Grip A virüs (IAVs) önemli insan solunum patojenler vardır. İnsan fizyolojisi taklit hayvan modelleri IAVs patojenitesi anlamak ve preklinik roman aşı yaklaşımlar sınamasını gerçekleştirmek için gereklidir. Burada, biz IAV Patogenez, humoral yanıt ve enfeksiyon bir fare modeli kullanarak aşı etkinliğini değerlendirmek için teknikler açıklanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Grip A virüs enfeksiyonu bir fare modeli çalışmalarda
Bu makalede
Özet
Özet
Grip virüsleri 500.000 ölüm dünya çapında1 neden ve 12-14 milyar USD Amerika Birleşik Devletleri tek başına doğrudan tıbbi ve hastaneye yatış masrafları ve iş devamsızlık2göz önünde bulundurarak bir yıllık ücret ile ilişkilidir. Hayvan modelleri viral Patogenez, ana bilgisayar-patojen etkileşimleri, bağışıklık yanıtı değerlendirmek için grip A virüs (IAV) çalışmalarda açısından büyük önem taşıyor ve antiviral yanı sıra geçerli ve/veya roman aşı etkinliği yaklaşıyor. Bağışıklık sistemi örümceklerle insanlarda bulunan benzer çünkü fareler bir avantajlı küçük hayvan modeli değildir, onlar are elde edilebilir--dan genetik olarak aynı konular olarak ticari satıcı, değerlendirmek için istismar birden fazla suşları vardır enfeksiyonlar, genetik temeli ve onlar are oranla ucuz ve kolay işlemek. Solunum yolları üzerinden insanlarda IAV enfeksiyon özetlemek için fareler ilk uygun Biyogüvenlik koruma altında bulaşıcı IAVs ile burunici aşılama öncesinde anestezi. Enfeksiyon sonra IAVs patogenezinde günlük (vücut kilo kaybı) morbidite ve mortalite (hayatta kalma) izleme tarafından belirlenir. Buna ek olarak, viral Patogenez Ayrıca virüs çoğaltma üst (nazal Mukoza) veya daha düşük (akciğerler) solunum yolu virüslü fareleri değerlendirmek tarafından değerlendirilebilir. Humoral yanıt üzerine IAV enfeksiyon hızla non-invaziv kanama veya değerlendirmeye ikincil antikor algılama tarafından deneyleri yönelik toplam varlığı tespit veya antikorları nötralize. Burada, fareler intranasally bulaştırmak için kullanılan ortak yöntemleri (ın) IAV ile açıklamak ve Patogenez, humoral bağışıklık yanıtı ve koruma etkinliği değerlendirin.
Giriş
IAVs Orthomyxoviridae aile3' te gizli saran virüsler vardır. Onlar sekiz tek iplikçikli RNA molekülleri ile negatif polarite3içerir. Roman virüslerden insan nüfusunun4' te tanıttığında insanlarda, mevsimlik salgın hastalıklar ve ara sıra salgınları önemli sonucu IAVs neden. Ayrıca, mevsimlik IAVs yükseltilmiş bir ekonomik kayıp dünya çapında her yıl2,5üreten insanlar arasında son derece ve hızla iletilir. Öksürük, burun tıkanıklığı, ateş, kırgınlık, baş ağrısı, iştahsızlık ve miyalji IAV belirtileri içerir, ancak virüs daha ağır b....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
burada anlatılan tüm hayvan iletişim kuralları kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) ve Rochester Tıp Fakültesi ve diş hekimliği Üniversitesi Kurumsal Biyogüvenlik Kurulu (IBC) tarafından kabul edildi ve uygun Bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları Ulusal Araştırma Konseyi 22 ile öneriler Kılavuzu. İmkanları ve Vivarium ve bölünme laboratuvar hayvan Tıp Fakültesi Tıp Fakültesi ve diş hekimliği programları AAALAC International tarafından akredite edilmiştir ve hukuk devleti, federal yasa ve ulusal kurumları Sağlık (NIH) İlkesi ile uyumlu. Benzer gereksinimleri bu el yazması açıklanan hayvan iletişim kurallarına uymaları her kurumda uygulanan.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Fareler viral patogenezinde karakterizasyonu
IAV patogenezinde morbidite ve mortalite onun enfeksiyonu neden ilgilidir. Bu iki parametre farelerde kolayca değerlendirilebilir: IAV morbidite virüslü farelerde vücut kilo kaybı ile ilişkili ve ölüm oranı (Resim 1) hayatta kalma yüzdesini gösterir. Vücut ağırlığı ve hayatta kalma IAV enfekte farelerde genellikle her gün en az iki hafta sonra enfeksiyon
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
IAV fare modeli IAV Patogenez, immünojenisite ve koruma etkinliğinin in vivo çalışmalar için yaygın olarak kullanılır. Fareler küçük boyutunu değiştirmek ve yaban gelinciği veya eskiden şiling şimdi pigs gibi hayvan diğer modeller ile karşılaştırıldığında depolamak kolaylaştırır. Ayrıca, kolaylığı açısından maliyet hayvan konut ve üreme hayvanlar çok sayıda gerekli önceden klinik aşı testlerinde kullanımlarını sağlar. Özellikle, beri fareler içinde kullanılan birden çok araştırma disiplin, birkaç moleküler ve İm.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Grip virüsü LM-S laboratuvarında araştırma kısmen New York grip Center of Excellence (NYICE), NIAID merkezleri grip araştırma ve gözetleme (CEIRS) için mükemmel bir üyesi tarafından finanse edilmektedir. Biz Wendy Bates el yazması düzeltmeler onun desteği için teşekkür ederim.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Madin-Darby Köpek Böbreği (MDCK) epitel hücreleri | ATCC | CCL-34 | |
| Altı ila sekiz haftalık dişi C57BL/6 fareler | Ulusal Kanser Enstitüsü (NCI) | 01XBE | |
| Turckey kırmızı sarışın hücreler | Biolink Inc | Mağazası 4 & derece; C | |
| Dulbecco' s değiştirilmiş Kartal' s orta (DMEM) | Corning Cellgro | 15-013-CV | 4 &°C'de saklayın; C |
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | Seradigm | 1500-050 | -20 °C &°C'de saklayın; C |
| Penisilin / Streptomisin / L-Glutamin (PSG) 100x | Corning | 30-009-CI | -20 ° C'de saklayın; C |
| Penisilin / Streptomisin (PS) 100x | Corning | 30-00-CI | -20 ° C'de saklayın; C |
| Bovin Albümin çözeltisi (BA) | Sigma-Aldrich | A7409 | 4 & ° C'de saklayın; C |
| Bovin Serum Albümini (BSA) | Sigma-Aldrich | A9647 | 4 & deg'de saklayın; C |
| Tosilsülfonil fenilalanil klorometil keton (TPCK) ile muamele edilen tripsin | Sigma-Aldrich | T8802 | -20 ° C'de saklayın; C |
| Nötr Tamponlu Formalin% 10 | EMD | 65346-85 | RT |
| Triton X-100'de | JTbaker | X198-07 | RT |
| Monoklonal Antikor anti-NP İnfluenza A Virüsü HB-65 | ATTC | H16-L10-4R5'te | saklayın -20 &°C'de saklayın; C |
| Poliklonal tavşan anti-fare immünoglobulinleri / FITC | Dako | F0261 | 4 & deg'de saklayın; C |
| ECL Anti-fare IgG, Yaban turpu Peroksidaz bağlantılı tüm antikor | GE Healthcare | LNA931V/AG | Mağazası 4 & derece; C |
| TMB alt tabaka seti | BioLegend | 421101 | 4 > C |
| Vmax Kinetik plaka okuyucu | Moleküler Cihazlar | ||
| Dounce Doku Öğütücüler | Thomas Scientific | 7722-7 | |
| Reseptör yok edici enzim, RDE (II) | Denka Seiken Co. | 370013 | -20 ° C'de saklayın; C |
| Kristal Menekşe | Fisher Scienctific | C581-100 | RT'de saklayın |
| 96 kuyulu Hücre Kültürü Plakası | Greiner Bio-one | 655-180 | |
| Hücre Kültürü kapları 100 mm | Greiner Bio-one | 664-160 | |
| Nunc MicroWell 96 Kuyulu | Mikroplakalar Thermo Fisher Scienctific | 269620 | |
| Nunc 96 Kuyulu Polistiren Konik Tabanlı MicroWell Plakaları | Thermo Fisher Scienctific | 249570 | |
| Puralub Vet Merhem | Dechra | 9N-76855 | |
| Floresan mikroskop | Olympus Olympus IX81 |
Kaynaklar
- Girard, M. P., Cherian, T., Pervikov, Y., Kieny, M. P. A review of vaccine research and development: human acute respiratory infections. Vaccine. 23 (50), 5708-5724 (2005).
- Arnold, S., Monto, M. D. Epidemiology and Virology of Influenza Illness. Am J Manag Care. 6
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
