Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Kimyasal-indüklenebilir DNA Hydroxymethylation ve epigenetik Remodeling için bir mühendislik Split-TET2 enzim

6.2K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/56858

⸱

18 Aralık 2017

 ,  , 
1Centre for Epigenetics and Disease Prevention, Department of Molecular and Cellular Medicine, Institute of Biosciences and Technology, College of Medicine, Texas A&M University, 2Centre for Translational Cancer Research, Department of Medical Physiology, Institute of Biosciences and Technology, College of Medicine, Texas A&M University

Bu makalede

Özet

Memeli hücreleri kimyasal indüklenebilir DNA hydroxymethylation ve epigenetik remodeling için içine bir mühendislik Böl-TET2 enzim (elma şarabı) tanıtmak için detaylı protokolleri mevcuttur.

Özet

DNA metilasyonu memeli genom bir istikrarlı ve kalıtsal epigenetik değişiklik ve hücresel işlevleri kontrol etmek için gen ifadesinin düzenlenmesine ilgilenmektedir. DNA metilasyonu veya DNA demethylation, ters dioxygenases on-on translocation (TET) protein ailesinde aracılık ettiği. Her ne kadar bu anormal DNA metilasyonu ve demethylation gelişimsel kusurlar ve kanser ile ilişkili olan yaygın olarak bildirilmiştir, nasıl epigenetik değişikliklerin doğrudan sonraki değişiklik gen ifade veya hastalık ilerleme katkıda büyük ölçüde doğru eklemek veya DNA genom tanımlanmış zamansal ve mekansal çözünürlükte içinde kaldırmak için güvenilir araçları eksikliği nedeniyle belirsizdir. Bu engeli aşmak için bir split-TET2 enzim 5-metilsitozin (5mC) oksidasyon zamansal kontrolünü ve sonraki memeli hücrelerinde epigenetik Birleşik sadece kimyasallar ekleyerek remodeling etkinleştirmek için tasarlanmıştır. Burada, bir kimyasal indüklenebilir epigenome tadilat araç (elma şarabı), memeli hücreleri ve ile 5 arasında bakterilerde görülen (5hmC) kimyasal indüklenebilir üretim miktarının bir mühendislik Böl-TET2 enzim üzerinde dayalı tanıtmak için yöntemleri tarif immunostaining, Akış Sitometresi veya bir nokta-leke tahlil. Bu kimyasal-indüklenebilir epigenome tadilat araç geniş kullanım hücresel sistemleri genetik kodu değiştirmeden sorguya yanı sıra çeşitli biyolojik sistemlerde epigenotype−phenotype ilişkiler sondalama bulacaksınız.

Giriş

DNA metilasyonu, çoğunlukla, DNA metil-Transferazlar tarafından (DNMTs) katalize sitozin karbon 5 konumunu 5-metilsitozin (5mC) oluşturmak için bir metil grubu eklenmesi anlamına gelir. 5mC büyük bir epigenetik işareti kez transkripsiyon baskı, x kromozomu inactivation ve transposon1susturmak için sinyalleri memeli genom, görür. DNA metilasyonu iptali on-Elf translocation (TET) protein ailesi tarafından aracılık ettiği. TET enzimler ait demir (II) ve 5 arasında bakterilerde görülen (5hmC), 5-formylcytosine (5 fC) ve 5-carboxycytosine (5caC) 5mC art arda gelen oksidasyon katalizler 2-oxoglutarate bağımlı dioxygenases. TET-aracılı 5mC oksidasyon ek bir memeli genom üzerinde epigenetik kontrol katmanı uygular. TET keşfi TET proteinlerin biyolojik fonksiyonları ve onların büyük katalitik ürün 5hmC açıklayacak epigenetik alanındaki yoğun ilgi yol açtı. 5hmC sadece bir ara TET-aracılı aktif DNA demethylation2sırasında,3,4, değil ama aynı zamanda kararlı bir epigenetik görevi görür5,6,7,8 işareti . DNA hydroxymethylation son derece gen ekspresyonu ile ilişkili ve anormal olmasına rağmen DNA hydroxymethylation bazı insan bozuklukları9,10,11ile nedensel ilişkileri ilişkili değişikliklerdir DNA üzerindeki epigenetik değişiklikler ve fenotipleri arasında sık sık kurulacak zorlu kalır, hangi kısmen doğru eklemek veya DNA genom içinde kaldırmak için güvenilir aracı olmadığı için atfedilen zamansal ve mekansal tanımlı Çözünürlük.

Burada aracı (çalışmaların nedensel ilişkileri karşı karşıya engel aşmak için elma şarabı) arasında DNA hydroxymethylation ve gen transkripsiyonu remodeling bir kimyasal indüklenebilir epigenome kullanımı raporu Tasarım varsayımına dayanır bu TET2 katalitik etki alanını (TET2CD) memeli hücrelerinde ifade iki etkin olmayan parçaları içine bölünmüş ve enzimatik işlevi bir kimyasal indüklenebilir dimerization yaklaşım ( alarak geri yüklenebilir Şekil 1A). Böl-TET2CD sistemi kurmak için TET2CD, Cys-zengin bölge ve düşük karmaşıklık bölge12yoksun TET2-DNA kompleks bildirilen kristal yapısı temelinde bir çift iplikli β-helix (DSBH) kat oluşan altı sitelerinin seçilmesini. Sentetik bir gen Rapamycin indüklenebilir dimerization modülü FK506 bağlayıcı protein 12 (FKBP12) kodlama ve rapamycin14,15, kendi kendine sıyırmada peptid T2A birlikte memeli hedefinin FKBP rapamycin bağlayıcı etki (FRB) polipeptid sıra16,17, tek tek TET2CD içinde seçilen split siteleri içine eklenir. TET2 seçimi mühendislik hedefimiz olarak aşağıdaki önemli noktalar üzerinde temel alır. TET2 ilk, somatik mutasyonlar DNA hydroxymethylation eşlik eden azalma ile sık sık Miyeloid bozuklukları ve kanser10için kaçınılması gereken duyarlı sitelerin yararlı bilgiler sağlar, dahil olmak üzere insan hastalıklarda gözlenir ekleme. İkinci olarak, TET2 katalitik domain, özellikle düşük karmaşıklık bölgesinde, büyük bir kısmı böylece bize bir simge durumuna küçültülmüş Böl-TET2 indüklenebilir epigenetik değişiklikler için tekne etkinleştirme enzimatik işlevi12, gereksiz. 15 yapıları eleme sonra onun enzim aktivitesinin en yüksek rapamycin indüklenebilir restorasyon memeli sistemdeki sergilenen bir yapı seçilmiş ve elma şarabı18belirlenmiş. Biz burada indüklenebilir DNA hydroxymethylation ve epigenetik rapamycin ile yeniden elde etmek için mCherry öğesini elma suyu nasıl kullanılacağını açıklar ve elma şarabı aracılı 5hmC üretim modeli hücresel sisteminde HEK293T doğrulamak için üç yöntem mevcut.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. hücre kültürü, plazmid Transfection ve kimyasal indüksiyon

  1. Kültür ile % 10 ısı inaktive fetal sığır serum, 100 U/mL penisilin ve streptomisin %5 CO237 ° C'de takıma bir yapisan hücre kültürünü (örneğin, insan embriyonik böbrek HEK293T hücre) (DMEM), Dulbecco'nın değiştirilmiş kartal ortamda.
  2. Elma şarabı plazmid hücrelerle transfect.
    1. En az 18 h transfection önce tohum 0,3 x 106 hücre uygun DMEM 2.5 ml 6-şey tabak içinde iyi ve hücreleri 37 ° C'de % 60-80 confluency ulaşmak için gecede kuluçkaya.
    2. Kullanmadan önce oda sıcaklığına transfection reaktif önceden ısıtmak.
    3. Yer 250 µL serum-Alerjik orta steril bir tüp.
      Not: Bu miktar % 80'i confluency ile 6-şey plaka için hazırlanmıştır. Gerekirse, orantılı olarak orta miktarda plakaları veya hücre sayıları boyutları göre belirleyin.
    4. Elma şarabı18 veya TET2 katalitik domain kodlama plazmid 2,5 µg Ekle (TET2CD pozitif kontrol olarak)12,13 serum-Alerjik orta içine ve yavaşça karıştırın pipetting tarafından.
    5. Transfection reaktif 7.5 µL seyreltilmiş DNA karışıma ekleyin ve karışımı yavaşça pipetting tarafından.
    6. 20-30 dakika oda sıcaklığında karışımı kuluçkaya.
    7. Önceden ısıtılmış medya değiştirmek ve karışımı drop-wise wells için ekleyin ve hafifçe DNA karışımı ve transfection reaktifi olarak dağıtabilmenizi hücre kültür plaka sallamak.
    8. Hücreleri ve karışımı bir gecede kuluçkaya ve ortamı ile taze tam DMEM 2 ml içeren transfection reaktif değiştirir.
  3. Kimyasal indüksiyon
    1. Seyreltik 2 mM (DMSO içinde çözünmüş) rapamycin stok uygun tam orta 20 µM bir konsantrasyon için.
    2. Transfected hücreleri 200 son bir konsantrasyon ulaşmak için 2 mL ortamda muhafaza seyreltilmiş rapamycin 20 µL eklemek nM.
      Not: 48 h için kuluçka sonra hücreleri 5hmC nesil miktar veya başka herhangi bir aşağı akım uygulama için hazırsınız demektir. Gerekirse, indüksiyon verimliliği hücreleri daha fazla 5hmC miktar aşağıda açıklandığı gibi her 3 h yaptırmayı tarafından izlenen ve şekil 1' de gösterilen.
    3. İçin daha iyi miktar 5hmC indüksiyon verimlilik tohum hücreleri 3 saatte izlemek için kuyu ayırın.

2. miktar Rapamycin kaynaklı 5hmC üretim Immunostaining tarafından

  1. 5hmC ayirt boyama
    Not: PBS plaka tüm hücrelerde kapsayacak şekilde 3 N HCl ile % 4 paraformaldehyde, %0.2 yüzey aktif (örneğin Triton X-100) oluşan fiksasyon çözüm yeterli miktarda ekleyin. Örneğin, 500 µL çözüm için iyi bir 6-şey plaka yeterli. Oda sıcaklığında tüm adımları gerçekleştirin.
    1. Hücreleri gidermek için 15 dakika ortam sıcaklığı, rapamycin tedavi hücrelere PBS içinde %4 paraformaldehyde ekleyin. Kontrol grubu için hücreleri mCherry-elma rapamycin tedavisi olmadan ifade kullanın. Kışkırtmak değil.
      Dikkat: Paraformaldehyde zehirlidir. Uygun koruma giymek.
    2. Sabitleştirici çözüm atın. Sabit % 0,2 yüzey aktif hücre zarının permeabilize için PBS için 30 dk içinde hücrelerle kuluçkaya.
    3. Permeabilization çözüm atın. 3 N HCl permeabilized hücrelere ekleme ve 15dk için DNA'yı denatüre kuluçkaya.
    4. HCl. ekle 100 mM Tris-HCl arabelleğe (pH 8.0) pH nötralize için 10 min için hücreleri atın.
    5. Tüm çözüm atın. Hücreler için PBS ile iyice yıkayın 3 - 5 kez. PBS iyice kaldır.
      Not: PBS her yıkama adım için yeterli miktarda ekleyebilirsiniz. Örneğin, PBS 1 mL 6-şey plaka için yeterli.
    6. Hücreleri % 1 BSA ve yüzey aktif (örneğin ara 20) PBS içinde nazik sallayarak ile 1 h için % 0.05 oluşan engelleme arabelleği ekleyerek engellemek.
    7. Engelleme çözüm atın. Seyreltilmiş 5hmC antikor (1: 200) hücrelere ekleme ve oda sıcaklığında 2 h veya gecede 4 ° C'de için kuluçkaya
    8. PBS hücrelerle 15dk için üç kez yıkayın.
    9. Seyreltilmiş fluorophore (FITC) Ekle-Birleşik hücreler için ikincil antikor (1: 200) ve 1 h için kuluçkaya.
    10. PBS hücrelerle üç kez kalan antikorlar kaldırmak için kapsamlı bir şekilde yıkayın.
    11. 250 ng/mL 4', 6-diamidino-2-phenylindole (çekirdek leke DAPI) 5 dk. Kaldır boyama çözüm ekleyin.
    12. Slayt veya cam-alt kültür çanak confocal görüntüleme için immunostained hücreler bağlayın. Temsil edici bir sonuç şekil 1Badımında gösterildi.
  2. Akış Sitometresi
    Not: 96-şey yuvarlak alt plaka boyama yordamını kullanın. Genellikle, 150 µL reaktifler, her şey için yeterli olur.
    1. FACS arabellek (PBS % 1 BSA, 2 mM EDTA ile) transfected ve rapamycin kaynaklı hücrelerinde resuspend. Kontrol grubu için rapamycin tedavisi olmayan hücreler elma şarabı ifade kullanın.
    2. Fix ve hücreleri adım 2.1 içinde açıklandığı gibi permeabilize.
    3. 2 N HCl 10 min için DNA denatüre hücrelere ekleyin.
    4. HCl. Nötrleştir atın ve adım 2.1 içinde açıklandığı gibi hücreleri engellemek.
    5. Seyreltilmiş anti-5hmC antikor (1: 200) hücrelere ekleme ve oda sıcaklığında veya gecede 4 ° C'de 1 h için kuluçkaya
    6. FACS arabellek içeren hücreleri üç kez yıkayın. FACS arabellek iyice kaldır.
    7. Seyreltilmiş fluorophore (FITC) Ekle-Birleşik Floresans aktif hücre (FACS) analiz sıralama için ikincil antikor (1: 400) ve oda sıcaklığında 1 h için kuluçkaya.
    8. FACS arabellek içeren hücreleri üç kez yıkayın.
    9. Örnekleri FACS analiz için hazırsınız demektir. Temsil edici bir sonuç şekil 1 c-Dgösterildi.

3. nokta-leke tahlil 5hmC ve 5-metilsitozin (5mC) ölçmek için tutarlar

  1. Bir ticari DNA ekstraksiyon kiti kullanarak transfected ve rapamycin kaynaklı hücrelerden genomik DNA izole et. Kontrol grubu için rapamycin tedavisi olmayan hücreler elma suyu transfected kullanın.
  2. Isı 80 ° C ve öncesi emmek nitroselüloz membran çift distile H2O ve o zaman 6 x 10 min için serum sodyum sitrat (SSC) arabellek vakum fırın.
  3. 60 µL bir 96-şey PCR plakasına eşit miktarda DNA (Toplam 2 µg TE arabelleği) yükleyin. Geri kalan wells TE arabelleği (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) 30 µL ekleyin.
  4. İki kat seri dilutions çözüm 30 µL satır 1 2 satırda aynı sütun konumu aktararak 96-şey plaka üzerinde dikey olarak yapmak. Tekrar karıştırın ve sınır ulaşan kadar sonraki satırda wells çözüm 30 µL aktarmak.
Son 30 µL kaldırın.
  • Her şey için 1 M NaOH ve 10 mM EDTA 20 µL eklemek, plaka mühür ve tamamen DNA çift yönlü denatüre 95 ° C de 10 dakika için karışım ısı.
  • Buz üzerinde örnekleri sakin ve buz gibi 2 M amonyum asetat (pH 7,0) 50 µL eklenir ve 10 min için buz üzerinde kuluçkaya.
    Not: Adım 3.7-3.10 vakum kullanımı içerir.
  • Nokta leke aparatı öncesi membran ile montaj ve kalan arabellek tam vakum kullanarak kaldırın.
  • Membran nokta leke aparatı her şey için 200 µL TE arabelleği ekleyerek yıkayın. TE arabellek kaldırmak için vakum açmak.
  • (Önceki adımlarda 3.1-3.6 hazır) denatüre DNA her şey nokta leke cihazları için yükleyin. Çözümü kaldırmak için vakum açmak.
  • Membran 2 tamamen vakum kullanma SSC ve Kaldır artık çözümler x 200 µL ekleyerek yıkayın.
  • Nokta leke aparatı sökmeye, membran almak ve tüm membran ile 20 mL 2 durulama x SSC.
  • Membran 20 dakika kuruması.
  • Membran vakum için 2 h altında 80 ° C'de pişirin.
  • Membran için engelleme çözüm (yağsız süt TBST % 5) ekleyin ve oda sıcaklığında 1 h için kuluçkaya.
  • Engelleme çözüm atın. Bir sulandırılmış 5hmC (1:5, 000) veya 5mC (1:1, 000) eklemek için membran antikorları ve gecede 4 ° C'de kuluçkaya
  • Membran ile kalan antikorlar kaldırmak için TBST 10 dk için üç kez yıkayın. TBST iyice kaldır.
  • HRP-Birleşik bir ikincil antikor ekleyin (1:10, 000 Anti-tavşan HRP(5hmC) için veya 1:3,000 Anti-fare HRP(5mC)) membran ve oda sıcaklığında 1 h için kuluçkaya.
  • TBST ile membran 10 min için üç kez yıkayın.
  • ECL substrat Kemiluminesan dedektörü kullanarak 5hmC sinyalleri görselleştirme için membran için kurutma Batı ekleyin. Temsil edici bir sonuç şekil 1Eiçinde gösterildi.

    • Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Sonuçlar

    Kimyasal indüklenebilir 5mC 5hmC dönüşüm immunostaining tek hücre düzeyinde, transfected (mCherry-pozitif) hücre popülasyonlarının Akış Sitometresi Analizi veya şekil 1' de gösterildiği gibi daha nicel bir nokta-leke tahlil tarafından doğrulanabilir. TET2 veya TET2CD, katalitik etki alanı çalışma pozitif bir denetim kullanılmıştır. Başvurular 18-20 rapamycin kaynaklı değişiklikler genom geniş eşleme ile ilgili daha fazla bilgi için bkz: 5hmC ve Kromatin erişi...

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Tartışma

    Burada DNA hydroxymethylation zamansal kontrolünü elde etmek için bir mühendislik Böl-TET2 enzim kullanımı resimli. 5-methycytosine dioxygenase ailesinin TET keşfi, TET proteinler ve onların büyük katalitik ürün 5hmC1,2,3biyolojik fonksiyonları deşifre etmek için birçok çalışma gerçekleştirilmiş, 4,5,6,

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Açıklamalar

    Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının bildirin.

    Teşekkürler

    Biz mali teşekkür çekmek--dan ulusal sağlık Enstitüleri (YZ R01GM112003), hibe Welch Vakfı (YZ için BE-1913), Amerikan Kanser Derneği (RSG-16-215-01 TBE YZ için), kanser önleme ve Texas Araştırma Enstitüsü (RR140053 YH için RP170660 YZ için), Amerikan Kalp Derneği (YH 16IRG27250155) ve John S. Dunn Vakfı ortak araştırma ödülü programı.

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Malzemeler

    Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
    AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
    Lipofektamin 2000 Transfeksiyon ReaktifiThermo Fisher Scientific11668027
    RapamisinSigma-Aldrich37094
    Paraformaldehit,% 16 ÇözeltiVWR100503-916
    Triton X-100Amresco0694-1L
    Hidroklorik AsitAmresco0369-500ML
    Albümin, SığırAmresco0332-100G
    Tween 20Amresco0777-1L
    5-Hidroksimetilsitozin (5-hmC) antikoru (pAb)Aktif Motif39769
    Keçi anti-Tavşan IgG (H+L) Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Alexa Fluor 488Thermo Fisher ScientificA-11008
    4,6-Diamidino-2-fenilindol (DAPI)Biotium40043
    SVAC1E SHEL LAB Ekonomik Vakumlu Fırın, 0,6 Cu.Ft. (17 L)SHEL LABSVAC1E
    UltraPure SSC, 20XThermo Fisher Scientific15557036
    Bio-Dot AparatıBIO-RAD1706545
    Anti-5-metilsitozin (5mC) Antikor, klon 33D3MilliporeMABE146
    Anti-fare IgG, HRP'ye bağlı AntikorHücre Sinyal Teknolojisi7076S
    Anti-tavşan IgG, HRP'ye Bağlı AntikorHücre Sinyalizasyon Teknolojisi7074S
    West-Q Pico Dura ECL ÇözümüGendepotW3653-100

    Kaynaklar

    1. Li, E., Zhang, Y. DNA methylation in mammals. Cold Spring Harbor Perspectv Biol. 6 (5), a019133(2014).
    2. Tahiliani, M., et al. Conversion of 5-methylcytosine to 5-hydroxymethylcytosine in mammalian DNA by MLL partner TET1. Science. 324 (5929), 930-935 (2009).
    3. He, Y. F., et al. Tet-mediated formation of 5-carboxylcytosine and its excision by TDG in mammalian DNA. Science. 333 (6047), 1303-1307 (2011).
    4. Ito, S., et al. Tet proteins can convert 5-methylcytosine to 5-formylcytosine and 5-carboxylcytosine. Science. 333 (6047), 1300-1303 (2011).
    5. Spruijt, C. G., et al. Dynamic readers for 5-(hydroxy)methylcytosine and its oxidized derivatives. Cell. 152 (5), 1146-1159 (2013).
    6. Lio, C. W., et al. Tet2 and Tet3 cooperate with B-lineage transcription factors to regulate DNA modification and chromatin accessibility. eLife. 5, e18290(2016).
    7. Kellinger, M. W., et al. 5-formylcytosine and 5-carboxylcytosine reduce the rate and substrate specificity of RNA polymerase II transcription. Nat Struct Mol Biol. 19 (8), 831-833 (2012).
    8. Su, M., et al. 5-Formylcytosine Could Be a Semipermanent Base in Specific Genome Sites. Angew Chem Int Ed Engl. 55 (39), 11797-11800 (2016).
    9. Ko, M., et al. Impaired hydroxylation of 5-methylcytosine in myeloid cancers with mutant TET2. Nature. 468 (7325), 839-843 (2010).
    10. Huang, Y., Rao, A. Connections between TET proteins and aberrant DNA modification in cancer. Trends Genet. 30 (10), 464-474 (2014).
    11. Lu, X., Zhao, B. S., He, C. TET family proteins: oxidation activity, interacting molecules, and functions in diseases. Chem Rev. 115 (6), 2225-2239 (2015).
    12. Hu, L., et al. Crystal structure of TET2-DNA complex: insight into TET-mediated 5mC oxidation. Cell. 155 (7), 1545-1555 (2013).
    13. Hashimoto, H., et al. Structure of a Naegleria Tet-like dioxygenase in complex with 5-methylcytosine DNA. Nature. 506 (7488), 391-395 (2014).
    14. Banaszynski, L. A., Liu, C. W., Wandless, T. J. J. Characterization of the FKBP.rapamycin.FRB ternary complex. J Am Chem Soc. 127 (13), 4715-4721 (2005).
    15. Clackson, T., et al. Redesigning an FKBP-ligand interface to generate chemical dimerizers with novel specificity. Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (18), 10437-10442 (1998).
    16. Ibrahimi, A., et al. Highly efficient multicistronic lentiviral vectors with peptide 2A sequences. Hum Gene Ther. 20 (8), 845-860 (2009).
    17. Kim, J. H., et al. High cleavage efficiency of a 2A peptide derived from porcine teschovirus-1 in human cell lines, zebrafish and mice. PLoS One. 6 (4), e18556(2011).
    18. Lee, M., et al. Engineered Split-TET2 Enzyme for Inducible Epigenetic Remodeling. J Am Chem Soc. 139 (13), 4659-4662 (2017).
    19. Huang, Y., Pastor, W. A., Zepeda-Martínez, J. A., Rao, A. The anti-CMS technique for genome-wide mapping of 5-hydroxymethylcytosine. Nat Protoc. 7 (10), 1897-1908 (2012).
    20. Buenrostro, J. D., Wu, B., Chang, H. Y., Greenleaf, W. J. ATAC-seq: A Method for Assaying Chromatin Accessibility Genome-Wide. Curr Protoc Mol Biol. 109 (21.29), 1-9 (2015).

    Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

    Yeniden basım ve izinler

    Etiketler

    Ak SitometrisiDot blot Analizimm n BoyamaRapamisin Uygulamas5 hidroksimetilsitozin TespitiMemeli H cre TransfeksiyonuCiDER Plazmidi
    Kimyasal-indüklenebilir DNA Hydroxymethylation ve epigenetik Remodeling için bir mühendislik Split-TET2 enzim
    Bize ulaşın
    Kütüphaneye tavsiye et

    Gizlilik

    Kullanım Şartları

    İlkeler

    Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.