Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara

Jean-Baptiste Guy; Sophie Espenel; Alexis Vallard; Priscillia Battiston-Montagne; Anne-Sophie Wozny; Dominique Ardail; Gersende Alphonse; Chloé Rancoule; Claire Rodriguez-Lafrasse; Nicolas Magne

doi:10.3791/56337

Method Article

Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara

DOI:

10.3791/56337

⸱

November 17th, 2017

Jean-Baptiste Guy*¹^,² , Sophie Espenel*¹^,² , Alexis Vallard¹^,² , Priscillia Battiston-Montagne¹ , Anne-Sophie Wozny¹^,³ , Dominique Ardail¹^,³ , Gersende Alphonse¹^,³ , Chloé Rancoule¹^,² , Claire Rodriguez-Lafrasse¹^,³ , Nicolas Magne¹^,²

¹UMR CNRS 5822 /IN2P3, IPNL, PRISME, Laboratoire de Radiobiologie Cellulaire et Moléculaire, Faculté de Médecine Lyon-Sud, Université Lyon 1, ²Département de Radiothérapie, Institut de Cancérologie de la Loire - Lucien Neuwirth, ³Hospices Civils de Lyon, Centre Hospitalier Lyon-Sud

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada cep işgali ve geçiş analizi için iki farklı yöntem raporları: Boyden odası tahlil ve vitro video mikroskobu tabanlı yara iyileşmesi tahlil. Bu iki deney protokollerde açıklanmış ve kendi yararları ve dezavantajları karşılaştırılır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tümör hücreleri istila ve geçiş yeteneklerini kanser ilerlemesi ve yineleme için ana katkı kaynağı sağlamaktadır. Birçok çalışma nasıl kanser hücrelerinin yaymak yeni tedavi stratejileri geliştirmek amacı ile anlamak için geçiş ve işgal yeteneklerini incelemiş bulunuyoruz. Bu yeteneklerin hücresel ve moleküler temeli analizi hücre hareketlilik karakterizasyonu ve fizikokimyasal özellikleri sitoiskeleti ve hücresel microenvironment yol açmıştır. Uzun yıllar boyunca, Boyden odası tahlil ve sıfırdan yara tahlil cep işgali ve geçiş eğitim için standart teknikleri olmuştur. Ancak, bu iki teknik kısıtlamalar bulunmaktadır. Boyden odası tahlil zor ve zaman alıcı ve düşük tekrarlanabilirlik sıfırdan yara tahlil vardır. Mikroskobu, özellikle de modern teknolojilerin geliştirilmesini sıfırdan yara tahlil tekrarlanabilirlik artmıştır. Güçlü analiz sistemleri kullanarak, bir "içinde-kuluçka" video mikroskobu hücre göç ve işgal otomatik ve gerçek zamanlı analiz sağlamak için kullanılabilir. Amacı bu kağıt, rapor ve hücre işgali ve geçiş eğitim için kullanılan iki deneyleri karşılaştırın etmektir: Boyden odası tahlil ve bir en iyi duruma getirilmiş vitro video mikroskop esaslı çizik tahlil yara.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cep işgali ve geçiş direnci tedavi¹ ana nedeni kanser hücrelerinin, yayılması yer alırlar ve lokal veya metastatik yineleme sonra kanser tedavi²yol açabilir. Mezenkimal epitel geçiş (EMT) hücre Invasion-geçiş hangi kanser hücreleri bir epitel Mezenkimal bir fenotip geçiş ilk işlemidir. E-Cadherin epitel fenotip³hücre dışı bir işaretleyicidir ve artan N-cadherin ve vimentin Mezenkimal fenotip⁴karakteristik ifadesidir. Geçiş de matris metalloproteases⁵eylem yoluyla iç kapasite kanser hücrelerinin temel hücre dışı Matriks (ECM) işgal bağlıdır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Not: ECM dahil olmadan Boyden odası ve çizik deneyleri için geçiş tahlil olarak adlandırılır ve ECM ile aynı deneyleri işgali tahlil olarak adlandırılır.

1. Boyden odası tahlil

Not: Bu protokolü tekrarlayan bir baş ve boyun Skuamöz Hücre Karsinomu (HNSCC) gırtlak kanseri türetilir ve John elde edildi SQ20B hücre satırı için adapte Little (Boston, MA, USA).

Gün 1

Tohum hücre
1. Tohum 2 10⁶ SQ20B 175 cm² şişeye bir gün önce 72 h 12 mL kültür orta (CM) hücreleri ve hücrelerin % 80 hücre izdiham için büyümeye izin.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz burada hücre işgali ve geçiş analiz etmek için iki farklı yöntem raporu. Şekil 1 Boyden odası deneyi gösterir. Ekler chemoattractant orta ile bir arkadaşı tabak içine yerleştirilir ve hücreleri CM tohumlari. Membran kaplamasız olabilir (geçiş tahlil) veya (Invasion tahlil) kaplı. Hücre s-cm üst odasına numaralı seribaşı. Alt odası CM ile bir chemoattractant girilir. Hücreleri önce katlama zaman sabittir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz burada iki farklı yöntemler cep işgali ve geçiş işlemi çalışma raporu Bu süreç analizi bir subpopulation kanser kök hücreleri¹⁰^,¹¹adı verilen kanser hücrelerinin artan hareketliliği tarafından açıkladı metastatik yineleme katılan faktörler anlamak için önemlidir.

Boyden odası deneyi biridir en sık kullanılan teknikler keşfetmek için hücre işgali ve geçiş. Bu yaklaşımın bir avantajı, tekrarlanabilirlik olsa da bu teknik son derece d.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu teknikler LabEx ASAL (ANR-11-LABX-0063), ETOILE (CPER 2009-2013) ve lirik Grant İnka-DGOS-4664 bilimsel çerçevesinde Kervansaray'a planı-Etat-bölge (CPER) desteği ile geliştirilmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
Fetal Buzağı Serumu Altın	GE Healthcare	A15-151
Hidrokortizon suda çözünür	Sigma-Aldrich	H0396-100MG
Penisilin / Streptomisin 100 X	Dominique Dutscher	L0022-100
DMEM	Gibco	61965-026
F12 Fındık Karışımı (1X) + GlutaMAX-I	Gibco	31765-027
EGF	Promega	G5021	Çözelti kullanımdan hemen önce hazırlanmalıdır çünkü çok kararsızdır
Z1 coulter parçacığı	Beckman Coulter	6605698
Optik mikroskop	Olympus	CKX31
SQ20B hücre hattı	John Little'dan Hediye s	Laboratuvar-Yara
Yapıcı	Essen Bioscience	4494	Güvenli ve kuru yerde saklayın
96 kuyulu ImageLock Plate	Essen Bioscience	4379
CoolBox 96F CoolSink 96F Sistemi	Essen Bioscience	1500-0078-A00
M30 Sistemli CoolBox	Essen Bioscience	1500-0078-A00
Boyden Insert	Dominique Dutcher	353097
Boyden Kaplamalı Uç	Dominique Dutcher	354483	Mağazası -20 &°C; C
Companion 24 kuyulu Plaka	Dominique Dutcher	353504
BD Matrigel standardı	BD BioScience	BD 354234	-20°C.
RAL 555 Boyama Kiti	RAL Diagnostik	361550	Güvenli ve kuru bir yerde saklayın
Mikrosantrifüj tüpleri	Eppendorf	33511

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).
Moncharmont, C., et al. Radiation-enhanced cell migration/invasion process: A review. Crit Rev Oncol Hematol. , (2014).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles