Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Cardiomyocyte sistemleri Biyoloji hücresel mimarisi rolü eğitim için bir Cardiomyocyte bir yapısal olarak gerçekçi Sonlu elemanlar geometrik Model oluşturma

9.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/56817

⸱

18 Nisan 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

Bu makalede

Özet

Bu iletişim kuralı bir dağınık şekilde detaylı Sonlu elemanlar modeli cardiomyocytes hücre içi mimarisinin elektron mikroskobu ve confocal mikroskobu görüntüler oluşturmak için yeni bir yöntem özetliyor. Bu dağınık şekilde detaylı model gücünü vaka çalışmaları kalsiyum sinyal ve bioenergetics kullanarak gösterilmiştir.

Özet

Elektron tomografi gibi üç boyutlu (3D) görüntüleme teknolojileri çıkışıyla, seri blok-surat scanning elektron mikroskobu ve confocal mikroskobu, bilimsel topluluk benzeri görülmemiş büyük veri kümeleri alt mikrometre erişebilir mimari modelleme karakterize çözünürlük sağlığı ve hastalıkları cardiomyocyte işlevindeki değişiklikler eşlik eder. Ancak, bu veri kümeleri altında-hücresel mimarisi cardiomyocyte işlevinde remodeling rolü soruşturma için kullanılan olmuştur. Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü elektron mikroskobu ve confocal mikroskobu görüntüleri kullanarak bir cardiomyocyte bir doğru Sonlu elemanlar modeli oluşturmak için anahat amacıdır. Hücresel mimarisinin ayrıntılı ve doğru modeli cardiomyocyte biyoloji, deneyler yalnız toplamak daha yeni görüşler sağlamak için önemli potansiyele sahiptir. Bu yöntemin gücü hesaplama açısından tek Birleşik ve ayrıntılı bir model cardiomyocyte geliştirmek için cardiomyocyte ultrastructure iki farklı görüntüleme yöntemleri üzerinden bilgi sigorta yeteneğini yatıyor. Bu iletişim kuralı elektron tomografi ve yetişkin erkek Wistar (albino sıçan belirli bir cins için ad) sıçan cardiomyocytes cardiomyocyte yarı-sarcomere Sonlu elemanlar modeli geliştirmek için confocal mikroskobu görüntüleri tümleştirmek için özet bilgiler. Yordam bir doğru yüksek çözünürlüklü tasvir içeren bir 3B Sonlu elemanlar modeli oluşturur (~ 35 sırasına nm) mitokondri, myofibrils ve cardiomyocyte için gerekli kalsiyum yayın ryanodine reseptör kümeleri dağılımı myofibril ve sitozolik bölme içine daralma sarcoplasmic Retiküler ağdan (SR). Oluşturulan modeli burada bir örnek enine tübül mimarisi veya sarcoplasmic Retiküler ağ ayrıntılarını dahil değildir ve bu nedenle cardiomyocyte en az bir modeldir. Yine de, model zaten rolü gösterilmiştir ve takip sunulmaktadır iki vaka çalışmaları kullanma ele kalsiyum sinyal ve mitokondriyal bioenergetics, hücre yapısının simülasyon tabanlı soruşturmalar uygulanabilir Detaylı iletişim kuralı.

Giriş

Uyarma-kasılma kaplin (ECC) kalbinde önemli ve karmaşık cardiomyocyte membran elektrik uyarma ve hücre sonraki mekanik daralma her kalp atışı sırasında arasındaki kancası anlamına gelir. Matematiksel modeller düzenleyen aksiyon potansiyeli1,2, bioenergetics3, sinyal sitozolik kalsiyum birbirine biyokimyasal süreçler nicel bir anlayış geliştirmek önemli bir rol oynadığı ve sonraki contractile kuvvet oluşturma. Bu modeller de başarıyla ne zaman bir sinyal değişiklikleri tahmin veya birkaç bu biyokimyasal süreçlerin değişiklikler4,5tabi. Card....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm yöntem tanımlamak burada Auckland hayvan etik Komite ve University of California San Diego kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı Komitesi, nerede doku Protokolü was orijinal gelişmiş Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.

1. deneysel hazırlık

  1. Hisse senedi çözümleri 0.15 M ve 0,3 M sodyum cacodylate arabellekleri pH 7.4 Tablo 1göre hazırlayın.
  2. Oxazolidin sabitleştirici (%2 paraformaldehyde (PFA) + %2.5 oxazolidin + % 0,2 Tannik asit 0.15 M sodyum cacodylate tampon pH 7,4) hazırlamak bileşenleri kullanarak, tablo 1'de listelenen.
    1. İngiltere'de yılın tozu distile su sürekli karı....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 2 . Şekil 7 ile temsilcisi bu protokolündeki birkaç anahtar adımların sonuçlarını sağlar: (i) görüntülenmesi ve doku blok kesitsel elektron mikroskobu görünümleri; reorienting (ii) 3D elektron mikroskobu görüntü yığını oluşturma; (iii) segmentlere alt hücresel ultrastructure organelleri ilgi için; (iv) iso2mesh kullanarak bir Sonlu elemanlar kafes üretimi; (v) mesh kümelerde RyR gerçekçi bir dağıtım simulasyonu; (vi) hesapl.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Yukarıdaki Protokolü cardiomyocyte ultrastructure bir roman Sonlu elemanlar geometrik model oluşturmak için anahtar adımları özetliyor. Yöntem kayma hücre mimarisi ayrıntılarını içeren cardiomyocyte dynamics daha kapsamlı Hesaplamalı modeli geliştirmek Hesaplamalı füzyon farklı mikroskobu (veya, prensip olarak, diğer veri) yöntemleri sağlar. Şu anda diğer protokolü bir cardiomyocyte böyle bir model oluşturmak kullanılabilir.

1. adım bir protokol perfüzyon fiksasyon için özetliyor. Alternatif o.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Teşekkürler

Bu eser Royal Society, Yeni Zelanda Marsden hızlı başlamak Grant 11-UOA-184, insan sınır bilim programı araştırma bursu RGP0027/2013 ve Avustralya Araştırma Konseyi keşif proje Grant DP170101358 tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Malzemeler< / güçlü >
Sodyum klorürSigma-Aldrich746398
Kalsiyum klorürSigma-AldrichC8106
Magnezyum klorürSigma-AldrichM2393
Sodyum bikarbonatSigma-AldrichS5761
Potasyum klorürSigma-AldrichP5405
DekstrozSigma-AldrichD9434
Sodyum hidroksitSigma-AldrichS8045
ProbenecidSigma-AldrichP8761
2,3-Bütandion monoksitSigma-AldrichB0753
%25 Gluteraldehit EM Sınıfı (500 ml şişe)Merck354400-500ML
ParaformaldehitSigma-AldrichP6148
Tanik AsitSigma-Aldrich403040-500G100g EM sınıfı
Sodyum kakodilatSigma-AldrichC0250
Fosfat tamponlu salin (PBS)Sigma-AldrichP4593
Osmiyum TetroksitSigma-Aldrich75632-10MLsuda% 4, 5 ml şişe (veya 10 ml şişe ayrıca mevcuttur)
Uranil AsetatEM Sciences2240025g şişe
Potasyum FerrosiyanürMerck Millipore104973
Toluen mavisiSigma-AldrichT3260
BoraksSigma-AldrichS9640ayrıca sodyum borat olarak da adlandırılır
EtanolSigma-Aldrich792780ile farklı yüzdelerde seyreltilmiş saf su
AsetonEM BilimleriRT10017
Reçine kitiEM Sciences14040ACM Durcupan iyi çalışıyor
Hidroklorik asitSigma-AldrichH98921Normal çözelti
< güçlü > Ekipman < / güçlü >
UltramikrotomLeicaEM UC7
Transmisyon elektronu mikroskopThermoFisher ScientificTecnai F30http://www.leica-microsystems.com/
İmbik standıProscitechT752
Boru BioStrategy75831-346langendorff perfüzyon aparatı için, 3 mm çap önerilir ancak gerekli değildir
stopcocksSDRQP13813; ürün sadece bir örnektir, kullanıcı herhangi birini seçebilir
imbik standı kelepçeleriProscitechT715
Plastik şırıngalarLangendorff aparatındaki çözümler içinSDRQPC1108
Kanülasyon ipek sütür, 7-0TeleFlex15B051000langedorff aparatına kalp bağlamak için
Kanül3 mm dış çaplı çelik iğneden yapılmıştır
Kauçuk petri kabı matProscitechH068sabit kalp diseksiyonu sırasında kesme tahtası olarak kullanım için
Tıraş bıçaklarıProscitechL056EM işleme için sabit kalbi küçük bloklara kesmek için
Cam şişelerBioStrategy89000-236doku fiksasyonu ve işleme sırasında solüsyonları saklamak için EM
BeherersBioStrategy213-0477solüsyonları geçici olarak ve perfüzyon
sırasında saklamak içinSintilasyon şişeleriEM işleme sırasında doku örnekleri içinBioStrategy548-2170
Diseksiyon kitiProscitechT161hayvan diseksiyonu için
Şırınga FiltreleriUranil Asetatkaplarının
Herhangi bir unlu mamuller mağazasından
BioStrategy102680-78035 derece açılı versiyon en iyi kesitleri üretir.
Kolloidal AltınBBI ÇözümleriEM. GC1515 nm kolloidal altın
EM örgü ızgaralarProscitechGCU150çeşitli boyutlar test edilebilir: örneğin GCU150h, GCU200h
Plastik atık pippettesProscitechLCH20özellikle reçine ile çalışırken plastik tek kullanımlık malzemeleri kullanmak için en iyisidir
Yazılım SerialEM
Bouldertomografi edinimi
MATLABMathWorkshttps://www.mathworks.com/products/matlab.html
IMODBouldergörüntü hizalama ve segmentasyon
iso2meshhttp://iso2mesh.sourceforge.net Fiji'de
mevcuttur veya benzer bir görüntü işleme yazılımıImageJFiji, ikiligörüntünün manipülasyonu için https://fiji.sc'da bulunan Just Image J'dir yığınlar
RyR-Simulator kodları/verileriCellSMB grubuşu adreste mevcuttur: https://github.com/CellSMB/RyR-simulator
CardiacCellMeshGeneratorCellSMB grubu"gui-version" klasörü altında RyR-Simulator ile birlikte
gelirR-istatistik yazılımıR-projesihttps://www.r-project.org
spatstatR-project'tenindirinR programı aracılığıyla yükleme
rglR-projesiR programı aracılığıyla yükleme
doparalelR-projesiR programı aracılığıyla yükleme
R-projesiR programı aracılığıyla yükleme
doSNOWR-projesiR programı aracılığıyla yükleme
yineleyicilerR-projesiR programı aracılığıyla yükleme
Langendorff boruları için, , için , Alüminyum/gümüş folyo pişirme saflaştırılması için Proscitech WS3-02225SDupont Elmas bıçak , Üniversitesi , için her için

Kaynaklar

  1. Noble, D., Rudy, Y. Models of cardiac ventricular action potentials: iterative interaction between experiment and simulation. Phil. Trans. R. Soc. A: Math., Phys. and Eng. Sci. 359 (1783), 1127-1142 (2001).
  2. Williams, G. S. B., Smith, G. D., Sobie, E. A., Jafri, M. S. Models of cardiac excitation-contraction coupling in ventricular myocytes. Math. Biosci.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Sonlu Eleman ModeliKardiyomiyosit MimarisiElektron TomografisiKonfokal MikroskopiKalsiyum SinyalizasyonuMitokondriyal BiyoenerjetikRyR Küme SimülasyonuGörüntü SegmentasyonuAğ Üretimi