Ivacaftor, büyük metabolitleri ve Lumacaftor Kistik fibrozis hastalarının biyolojik sıvı içinde klinik örnekler yüksek üretilen iş analizi için en iyi duruma getirilmiş LC-MS/MS yöntemi

Summary

Ivacaftor ve ivacaftor-lumacaftor iki yeni CF ilaç bileşimidir. Ancak, hala bir kıtlık PK/PD ve Farmakoloji anlayış yoktur. Biz ivacaftor ve onun büyük metabolitleri ve lumacaftor aynı anda analizi için en iyi duruma getirilmiş bir HPLC-MS tekniği mevcut.

Abstract

Kusurları Kistik fibrozis trans-membran gürültülerinden regülatör (CFTR) Kistik fibrozis (CF), pulmoner bulgular hayati bir hastalığa neden olur. Ivacaftor (IVA) ve ivacaftor-lumacaftor (LUMA) kombinasyonu doğrudan faaliyet ve arızalı CFTR proteini kaçakçılığı modüle iki yeni atılım CF ilaçlardır. Ancak, hala bir kıtlık farmakokinetik/Farmakodinamik Parametrelerdeki anlayış ve Farmakoloji, ivacaftor ve lumacaftor yoktur. İvacaftor, hydroxymethyl-ivacaftor, ivacaftor-karboksilat ve lumacaftor hastalarda standart ivacaftor veya ivacaftor-lumacaftor kombinasyon biyolojik sıvı içinde konsantrasyonları eşzamanlı analizi için HPLC-MS tekniği Terapi oldu daha önce bizim grubu tarafından geliştirilen ve kısmen FDA standartlarına doğrulanmıştır. Ancak, hasta örnekleri daha çok sayıda yüksek üretilen iş analizine izin vermek için bizim grup bildirilen yönteminin kullanılmasıyla bir daha küçük gözenek boyutu ters faz Kromatografi sütun en iyi duruma getirilmiş (2.6 µm, C8 100 Å; 50 x 2.1 mm) ve bir degrade çözücü sistemi ( 0-1 dk: %40 B; 1-2 dk: 40-%70 B; 2-2.7 min: %70 B; düzenlenen 2.7-2.8 min: 70-%90 B; 2.8-4.0 min: %90 B çamaşır; 4.0-4.1 min: 90-%40 B; 4.1-6.0 min: %40 B düzenlenen) bir isocratic elüsyon yerine. Bu çalışmanın amacı sadece 6 dk çok sayıda hasta numuneleri analiz için gerekli olan örnek başına önemli ölçüde ~ 15 dk örnek başına HPLC-MS analiz süresini azaltmak için oldu. Bu amaca uygun yöntem bu atılım CF ilaçların pozlama-yanıt ilişkilerinin içine çalışmaları için önemli yardımcı olacaktır.

Introduction

Kistik fibroz (CF) akciğer, karaciğer, pankreas ve akciğer fonksiyon ve pankreas yetmezliği^1, bir düşüş gibi ilerici çoklu organ yetmezliği neden bağırsak ekzokrin mukus bezlerinin içeren yaygın bir genetik hastalık olduğunu ^2,3. Ivacaftor (IVA) ilk gıda ve İlaç İdaresi (FDA-ABD) ve Avrupa ilaç Ajansı (EMA) Kistik fibrozis trans-membran gürültülerinden regülatörü (CFTR) güçlendiricisini uyuşturucu, önemli bir üretim kanıtladığı klinik etkinlik ile kabul G551D-CFTR taşıyan CF hastalarda Akciğer işlev üzerinde küçük bir alt plasebo iyileşme [glisin (G) 551 konumda yerine aspart....

Protocol

etik onaya Monash Üniversitesi insan araştırma Etik Komitesi (MUHREC üzerinden) elde edilen.

1. testin uygulama: hasta örnek toplama

1. ne zaman hasta kendi standart doz 150 mg ivacaftor ya da ivacaftor 125 mg /lumacaftor süresini kaydetmek 200 mg.
2. Not aşağı ne zaman hasta kan örneği toplanır tam zamanı.
   Not: 24 h saat boyunca 4-5 örnek toplama önerilir. Sadece bir örnek topluluğu mümkün ise, C _max konsantrasyonları kararlı duruma, sonra ulaşılabilir olacak gibi belirtilen süre 2,5-4 h mesaj ivacaftor veya ivacaftor-lumacaftor birlikte dozaj noktasıdır > 5 gün üst üste tedavi.
3. 4-5 mL kan ti....

Results

Son zamanlarda su (40:60 0 ACN ve %0,1 formik asit oluşan mobil faz ile C8 sütun (5 µm, 3.9 mm x 50 mm kimlik) kullanarak kısmen bir triple quadrupole LC-MS ve HPLC Dedektör sistemi, FDA standartlarına doğrulanmış bir yöntem bildirdin v/v) 1 mL/dk akış hızında. Doruklarına doğrusal bir ilişki tüm metabolitleri, ivacaftor, IVA-M1, IVA-M6 ve lumacaftor¹⁴insan plazma 10 µg/ml 0,01 bir konsantrasyon aralığında gözlendi. Burada bu yöntem optimize edilmiş önemli ölçüde izin vermek için LC saklama kez ve.......

Discussion

Have için ilk geliştirilen ve HPLC ve LC-MS yöntemi hızlı algılama ve ivacaftor ve onun büyük metabolitleri hydroxymethyl-IVA M1 (etkin) ve IVA-karboksilat M6 (etkin değil); miktar için doğrulanmış önceden bildirildiği gibi bizim grup ve lumacaftor plazma ve balgam CF hastalarda¹⁴. Bizim grup daha önce rapor tahlil başarıyla LUMA, IVA, IVA-M1 ve IVA-M6 plazma konsantrasyon ve kararlı duruma standart tedavi IVA 150 mg /q12 s ile geçiren CF hastalarda balgam ölçmek için kullanılan (Latince terminolo.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
IVA (Kedi # S114)	SelleckChem (ABD).
LUMA (Kedi # S1565)	SelleckChem (ABD).
IVA-karboksilat (Kat# 510242247CS)	Clearsynth (Kanada).
hidroksimetil-IVA (Kedi # 510240849CS)	Clearsynth (Kanada).
Metanol (MeOH, LC-MS sınıfı),	Sigma-Aldrich
asetonitril (ACN, LC-MS sınıfı)	Sigma-Aldrich
formik asit (FA)	Sigma-Aldrich
üçlü dört kutuplu Shimadzu 8030 LC-MS
Phenomenex Kinetex (2.6 & mikro; m C8 100 Å; 50 ve kez; 2,1 mm)
(KrudKatcher Ultrea HPLC Sıralı Filtre 0,5 m Derinlik Filtresi x 0,004 inç).
1.5 mL polipropilen mikrosantrifüj tüpü (VWR).
Eppendorf Santrifüj 5430
13 mm şırınga filtresi (0,45 & mikro; m naylon, GRACE, ABD)
[Phenomenex VEREX, 9 mm, PP, 300 & L, PTFE / Silikon septa].