N- glukanlardir bağlantı için bir alüminyum oksit kaplı cam sentezi için modüler bir yaklaşım olarak geliştirilen glycan Mikroarray ve geniş antikor nötralize bir HIV profil oluşturma için kullanımı gösterilmiştir (ACG slayt) kaydırın.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
N- glukanlardir dizi geliştirme ve HIV antikor için kemoterapi enzimatik sentezi profil oluşturma
Bu makalede
Özet
Özet
Ngeniş bir hızlı hazırlanması için son derece verimli bir şekilde tanıtacağız-bağlı yaygın insan glikoproteinlerin üzerinde bulunan (20.000 yapıları aşmayı tahmini) oligosakkaritler. İstenilen yapısal çeşitlilik ulaşmak için strateji oligosaccharyl florür modülleri, onların kademeli α-seçici glycosylations 3-Ey ve 6-Ey ardından üç tür kemoterapi enzimatik sentezi ile başladı. olarak konumlandırır bir çok önemli β-mannoside bağlantı sahip ortak çekirdek trisaccharide mannoz kalıntısı. Biz daha fazla kovalent karışık dizi analizi ile bir HIV antikor hetero-ligand etkileşim için oluşturmak için bir alüminyum oksit kaplı cam (ACG) slayt yüzeyine N- glukanlardir bağlı. Özellikle, N- glycan (SCT bağlama davranışı bir yeni izole HIV-1 geniş nötralize antikor (bNAb), PG9, yakından aralıklı adam5GlcNAc2 karışımı (adam5) ve 2,6-di-sialylated BI antennary kompleks yazın ) ACG dizi etkili immunogen tasarım HIV aşı geliştirme için rehberlik için yeni bir cadde açar. Buna ek olarak, bizim ACG dizi diğer HIV antikor hetero-ligand bağlayıcı davranış için eğitim için güçlü bir araç içerir.
Giriş
N- glukanlardir glikoproteinlerin üzerinde kovalent asparagine için fikir birliği Asn-Xxx-Ser/Thr sequon kalıntısı (Asn) protein uyum, antigenicity, çözünürlük ve lektin tanıma gibi birçok biyolojik süreçlerin etkileyen bağlıdır 1 , 2. kimyasal sentez n-bağlantılı oligosakkaritler temsil eden önemli bir sentetik sorun onların büyük yapısal mikro heterojenite ve çok dallı mimarisi nedeniyle. Reaktivite yapı taşları, anomerik merkezleri ve organizatörü doğru kullanımı seçicilik ulaşmak ayarlamak için koruma dikkatli seçimi gruplar / activator(s) karmaşık oligosakkaritler sentezi temel unsurları....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. D1/D2 hazırlanması kol modülleri22
- Orta 2 hazırlanması
- Malzeme 1 ( Şekil 2' de p-methoxyphenyl-O-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-D-mannopyranoside (100 mg, 0,204 mmol) 15 mL tüp içine gösterilen) başlayarak tartmak ve arabellek (25 mM, pH 7.5) Tris içeren çözülür manganez ve (MnCl2, 10 mM) 5 mM bir son glycan konsantrasyon elde etmek için.
- 2 karşılıkları üridin nükleotittir galaktoz (UDP-Gal) ekleyin.
- 150 adet enzim β-1, 4 galactosyl Transferazlar sığır süt ekleyin ve 37 oC ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
N -glukanlardir geniş bir dizi sentezi için modüler bir kemoterapi enzimatik strateji şekil 1' de sunulmuştur. Çeşitlilik-ebilmek var olmak mahluk başında 3-Ey ve/veya 6-Ey α-özel mannosylation ardından üç önemli modüller kemoterapi enzimatik sentezi tarafından gerçeğine dayanarak stratejidir ortak mannoz kalıntısı konumunu N- glukanlardir trisaccharide çekirdek. İki, üç ve tetra antennary karmaþýk tür N- glycan ya.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
HIV-1 bNAbs PG9, PG16 ve PGTs 128, 141-145 dahil olmak üzere bir sınıf olduğunu bildirdi HIV-1 yalıtır dolaşan % 70-80 nötralize son derece güçlü olmak. Bu bNAbs epitopları tüm HIV-1 Grup M türevleri arasında son derece korunmuş, bu nedenle nötralize antikorlar23,24,25 temin bir HIV aşısı için etkili immunogen Tasarım Kılavuzu . HIV-1 geniş antikorları nötralize glycan epitopları tanımlamak için bizim devam eden çabalarının bir .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Yazarlar ince Film teknolojisi bölümü, enstrüman Teknoloji Araştırma Merkezi (ITRC) ve ulusal uygulamalı araştırma laboratuvarları, Hsinchu bilim Parkı, Tayvan teşekkür ederiz. Bu eser Ulusal Bilim Konseyi tarafından desteklenmiştir (Hayır verin. ÇOĞU 105-0210-01-13-01) ve Academia Sinica.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Asetik asit | Sigma Aldrich | 64197 | |
| Asetonitril | Sigma Aldrich | 75058 | |
| Asetik anhidrit | Sigma Aldrich | 108247 | |
| Susuz magnezyum sülfat | Sigma Aldrich | 7487889 | |
| Bor triflorür etil eterat | Sigma Aldrich | 109637 | |
| Sığır serum albümini | Sigma Aldrich | 9048468 | |
| Bio-Gel P2 poliakrilamid | Bio-Rad | 1504118 | |
| Bis(siklopentadienil)hafniyum(IV) diklorür | Sigma Aldrich | 12116664 | |
| β-1, 4 Sığır sütünden galaktosil transferaz | Sigma Aldrich | 48279 | |
| Robotik pimli BioDot Kart teknolojisi SMP3 (Gizli Mikro Tespit Pimleri) | Arrayit | ||
| Seryum amonyum molibdat | TCI | C1794 | |
| Seryum amonyum nitrat | Sigma Aldrich | 16774213 | |
| Temiz cam slayt | Schott | ||
| Cytidine-5′-monofosfo-N-asetilnöraminik asit | Sigma Aldrich | 3063716 | |
| Döteryumlu kloroform | Sigma Aldrich | 865496 | |
| Eşek Anti-İnsan IgG (Alexa Fluor647 konjuge | Jackson Immuno Research, ABD | 709605098 | |
| Diklorometan | Sigma Aldrich | 75092 | |
| Dietilaminosülfür triflorür | Sigma Aldrich | 38078090 | |
| Dimetilformamid | Sigma Aldrich | 68122 | |
| Etil asetat | Sigma Aldrich | 141786 | |
| Etilen glikol | Acros Organik | 107211 | |
| HIZLI çerçeve slayt kuluçka odaları | Sigma Aldrich | ||
| Guanozin 5'- difosfo-b-L-fukoz disodyum tuzu | Sigma Aldrich | 15839700 | |
| Lab tracer 2.0 yazılımı | Protokolün 4. bölümü | ||
| GenePix Pro 4300A okuyucu (mikrodizi görüntü analizi) | moleküler cihazlar | www.moleculardevices.com | |
| GraphPad Prism Software (Görüntü işleme) | GraphPad Software, Inc | http://www.graphpad.com/guides/prism/6/user-guide/ | |
| Lityum hidroksit | Sigma Aldrich | 1310652 | |
| Manganez klorür | Sigma Aldrich | 7773015 | |
| Metanol | Sigma Aldrich | 67561 | |
| N-bütanol | Sigma Aldrich | 71363 | |
| Oksalik asit | Acros Organik | 144627 | |
| Paladyum hidroksit | Sigma Aldrich | 12135227 | |
| Fosfat Tamponlu Tuzlu | Su Termo Fisher Scientific | ||
| Piridin | Sigma Aldrich | 110861 | |
| P-Toluen sülfonik asit monohidrat | Sigma Aldrich | 773476 | |
| Gümüş triflat, | Sigma Aldrich | 2923286 | |
| Sodyum bikarbonat | Sigma Aldrich | 144558 | |
| Sodyum klorür | Sigma Aldrich | 7647145 | |
| Sodyum hidrojen karbonat | Sigma Aldrich | 144558 | |
| Sodyum metoksit | Sigma Aldrich | 124414 | |
| Sodyum sülfat | Sigma Aldrich | 7757826 | |
| Toluen | Sigma Aldrich | 108883 | |
| Tris tamponu | Amresco | N / A | Ultra saf sınıf |
| Tween-20 | Amresco | 9005645 | |
| Uridin difosfat galaktoz (UDP-galaktoz) | Sigma Aldrich | 137868521 |
Kaynaklar
- Kim, P. J., Lee, D. Y., Jeong, H. Centralized modularity of N-linked glycosylation pathways in mammalian cells. PloS one. 4, e7317(2009).
- Townsley, S., Li, Y., Kozyrev, Y., Cleveland, B., Hu, S. L.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
