapsayıcı yerleştirin ve konteyner kapatın. 280 W mikrodalga, 3 dk kadar ısı.
    2. Bir dakikalığına sakin olun ve sonra deiyonize suyla durulayın edelim.
    3. Regaud'ın Hematoksilen çözüm ile kapalı bir kapta bölümleri yerleştirin (50 mL H2O 50 ° C'de içinde çözünmüş 0.5 g Hematoksilen sonra ekleyin 5 mL % 95 etanol ve 5 mL gliserin), 90 için ısı W. 280 s
    4. Deiyonize su ile durulayın.
    5. 3 dk. (metanol doygunluk), Pikrik asit çözüm bölümleri yer, musluk suyu çalışan altında 5 min için durulama ve sonra bir kaç saniye deiyonize suyla yerleştirin.
    6. Şimdi bölümleri asit fuchsin (50 mL H2O su katılmamış Asetik asit 0.25 mL içeren 0.5 g) 5 s ve durulama için yer altında musluk suyu çalışan boya kaybolana kadar.
    7. Phosphomolybdic asit solüsyonu (0.5 g 50 mL H2O) 5 min için bölümlerde kuluçkaya, deiyonize suyla bir kaç saniyeliğine yerleştirin.
    8. Başka bir 5 min için açık yeşil (50 mL H2O su katılmamış Asetik asit 0.25 mL içeren 0.5 g) çözüm bölümleri yerleştirin ve boya kaybolana kadar musluk suyu akan altında yerleştirin.
  18. Şimdi doku tekrar kurutmak.
    1. Bölüm 1 dk % 70 etanol için bırakın.
    2. Bölüm 1 dk % 95 etanol için bırakın.
    3. Bölüm 1 dk içinde % 100 etanol için bırakın.
    4. Ksilen (banyo 1) 1 min için bir bölüm bırakın.
    5. Ksilen (banyo 2) 1 min için bir bölüm bırakın.
    6. Çok fazla Ksilen kaldırmadan bölümleri çıkarın ve örnek üzerinde bir damla montaj orta koydu.
    7. Bir coverslip (herhangi bir kabarcıklar provoke olmadan) dökeyim ve en az 2 h sertleşmesine izin verin.
    8. 5 histolojik bölümlerini (her biri farklı bir tendon) 6 N HCl 3 h için her grupta hidrolize ve 5 günahı µm bölümlerindeki dizin olarak hidroksiprolin ölçerek kollajen konsantrasyonu belirlemek.
  19. Sonuçlarına göre üreticinin yazılımını kullanarak bölümü alanı normalleştirmek.
  20. Bazı bölümleri ile görselleştirmek ve bilgisayar destekli analiz tarafından fibriler kollajen ölçmek için yeşil ışık leke leke.
  21. Bölümleri inceden inceye gözden geçirmek ve nüansları IrfanView yazılımını kullanarak gri resimlerde dönüştürmek. Belgili tanımlık bilgisayar yazılımı (örneğin, bir miktar) yarı miktar için kullanın.

6. moleküler değerlendirme

  1. Mekanik test sırasında oluşan tendon yırtığı sonra örnekleri al, ek onları sıvı azot içinde dondurma ve-80 ° C (PRP ve tuzlu çözüm)17, depolayabilirsiniz.
  2. Toplam RNA17yalıtmak için ticari bir toplam RNA setini kullanın.
  3. Ifade kollajen ölçmek (Col ben ve Col III), matriks metalloproteinazların (MMP-2, MMP-3 ve MMP-9) ve tenomodulin (TNMD) tarafından RT-PCR17,18.
  4. MRNA ifade düzeyleri düzeyleri 28S19ile normalleştirmek.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sonuçlar ortalama ortalama ± standart sapması ifade edilir ve Varyans analizi ile (ANOVA) karşılaştırıldı. Bir iki yönlü ANOVA ve post hoc de Scheffé, hangi bir parametrik test, kullanılan test.

Nihai sıçan sigara yaralı Aşil tendon rüptürü kışkırtmak için gerekli dayanımı (UTS) yapıldı 42.0 ± 5,7 N (n = 10). Çekme dayanımı önemli ölçüde arttı (p < 0.0001) 5 gün sonra her iki grupta. Her iki grup karşılaştırarak, UTS PR...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Trombosit süreci şifa tendon erken enflamatuar faz için gereklidir. Ne zaman bu trombosit doku veya koagülasyon teşvik faktörler bağlama için maruz kalan, α granül stocked vardır büyüme faktörleri yayınlayacak. Bu etkileşim nedeniyle Mezenkimal hücrelerin prolifere ve hücre dışı matriks oluştururlar synthetized vardır. Trombosit kemotaktik etkinlik progenitör hücrelerinin angiogenez artırılması ve hücresel başkalaşım6,20uyarıcı kan dolaşımını da mevcuttur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Hiçbir çıkar çatışmaları ilan etti.

Teşekkürler

Bu çalışmada standart de Liège tarafından desteklenen ve Leon Frédéricq fonların Lejeune - Chien verir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Ksilazin (Xyl-M)VMDhiçbirianestezik
Ketamin (Jé tamin 1000 CEVA)CEVA Santé Animalenoneanestezik
Buprenorfin (Vetergé sic Multidosis)ALSTOEyokAğrı kesici
iso-BetadineMEDA-PharmayokDezenfekte edici
emilebilir iplik Vicryl 6/0Johnson & Johnson
NembutalCEVA Santé AnimalenoneAnestezik
ParaformaldehitSigma-AldrichP6148Doku yapısını korur
İzopropanol %100VWR20,922,364
Etanol %95VWR20,823,362
KsilenVWR28973.363
ParafinVWRLEIC3950.1006
HematoksilenMillipore1.15938.0025Renklendirici
EosinMillipore1.15935.0100Renklendirici
EukittSigma-Aldrich3989Montaj Ortamı
CaCl2

Kaynaklar

  1. Kaux, J., Degrave, N., Crielaard, J. Platelet rich plasma traitement des tendinopathies chroniques? Revue de la littérature. Platelet rich plasma treatment of chronic tendinopathies? Review of literature. J. Traumatol. du Sport. 24, 99-102 (2007).
  2. Anitua, E., et al. Autologous preparations rich in growth factors promote proliferation and induce VEGF and HGF production by human tendon cells in culture. J. Orthop. Res. 23, 281-286 (2005).
  3. Bosch, G., et al. Effects of platelet-rich plasma on the quality of repair of mechanically induced core lesions in equine superficial digital flexor tendons: A placebo-controlled experimental study. J. Orthop. Res. 28, 211-217 (2010).
  4. Kaux, J. F., Drion, P., Croisier, J. L., Crielaard, J. M. Tendinopathies and platelet-rich plasma (PRP): From pre-clinical experiments to therapeutic use. J. Stem Cells Regen. Med. 11, P7-P17 (2015).
  5. Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. Types and epidemiology of tendinopathy. Clin. Sports Med. 22, 675-692 (2003).
  6. Molloy, T., Wang, Y., Murrell, G. The roles of growth factors in tendon and ligament healing. Sports Med. 33, 381-394 (2003).
  7. Lyras, D. N., et al. The effect of platelet-rich plasma gel in the early phase of patellar tendon healing. Arch. Orthop. Trauma Surg. 129, 1577-1582 (2009).
  8. Aspenberg, P., Virchenko, O. Platelet concentrate injection improves Achilles tendon repair in rats. Acta Orthop. Scand. 75, 93-99 (2004).
  9. Visser, L. C., et al. Growth Factor-Rich Plasma Increases Tendon Cell Proliferation and Matrix Synthesis on a Synthetic Scaffold: An In Vitro Study. Tissue Eng. Part A. 16, 1021-1029 (2010).
  10. Zhang, J., Wang, J. H. -C. Platelet-Rich Plasma Releasate Promotes Differentiation of Tendon Stem Cells Into Active Tenocytes. Am. J. Sports Med. 38, 2477-2486 (2010).
  11. Kajikawa, Y., et al. Platelet-rich plasma enhances the initial mobilization of circulation-derived cells for tendon healing. J. Cell. Physiol. 215, 837-845 (2008).
  12. Pasternak, B., Aspenberg, P. Metalloproteinases and their inhibitors-diagnostic and therapeutic opportunities in orthopedics. Acta Orthop. 80, 693-703 (2009).
  13. Dell, R. B., Holleran, S., Ramakrishnan, R. Sample size determination. ILAR J. 43, 207-213 (2002).
  14. Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Lab. Anim. 48, 178-192 (2014).
  15. Kaux, J. -F., et al. Étude comparative de cinq techniques de préparation plaquettaire (platelet-rich plasma). Pathol. Biol. 59, 157-160 (2011).
  16. Wieloch, P., Buchmann, G., Roth, W., Rickert, M. A cryo-jaw designed for in vitro tensile testing of the healing Achilles tendons in rats. J. Biomech. 37, 1719-1722 (2004).
  17. Kaux, J. -F., et al. Vascular Endothelial Growth Factor-111 (VEGF-111) and tendon healing: preliminary results in a rat model of tendon injury. Muscles. Ligaments Tendons J. 4, 24-28 (2014).
  18. Docheva, D., Hunziker, E. B., Fässler, R., Brandau, O. Tenomodulin is necessary for tenocyte proliferation and tendon maturation. Mol. Cell. Biol. 25, 699-705 (2005).
  19. Lambert, C. A., Colige, A. C., Munaut, C., Lapière, C. M., Nusgens, B. V. Distinct pathways in the over-expression of matrix metalloproteinases in human fibroblasts by relaxation of mechanical tension. Matrix Biol. 20, 397-408 (2001).
  20. Nurden, A. T., Nurden, P., Sanchez, M., Andia, I., Anitua, E. Platelets and wound healing. Front. Biosci. 13, 3532-3548 (2008).
  21. Woodall, J., Tucci, M., Mishra, A., Benghuzzi, H. Cellular effects of platelet rich plasma: a study on HL-60 macrophage-like cells. Biomed. Sci. Instrum. 43, 266-271 (2007).
  22. Taylor, D. W., Petrera, M., Hendry, M., Theodoropoulos, J. S. A systematic review of the use of platelet-rich plasma in sports medicine as a new treatment for tendon and ligament injuries. Clin. J. Sport Med. 21, 344-352 (2011).
  23. Mazzocca, A. D., et al. The positive effects of different platelet-rich plasma methods on human muscle, bone, and tendon cells. Am. J. Sports Med. 40, 1742-1749 (2012).
  24. McCarrel, T. M., Minas, T., Fortier, L. A. Optimization of leukocyte concentration in platelet-rich plasma for the treatment of tendinopathy. J. Bone Joint Surg. Am. 94 (1-8), e143(2012).
  25. Boswell, S. G., et al. Increasing platelet concentrations in leukocyte-reduced platelet-rich plasma decrease collagen gene synthesis in tendons. Am. J. Sports Med. 42, 42-49 (2014).
  26. Virchenko, O., Aspenberg, P. How can one platelet injection after tendon injury lead to a stronger tendon after 4 weeks?: Interplay between early regeneration and mechanical stimulation. Acta Orthop. 77, 806-812 (2006).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

A il TendonuTendon yile mesiBiyomekanik TestlerHistolojik AnalizPRP Haz rlamaCerrahi Lezyonekme Dayan mKollajen BoyamaS an Modeli

İlgili makaleler