Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Non-invaziv Vivo içinde Bioluminescence sistemi tarafından fare konak Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonizasyon algılama

9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/56169

⸱

9 Nisan 2018

 ,  , 
1Institute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University

Bu makalede

Özet

Bir fare modeli enterohemorrhagic bioluminescence etiketli bakteri kullanarak E. coli (EHEC) kolonizasyon için detaylı bir protokol sunulmuştur. Kollarındaki bu bakteriler tarafından bir non-invaziv görüntüleme sistemi içinde canlı hayvan vivo içinde tespiti geçerli anlayışımız EHEC kolonizasyon ilerletebilirsiniz.

Özet

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157: H7, hangi o causesdiarrhea, Hemorajik kolit (HS), gıda kaynaklı patojen olduğunu ve hemolitik üremik Sendromu (HUS), kolonize insanlar bağırsak için. EHEC kolonizasyon içinde vivo detaylı mekanizması çalışmaya EHEC kolonizasyon ölçmek ve izlemek için hayvan modelleri olması esastır. Burada bir fare-EHEC kolonizasyon modeli kollarındaki ifade plazmid EHEC izlemek ve yaşam ana EHEC kolonizasyon ölçmek için dönüşüm tarafından göstermektedir. Bioluminescence etiketli EHEC ile aşılanmış hayvanlar yoğun kollarındaki sinyalleri farelerde algılama tarafından görüntüleme sistemi bir non-invaziv vivo içinde ile göstermek. Sonra 1-2 gün enfeksiyon sonrası, kollarındaki sinyalleri hala enfekte hayvanlarda da EHEC konaklarda en az 2 gün için kolonize gösterir tespit edilemedi. Biz de bu kollarındaki EHEC bulun ki fare Bağırsaklarda, özellikle çekum ve iki nokta üst üste, için ex vivo imge--dan göstermek. Bu fare-EHEC kolonizasyon model EHEC kolonizasyon mekanizma mevcut bilgi ilerlemek için bir araç olarak hizmet verebilir.

Giriş

EHEC O157: H7 nedenleri ishal1, HS2, HUS3ve hatta Akut böbrek yetmezliği4 kontamine su veya gıda ile bir patojen var. EHEC patojenik bir enterobacterium olduğunu ve insanların1gastrointestinal sistem colonizes. EHEC ilk uygun zaman ana bağırsak epiteli, kolonizasyon faktörler bir bağlama inducing ve daha sonra zorlamak için (A/E) lezyon effacing moleküler bir şırınga işlev gören tür III salgı sistemi (T3SS) ile ana hücreleri içine enjekte yapışma (kolonizasyon)5. Bu genlerin A/E lezyon oluşumunda yer alan Enterocytes efasman (LEE) patojenitesi ada5locus tarafından kodlanır.

Bioluminescence olduğunu ışık üreten kimyasal reaksiyon, görünür ışık6oluşturmak için onun substrat biyoluminesans hangi luciferase tromboksan. Enzimatik bu işlem genellikle oksijen veya adenozin trifosfat (ATP)6varlığını gerektirir. (BLI) görüntüleme bioluminescence araştırmacılar canlı hayvan7görselleştirme ve ana bilgisayar-patojen etkileşimlerin niceleme sağlar. Saçınıza canlı hayvan bakteriyel enfeksiyon döngüsünde onlar göç ve farklı dokular7istila kollarındaki bakteri izleyerek karakterize olabilir; Bu enfeksiyon dinamik bir ilerleme ortaya koymaktadır. Ayrıca, hayvanlarda bakteri yükü kollarındaki sinyal8' e ilişkilidir; Böylece, deneysel hayvan patolojik şartları basit ve doğrudan bir şekilde tahmin etmek için uygun bir göstergedir.

Burada kullanılan plazmid luciferase operon, bakteri, kendi luciferase substrat7,9kodlar Photorhabdus luminescens olan luxCDABE, yer. Bu luciferase ifade plazmid bakteri dönüştürerek, canlı hayvan kollarındaki bu bakteri gözlemleyerek kolonizasyon ve enfeksiyon işlemleri izlenebilir. Genel olarak, alma ve bioluminescence etiketli bakteri araştırmacılar bakteri numaraları ve konumu, bakteriyel canlılığı antibiyotikler/tedavi ve bakteri gen ekspresyonu enfeksiyon/kolonizasyon6, ile izlemek izin 7. çok sayıda patojen bakteri enfeksiyonu onların enfeksiyon döngüsü ve/veya gen ifade incelemek için luxCDABE operon express bildirilmiştir. Bu bakterilerin uropathogenic E. coli10, EHEC8,11,12,13, enteropathogenic de dahil olmak üzere, E. coli (EPEC)8, Sitrobacter rodentium14,15, Salmonella typhimurium16, Listeria Monositogenez17, Yersinia enterocolitica18,19, ve Vibrio cholerae20, dokümante edilmiştir.

EHEC kolonizasyon vitro ve in vivo21,22,23çalışma kolaylaştırmak için çeşitli modeller geliştirilmiştir. Ancak, EHEC kolonizasyon vivo içindeçalışmaya uygun hayvan modellerin eksikliği ve böylece ayrıntılar ortaya çıkan bir yetersizliği olduğunu. EHEC kolonizasyon mekanizması vivo içindeçalışma kolaylaştırmak için gözlemlemek ve non-invaziv bir yöntem canlı hayvan EHEC kolonizasyon ölçmek için hayvan modelleri oluşturmak için değerlidir.

Bu el yazması kollarındaki ifade sisteminin EHEC kolonizasyon zaman içinde yaşayan ana bilgisayarları izlemek için kullandığı bir fare-EHEC kolonizasyon modeli açıklar. Fareler intragastrically bioluminescence etiketli EHEC ile aşılanmış ve kollarındaki sinyal farelerde sistem13Imaging bir non-invaziv vivo içinde ile algılanır. Sonra 2 gün sonra 2 gün enfeksiyon sonrası bu bakteri konak bağırsaklarda kolonize önerilen enfeksiyon sonrası önemli kollarındaki sinyalleri onların bağırsaklarda gösterdi EHEC bioluminescence etiketli fareler bulaşmış. Ex vivo görüntü verilerini bu kolonizasyon özellikle çekum ve kolon farelerin olduğunu gösterdi. Bu fare-EHEC modelini kullanarak, kollarındaki EHEC kolonizasyon yaşam ana bilgisayarında bir görüntüleme sistemi daha fazla anlayış teşvik edebilir enterik bakteri kolonizasyonu detaylı mekanizmaları incelemek için in vivo tarafından tespit edilebilir EHEC kaynaklı fizyolojik ve patolojik değişiklikler.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Dikkat: EHEC O157: H7 Biyogüvenlik seviye 2 (BSL-2) olan patojen merkezleri hastalık kontrol ve Önleme (CDC) Biyogüvenlik talimat (https://www.cdc.gov/) göre. Bu nedenle, tüm deneysel prosedürler EHEC içeren BSL-2 tesisinde gerçekleştirilmelidir. Laboratuvar mont ve eldiven giymek deney yaparken. Bir Sertifikalı Biyogüvenlik içinde dolap (BSC) çalışır. Deneysel kürsüye önce ve deneysel bir işlem ile % 70 etanol sonra dezenfekte. Bütün aletleri veya ekipman kişi (veya potansiyel kişi) EHEC % 70 etanol veya çamaşır suyu ile dezenfekte. Kirlenmiş (veya potansiyel olarak kontamine) atıkların dikkatle mühürlü ve autoclaved olmalıdır. Bir maske, göz koruması, çift eldiven veya tulum, gerekirse giymek. 6-hafta-yaşlı C57BL/6 dişi fareler satın ve laboratuvar hayvan Merkezi, ulusal Cheng Kung Üniversitesi (NCKU) yapılmaktadır. Hayvan deneyleri kurumsal hayvan bakım ve kullanım NCKU Komitesi (onay numarası 104-039) tarafından kabul edildi.

1. Bioluciferase etiketli EHEC bakteri üretimi

  1. Mix 50 ng deoksiribonükleik asit (DNA), 1 μL her 10 mikron ileriye ve geriye doğru astar, 2 μL 2.5 mM deoxynucleotides (dNTPs), 2 μL 10 x arabellek, 0.2 μL DNA polimeraz ve steril çift distile su (GKD2O) yükseltmek için 20 μL son hacmiyle Anti-sefaloridin kaset, nptII gen24. PBSL18024Ulusal BioResource Projesi (NBRP) üzerinden satın alınan, DNA şablonudur. PCR koşulları Tablo 1 ' de listelenen ve astar sıra Tablo 2' de kullanılabilir.
  2. PCR ürünleri ticari bir klonlama vektör seti takip için ligate ( Tablo malzemelerigörmek) protokol.
  3. NptII gen parçası NsiI ve SmaI klonlama vektöründen tüketim ve sefaloridin dayanıklı plazmid oluşturmak için pAKlux29 NsiI ve ScaI tarafından sindirilmiş pBBR1MCS4 içine clone, pWF27813.
  4. Plazmid9, pAKlux2, SpeI-HF ve ScaI ve klon tarafından ifade luciferase üzerinden luxCDABE operon tüketim SpeI-HF ve SmaI sefaloridin oluşturmak için pWF278 sindirmek dayanıklı ve plazmid, pWF27913ifade luciferase.
    Not: plazmid çekimi ve eksize parçası purifications, ticari plazmid çıkarma ve jel ekstraksiyon kiti, sırasıyla kullanın. Enzim sindirim için 100 ng DNA, 1 μL 10 x tampon, her seçili restriksiyon enzimi ve steril GKD2O 10 μL, toplam hacmiyle 1 μL mix ve 2.5-3 h 37 ° C'de kuluçkaya.
  5. PWF279 plazmid elektroporasyon ile 2500 V 4 ms için tarafından E. coli O157: H7 EDL933 yetkili hücrelere dönüşümü.
  6. 1 mL Luria-Bertani (LB) orta 1 h için 37 ° C'de dönüştürülmüş bakteri hücrelerinde kuluçkaya.
  7. 16-18 h için 37 ° C'de sefaloridin 50 µg/mL ile desteklenmiş bir LB agar plaka üzerinde bakteri plaka.
  8. Plaka kollarındaki sinyal makine ertesi gün Imaging bir vivo içinde tarafından kontrol edin. Bir koloni plaka almak ve 3 ml 50 µg/mL sefaloridin 16-18 h için 37 ° C'de ile takıma LB kültür.
  9. Bakteriyel hisse senedi orta sulandrarak hazırlamak % 100 gliserol % 30 gliserol çözüm yapmak için steril GKD2O.
  10. Sefaloridin dayanıklı Don E. coli O157: H7 EDL933 bakteri olarak bakteri kültürü ve % 30 gliserol çözüm-80 ° C'de 1:1 oranında bir vidalı kapak cryovial bakteriyel bir hisse senedi olarak luciferase plazmid yataklık Gliserol son konsantrasyonu % 15 olduğunu.

2. kollarındaki EHEC bakteri hazırlık Oral aşılama için

Not: Zaman çizelgesi akış çizelgesi EHEC hazırlık ve fare oral gavaj deneysel prosedürleri deneysel hazırlanmasında yardımcı olmak için şekil 1 ' deki sunulur.

  1. Çizgi E. coli O157: H7 EDL933 bakteri luciferase plazmid 50 µg/mL sefaloridin-80 ° C stoktan bir LB agar plaka üzerine yataklık. 16-18 h 37 ° C'de için bakteri büyümesi
  2. Bir koloni gecede plaka ve kültür 3 mL LB orta 50 µg/mL sefaloridin 16-18 h 37 ° C kuluçka 220 RPM ile seç.
  3. Alt kültür için 2,5-3 h 37 ° C kuluçka 200 devirde LB suyu içeren bakteri (1: 100 seyreltme) sefaloridin (50 µg/mL). (Örneğin, 2 mL gecede takıma 200 mL LB orta sefaloridin (50 µg/mL) ile bakteri kültürlü ekleyin).
  4. Bakteri 2.5-3 h için kuluçkaya ve 600 optik yoğunluk değerini ölçmek nm (OD600) değeri olduğunu 0,9-1 arasında. Yaklaşık 108 koloni oluşturan birim (CFU) yoğunluğudur: bakteri hücre numarası / mL.
  5. 8000 x g 30 dk, 4 ° c'de yeniden kültürlü bakteri santrifüj kapasitesi
  6. Süpernatant bakteri Pelet Tantanacı olmadan atmak ve 100 mL % 0,9 steril normal salin ile pelet tarafından nazik ajitasyon yıkayın.
  7. 2.5 ve 2.6 bir kez adımları yineleyin.
  8. Wash sonra santrifüj kapasitesi 8000 x g 30 dk, 4 ° C de bakteri kültürü ve süpernatant yavaşça atın.
  9. Yoğuşma Pelet, 100-fold %0,9 steril normal salin ile. 200 mL bakteri centrifuged, örneğin, pelet askıya almak için 2 mL normal tuz ekleyin.
  10. (Yaklaşık 109 CFU/100 μL yoğunlaşma sonra normal salin olması gereken) CFU bakteri ile 10 kat seri seyreltme25konsantre bakteri kaplama tarafından onaylayın.

3. fare sözlü sonda ile besleme, EHEC

  1. 6-hafta-yaşlı kadın C57BL/6 fareler streptomisin su (5 g/L) için 24 h ile tedavi.
  2. 24 saat sonra normal içme suyu başka bir 24 saat daha önce sonda ile besleme için geçiş yapın. 24 h için düzenli su ile tedavi sonra fareler EHEC oral gavaj için hazırsınız demektir.
  3. Şırınga ile 100 μL EHEC bakteri üzerinde pistonu geri çekerek doldurun. Şırıngada hava hava kabarcığı yok olduğundan emin olun. Baloncuklar şırınga ile parmaklarını şaklatarak kaldırın.
  4. Hayvan yavaşça kaldırın ve bakım ile kafes üstüne yerleştirin.
  5. Fareyi kuyruğundan dikkatle tutun ve hayvan kafes üst kavrama ve uzaklaşmaya girişimi.
  6. Yavaşça fare derisi boyun ve arka başparmak ve işaret parmağı fare başkanı taşınmasını engelleme hayvanla açgözlü tarafından dizginlemek.
  7. Fare sonda ile besleme iğne yerleştirin ve fare immobilize ve dikey başıdır emin olmak için bir dikey konumda tutun.
  8. Sonda ile besleme iğneyi ağız çatı takip fare ağzına yerleştirin ve yemek borusu ve mide doğru aşağı taşı.
  9. Eklenen iğne yarısı veya üçte iki uzunluğu fare olduğunda yaklaşık 109 CFU hücreleri içeren 100 μL EHEC bakteri enjekte et.

4. görsel öğe

  1. Oral gavaj sonra 1-2 gün kollarındaki sinyalleri algılayabilir.
  2. Hayvanların kollarındaki sinyalleri inceleyerek önce onları % 2.5 isoflurane 1, 5 L/dk oksijen ile TMMOB içine koyarak onları anestezi.
  3. Olana kadar tüm fareler bilinçsiz ve hareket durdurmak için 2-5 dk bekle. Hayvanlar bioluminescence vivo içinde tespiti için hazırsınız demektir.
  4. Algılamak ve hayvanların kollarındaki sinyalleri görüntüleme sistemi bir vivo içinde tarafından görüntü. Bölüm 5 "Veri toplama" yazılım işlem için bakınız. Görüntüleme işlemi sırasında tüm % 2.5 isoflurane 1, 5 L/dk oksijen ile sürekli bir tedarik altında hayvanlardır.
    1. Tıkırtı eğe > canlı ve el ile fare üzerinde odaklanmak.
    2. Pozlama zaman ve lazer yoğunluğunu seçin.
    3. Tıklama elde etmek > yakalamak.
  5. Ex vivo görüntüleme için fareler tarafından servikal çıkığı ötenazi ve virüslü fareleri tüm bağırsak kaldırın. Bağırsak bir 9-cm Petri kabına ve resim görüntüleme sistemi içinde vivo tarafından yerleştirin. Aynı görüş alanı A/b olarak ayarlanır dışında vivo içinde görüntüleme ayardır Lütfen ayrıntılar için Bölüm 5 "Veri toplama" bakın.
    Not: Yöntem servikal yerinden çıkması için: kafes üstünde fare böylece hayvanları kafes kavrama tek elle kuyruk açgözlü dizginlemek. Pen marker veya başparmak ve ilk parmak boyun arkası karşı diğer el kafatası tabanında yer. Hızlı bir şekilde el veya nesne ile baş frenleyici push ileri ve kuyruğunu tutan el ile geri çekin.
    Yakından solunum durması ve kalp atışı yoktu onaylamak için kontrol edin.

5. veri toplama

Not: yazılım veri toplama için kullanılan Malzemeler tablolistelenir.

  1. Resim alma için satın alma kontrol panelinin yazılımı (Şekil 2) açın.
  2. Seç "ışıklı," "Fotoğraf" ve "Overlay"
  3. Pozlama süresi "Otomatik" olarak ayarlayın "Orta" Binning ayarla
  4. Işıksaçan ve 8 için ƒ/1 durağı ayarlamak fotoğraf için. Ƒ/durdur denetimleri ışık miktarını CCD algılayıcısı tarafından aldı.
  5. Görüntüleri elde etmek için ilgi alanına göre görüş alanı ayarlayın. Seçenek "D" beş 6-hafta-yaşlı fareler uygun ve onları teker teker görüntü. "C" üç 6-hafta-yaşlı fare bir alandaki görüntü.
  6. Fare/örnekleri görüntüleme için hazır olduğunuzda, resim alma için "Al" düğmesini tıklatın.
  7. Satın alınan görüntü verilerini açın.
  8. Araç paleti paneli (şekil 3) açın.
  9. ROI araçlarını seçin. Daire (en soldaki bir) (şekil 4) görüntülerde kollarındaki alan aralığı için tavsiye ediyoruz.
  10. "Ölçü yüzey kollarındaki yoğunluğu (şekil 3) ölçmek için ROIs" (kalem simgesi) tıklatın. Yatırım Getirisi ölçümleri panelinde ve miktar değerleri (şekil 5) görünür.
  11. Yapılandırmak ölçü ROI ölçüm panelinin sol köşesinde değerleri/gerekli bilgileri (şekil 6) seçin, aksi takdirde "Bu veri tablosunu verin ve .csv dosyası (şekil 5) olarak kaydetmek için Dışa Aktar" düğmesini tıklatın için kullanın.
  12. Kollarındaki yoğunluğu miktar .csv dosyasındaki değerleri sütun "Toplam akı (p/s)" kullanın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bioluminescence etiketli EHEC yönetilen (~ 109 bakteri hücreleri) 6 - hafta eski kadın C57BL/6 farelere oral gavaj tarafından. EHEC farelere 1s içinde sözlü aşı sonra hayvanlar kollarındaki sinyali VIVO içinde görüntüleme sistemi Şekil 7gösterildiği gibi tarafından incelenmiş. Sonuçlar sonda ile besleme farelerde bioluminescence etiketli EHEC ile güçlü bir kollarındaki sinyal gösterdi. Biz 2 gün sonrası enfeksiyon sinyalleri inceledi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu luciferase plazmid ile dönüştürülmüş EHEC onun Yerelleştirme Ana bilgisayarlar veya gen ifade vivo içinde8,11,12incelemek için kullanılan bildirilmiştir. Aşağıda gösterildiği fare modeli ayrıca fare ana bilgisayar8' bulmak belgili tanımlık kolonize EHEC zamanlama ve yerelleştirme bildirilmiştir. Yine de, biz, farelere EHEC aşılama intragastrically yönetmek ve kollarındaki bakteri oral gavaj iç...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Chi-Chung Chen üzerinden Bakanlığı tıbbi araştırma, Chi Mei Tıp Merkezi (Tainan, Tayvan) fare yardım için enfeksiyon ve ulusal Cheng Kung Üniversitesi laboratuvar hayvan merkezinden destek anıyoruz. Bu eser bilim Bakanı tarafından desteklenir ve Teknoloji (en) CC için (en 104-2321-B-006-019, 105-2321-B-006-011, and106-2321-B-006-005) verir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Çalkalayıcı kuluçka makinesiYIH DERLM-570Rbakteri inkübasyonu 
Orbital çalkalama inkübatörüFIRSTEKS300bakteri inkübasyonu 
pBSL180nptII geninin kaynağı
pAKlux2luxCDABE operon
T& TA klonlama için bir Klonlama KitiYeast BiotechFYC001-20Pkullanımı 
Nsi INEBR0127Splazmid klonlama için kullanın 
Sca NEBR0122Splazmid klonlama için kullanılır 
Spe I-HFNEBR0133Splazmid klonlama için kullanın 
Sma I NEBR0141Splazmid klonlama için kullanılır 
T4 ligazNEBM0202Skullanımı 
PCR amplifikasyonu içinExTaq TaKaRaRR001A
10X Ex Taq TamponuTaKaRaRR001APCR amplifikasyonu için kullanım
dNTP Karışımı PCR amplifikasyonu içinTaKaRaRR001A
PCR makinesiuygulanan Biyosistem 2720 Termal Döngüleyici ve nbsp;  PCR amplifikasyonu için
GliserolSIGMAG5516-1Lbakteri stoklama çözeltisi için kullanın
NaClSigma31434-5KG-Rkimyasalı LB ortamı yapmak için, 10 g/L
TriptonCONDA pronadisaCat 1612.00LB ortamı yapmak için kimyasal, 10 g/L
Maya Özü tozuAffymetrix23547-1 KGLB ortamı yapmak için kimyasal, 5 g/L
AgarCONDA pronadisaCat 1802.00LB agar
kanamisin yapmak için kimyasal SigmaK4000-5Gantibiyotikler, selekiton
streptomisinSigmaS6501-100Gantibiyotikler, farelerde mikrobiyotayı ortadan kaldırır
EDL933 yetkin hücreEv yapımıyöntem ek belgededir 
Elektroporasyon içinelektroporatör MicroPulser
ElektroporasyonKüvetleri Gene Pulser/MicroPulser1652086Elektroporasyon için
Yüksek hızlı santrifüjBeckman CoulterAvanti, J-26S XPbakterileri santrifüjlemek için kullanın 
Sabit Açılı RotorBeckman CoulterJA25.5kullanımı 
Sabit Açılı RotorBeckman CoulterJLA10.5kullanımı 
santrifüj şişeleriBeckman CoulterREF357003bakterileri santrifüjlemek için kullanılır 
santrifüj şişeleriThermo Fisher scientific3141-0500bakterileri santrifüjlemek için kullanın 
Eppendorf Biyofotometre Plus eppendorfAG 22331 hamburgfarelerinin OD600 değerini ölçmek için
 önlüğü Laboratuvar Hayvanları Merkezi
,personel koruması için
İzofluran Panyon & BF Biyoteknoloji A.Ş.Fare anestezisi içinG-8669
1ml şırınga ve nbsp;farelerin oral gavajı için kullanın
Yeniden kullanılabilir 22 G bilye uçlu besleme iğnesive phi; 0,9 mm X L 50 mmfarelerin oral gavajı için kullanım
cerrahi ve nbsp; makas & nbsp;fare deneyi için kullanın
Xenogen IVIS 200 görüntüleme sistemiPerkin ElmerIVIS spektrumubiyolüminesan görüntü yakalama için kullanın 
Living Image YazılımıPerkin Elmersürüm 4.1görüntü verilerini ölçmek için kullanılır
Plazmid klonlama için kullanımı kullanımı için kullanılır.Bakterileri santrifüjlemek için Bakterileri santrifüjlemek için bakteri C57BL/6 NCKU laboratuvar eldivenler ve nbsp;, farmasötik sınıf,

Kaynaklar

  1. Pennington, H. Escherichia coli O157. Lancet. 376 (9750), 1428-1435 (2010).
  2. Mayer, C. L., Leibowitz, C. S., Kurosawa, S., Stearns-Kurosawa, D. J. Shiga toxins and the pathophysiology of hemolytic uremic syndrome in humans and animals. Toxins (Basel). 4 (11), 1261-1287 (2012).
  3. Tarr, P. I., Gordon, C. A., Chandler, W. L. Shiga-toxin-producing Escherichia coli and haemolytic uraemic syndrome. Lancet. 365 (9464), 1073-1086 (2005).
  4. Obrig, T. G. Escherichia coli Shiga Toxin Mechanisms of Action in Renal Disease. Toxins (Basel). 2 (12), 2769-2794 (2010).
  5. Nguyen, Y., Sperandio, V. Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) pathogenesis. Front Cell Infect Microbiol. 2, 90(2012).
  6. Wiles, S., Robertson, B. D., Frankel, G., Kerton, A. Bioluminescent monitoring of in vivo colonization and clearance dynamics by light-emitting bacteria. Methods Mol Biol. 574, 137-153 (2009).
  7. Hutchens, M., Luker, G. D. Applications of bioluminescence imaging to the study of infectious diseases. Cell Microbiol. 9 (10), 2315-2322 (2007).
  8. Rhee, K. J., et al. Determination of spatial and temporal colonization of enteropathogenic E. coli and enterohemorrhagic E. coli in mice using bioluminescent in vivo imaging. Gut Microbes. 2 (1), 34-41 (2011).
  9. Karsi, A., Lawrence, M. L. Broad host range fluorescence and bioluminescence expression vectors for Gram-negative bacteria. Plasmid. 57 (3), 286-295 (2007).
  10. Lane, M. C., Alteri, C. J. S., Smith, S. N., Mobley, L. H. Expression of flagella is coincident with uropathogenic Escherichia coli ascension to the upper urinary tract. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (42), 16669-16674 (2007).
  11. Roxas, J. L., et al. Enterohemorrhagic E. coli alters murine intestinal epithelial tight junction protein expression and barrier function in a Shiga toxin independent manner. Lab Invest. 90 (8), 1152-1168 (2010).
  12. Siragusa, G. R., Nawotka, K., Spilman, S. D., Contag, P. R., Contag, C. H. Real-Time Monitoring of Escherichia coli O157:H7 Adherence to Beef Carcass Surface Tissues with a Bioluminescent Reporter. , (1999).
  13. Kuo, C. J., et al. Mutation of the Enterohemorrhagic Escherichia coli Core LPS Biosynthesis Enzyme RfaD Confers Hypersusceptibility to Host Intestinal Innate Immunity In vivo. Front Cell Infect Microbiol. 6, 82(2016).
  14. Wiles, S., et al. Organ specificity, colonization and clearance dynamics in vivo following oral challenges with the murine pathogen Citrobacter rodentium. Cell Microbiol. 6 (10), 963-972 (2004).
  15. Wiles, S., Pickard, K. M., Peng, K., MacDonald, T. T., Frankel, G. In vivo bioluminescence imaging of the murine pathogen Citrobacter rodentium. Infect Immun. 74 (9), 5391-5396 (2006).
  16. Contag, C. H., Contag, P. R., Mullins, J. I., Spillman, S. D., Stevenson, D. K., Benaron, D. A. Photonic detection of bacterial pathogens in living hosts. Mol Microbiol. 18 (4), 593-603 (1995).
  17. Hardy, J., Francis, K. P., DeBoer, M., Chu, P., Gibbs, K., Contag, C. H. Extracellular replication of Listeria monocytogenes in the murine gall bladder. Science. 303 (5659), 851-853 (2004).
  18. Kaniga, K., Sory, M. P., Delor, I., Saegerman, C., Limet, J. N., Cornelis, G. R. Monitoring of Yersinia enterocolitica in Murine and Bovine Feces on the Basis of the Chromosomally Integrated luxAB Marker Gene. Appl Environ Microbiol. 58 (3), 1024-1026 (1992).
  19. Trcek, J., Fuchs, T. M., Trulzsch, K. Analysis of Yersinia enterocolitica invasin expression in vitro and in vivo using a novel luxCDABE reporter system. Microbiology. 156 (Pt 9), 2734-2745 (2010).
  20. Morin, C. E., Kaper, J. B. Use of stabilized luciferase-expressing plasmids to examine in vivo-induced promoters in the Vibrio cholerae vaccine strain CVD 103-HgR. FEMS Immunol Med Microbiol. 57 (1), 69-79 (2009).
  21. Law, R. J., Gur-Arie, L., Rosenshine, I., Finlay, B. B. In vitro and in vivo model systems for studying enteropathogenic Escherichia coli infections. Cold Spring Harb Perspect Med. 3 (3), a009977(2013).
  22. Ritchie, J. M. Animal Models of Enterohemorrhagic Escherichia coli Infection. Microbiol Spectr. 2 (4), EHEC-0022-2013(2014).
  23. Chou, T. C., et al. Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans. Cell Microbiol. 15 (1), 82-97 (2013).
  24. Alexeyev, M. F., Shokolenko, I. N. Mini-Tnl 0 transposon derivatives for insertion mutagenesis and gene delivery into the chromosome of Gram-negative bacteria. Gene. 160 (1), 59-62 (1995).
  25. Wiegand, I., Hilpert, K., Hancock, R. E. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances. Nat Protoc. 3 (2), 163-175 (2008).
  26. Pansare, V., Hejazi, S., Faenza, W., Prud'homme, R. K. Review of Long-Wavelength Optical and NIR Imaging Materials: Contrast Agents, Fluorophores and Multifunctional Nano Carriers. Chem Mater. 24 (5), 812-827 (2012).
  27. Heim, R., Cubitt, A. B., Tsien, R. Y. Improved green fluorescence. Nature. 373 (6516), 663-664 (1995).
  28. Weissleder, R. A clearer vision for in vivo imaging. Nat Biotechnol. 19 (4), 316-317 (2001).
  29. Frangioni, J. In vivo near-infrared fluorescence imaging. Current Opinion in Chemical Biology. 7 (5), 626-634 (2003).
  30. Collins, J. W., et al. Citrobacter rodentium: infection, inflammation and the microbiota. Nat Rev Microbiol. 12 (9), 612-623 (2014).
  31. Mallick, E. M., et al. A novel murine infection model for Shiga toxin-producing Escherichia coli. J Clin Invest. 122 (11), 4012-4024 (2012).
  32. Petty, N. K., et al. The Citrobacter rodentium genome sequence reveals convergent evolution with human pathogenic Escherichia coli. J Bacteriol. 192 (2), 525-538 (2010).
  33. Kovach, M. E., Elzer, P. H., Hill, D. S., Robertson , G. T., Farris, M. A., Roop, R. M. II, Peterson, K. M. Four new derivatives of the broad-host-range cloning vector pBBR1MCS, carrying different antibiotic-resistance cassettes. Gene. 166 (1), 175-176 (1995).
  34. Galen, J. E., Nair, J., Wang , J. Y., Wasserman, S. S., Tanner, M. K., Sztein , M. B., Levine, M. M. Optimization of Plasmid Maintenance in the Attenuated Live Vector Vaccine Strain Salmonella typhiCVD 908-htrA. Infect Immun. 67 (12), 6424-6433 (1999).
  35. Francis, K. P., et al. Visualizing pneumococcal infections in the lungs of live mice using bioluminescent Streptococcus pneumoniae transformed with a novel gram-positive lux transposon. Infect Immun. 69 (5), 3350-3358 (2001).
  36. Goldwater, P. N., Bettelheim, K. A. Treatment of enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) infection and hemolytic uremic syndrome (HUS). BMC Med. 10, (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Enterohemorajik E ColiBiyolüminesans GörüntülemeIn Vivo GörüntülemeFare Kolonizasyon ModeliOral Gavage TekniğiLüminesans KantifikasyonuSekum KolonizasyonuKolon KolonizasyonuEx Vivo GörüntülemeNon-invaziv Tespit
Non-invaziv Vivo içinde Bioluminescence sistemi tarafından fare konak Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonizasyon algılama
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.