DNA Manyetik Parçacık dinamik ve elektroforetik ışık saçılma göre analiz bağlama

Yazan Haddad; Simona Dostalova; Jiri Kudr; Ondrej Zitka; Zbynek Heger; Vojtech Adam

doi:10.3791/56815

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

DNA Manyetik Parçacık dinamik ve elektroforetik ışık saçılma göre analiz bağlama

11.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/56815

⸱

9 Kasım 2017

Yazan Haddad¹^,² , Simona Dostalova¹^,² , Jiri Kudr¹^,² , Ondrej Zitka¹^,² , Zbynek Heger¹^,² , Vojtech Adam¹^,²

¹Department of Chemistry and Biochemistry, Mendel University in Brno, ²Central European Institute of Technology, Brno University of Technology

Bu makalede

Özet

Bu iletişim kuralı manyetik parçacıklar sentezi ve değerlendirilmesi yolu ile dinamik ve elektroforetik ışık saçılma DNA'ya bağlanıcı özellikleri açıklar. Bu yöntem partikül büyüklüğü, onların polydispersity değişiklik izleme üzerinde odaklanır ve zeta potansiyeli oynamak parçacık yüzey Binbaşı bağlama DNA gibi malzemelerin rolü.

Özet

Manyetik parçacıklar kullanarak DNA izolasyonu Biyoteknoloji ve Moleküler Biyoloji Araştırma yüksek öneme sahip bir alandır. Bu iletişim kuralı DNA-manyetik parçacıklar dinamik ışık saçılma (DL) ve elektroforetik ışık saçılma (ELS) bağlama değerlendirilmesi açıklar. DLS göre analiz partikül büyüklüğü, polydispersity ve zeta potansiyel gibi parçacıklar fizikokimyasal özellikleri üzerinde değerli bilgiler sağlar. İkinci DNA gibi malzemelerin Elektrostatik bağlamadaki önemli rol oynayan parçacık yüzey ücretten açıklar. Burada, karşılaştırmalı bir analiz nano tanecikleri ve microparticles ve DNA bağlama ve elüsyon üzerindeki etkileri üç kimyasal değişimleri patlatır. Dallı tarafından kimyasal değişimleri polyethylenimine, tetraethyl orthosilicate ve (3-aminopropyl) triethoxysilane incelenmiştir. DNA negatif yük sergileyen beri zeta potansiyel parçacık yüzey üzerine DNA'ın bağlama azalır bekleniyor. Kümeleri oluşturan parçacık boyutu da etkiler. Bu parçacıklar izolasyon verimliliğini ve DNA'ın elüsyon araştırmak için parçacıklar düşük pH (~ 6), yüksek iyonik gücü ve dehidratasyon çevre DNA ile karıştırılır. Parçacıklar mıknatıs üzerinde yıkanmış ve sonra DNA Tris-HCl tampon tarafından eluted (pH = 8). DNA kopya sayısı nicel Polimeraz zincir tepkimesi (PCR) kullanarak tahmin ediliyor. Zeta potansiyeli, parçacık boyutu, polydispersity ve kantitatif PCR veri değerlendirilen ve karşılaştırıldığında. DLS bir anlayışlı ve parçacıklar DNA izolasyonu için tarama işlemi için yeni bir bakış açısı ekler analiz yöntemi destekleyen var.

Giriş

DNA izolasyon Moleküler biyolojide en önemli adımlardan biri. Nükleik asit ayıklama yöntem geliştirme genomik, metagenomics, epigenetik ve transcriptomics ortaya çıkan alanların büyük etkisi vardır. Çok çeşitli tıbbi dahil olmak üzere DNA izolasyonu (adli/tanılama araçları ve prognostik biyolojik) için Biyoteknolojik uygulamaları ve çevresel uygulamalar (metagenomic biyolojik çeşitlilik, patojen yaygınlık ve gözetim) vardır. Arındırmak ve farklı malzemelerden ve kan, idrar, toprak, tahta ve diğer tür örnekleri gibi farklı ölçeklerde DNA izole etmek için artan talep oluştu. ¹ ^, ² ^, ^....