Bu iletişim kuralı, Yenidoğan fare veya erken insan bağırsak yanı sıra fareler süt toplamak için verimli bir yöntem bir enteroid kültür sistemi kurmak açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Anne sütü artırır büyüme Enteroids: hücre çoğalması bir Ex Vivo modeli
Bu makalede
Özet
Özet
İnsan küçük bağırsak enteroids kriptalarının türetilmiştir ve kök hücre niş içinde yetiştirilen epitel hücre türlerinin tümünü içerir. İnsan enteroid ex vivo kültür sistemleri kurmak için yetenek modeli bağırsak patofizyolojisi ve belirli hücresel yanıt dahil çalışma gerekir. Son yıllarda, enteroids fareler ve insanlar, pasajlı ve banked uzakta birkaç laboratuarlarında ileride kullanmak için dünya çapında kültürlü. Bu enteroid platformu çeşitli tedaviler ve ilaçlar etkilerini ve farklı hücre tipleri bağırsak üzerinde ne gibi etkileri sarf test etmek için kullanılabilir. Burada, birincil kök hücre kaynaklı küçük bağırsak enteroids kurmak için bir protokol yenidoğan fareler türetilen ve erken insan bağırsak sağlanır. Ayrıca, bu enteroid kültür sistemi species-specific anne sütü etkilerini test etmek için kullanılmıştır. Fare anne sütü verimli bir şekilde değiştirilmiş insan göğüs pompası kullanılarak elde edilebilir ve ifade fare süt o zaman daha fazla araştırma deneyler için kullanılabilir. Biz şimdi ifade fare, insan, etkileri göstermek ve neonatal fareler veya erken insan ince bağırsak donör anne sütü büyüme ve enteroids yayılması türetilmiş.
Giriş
Enterokolit Nekroze edici (NEC) gastrointestinal hastalığı etkileyen yaklaşık 28 hafta gebelik1,2,3önce tarihi 1 10 bebeklerde prematüre bebeklerde ölüm önde gelen nedenidir. Yarısı, bebeklerin hayatta kalma sadece % 10-304,5nerede en ağır formu için NEC ilerleme ile. Amerika Birleşik Devletleri'nde bir tahmini 2-3 milyar YTL/yıl harcanan bebekler NEC6,7ile tedavi henüz ne sağkalım oranı ne de terapi son 30 yıl içinde değişti. NEC patogenezinde bağırsak yarala....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu çalışmada tüm hayvan yordamları St. Louis kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (iletişim kuralı 20160187) veya Pittsburgh Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı Komitesi (iletişim kuralı 14103918) Washington üniversite tarafından kabul edildi. İnsan cenin ince bağırsak daha az 24 haftalık gebelik, Pittsburgh Üniversitesi anatomik doku tedarik kılavuzlarınıza uygun olarak kurumsal inceleme kurulu onayı (protokol PRO14100537) Üniversitesi'nden sonra elde edildi Pittsburgh Sağlık Bilimleri doku Bankası bir dürüst komisyoncu sistemi aracılığıyla. De-tanımlanan insan anne sütü veya pastörize donör anne sütü rıza Üniversitesi Pittsburgh Kurumsal değerlend....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
İlk insan anne sütü ifade olup olmadığını araştırmak aranan veya pastörize donör anne sütü küçük bağırsak enteroids üzerinde bir etkisi vardı. Nitekim, insan anne sütü ve donör anne sütü yenidoğan fare (şekil 1A) ve erken insan türetilmiş enteroids (şekil 1B) büyüme arttı.
Bu yana insan anne sütü küçük bağırsak enteroids büyüme arttı, anne sütü erken insan enteroids yay.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bağırsak epitel konak savunma bağırsak bariyer bütünlüğünü korumak patojenlere karşı sorumluluğunuz vardır ve çeşitli hastalıkların patogenezinde çiğnenebilmektedir birçok hücresel türlerinden oluşur. Hayvan modelleri hastalık bazı yönleriyle özetlemek, fareler ve insanlar bağırsağın türetilmiş enteroids ex vivo modelinin çeşitli tedaviler etkilerini test etmek için bir platform sağlar. Enteroid modeli önemini araştırmacılar kültür ve bağırsak kök hücre saf ya da hastalıklı hayvanlar ve varolan yöntemleri ile me.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa etmek hiçbir şey ve hiçbir çıkar çatışması var.
Teşekkürler
MG hibe K08DK101608 ve R03DK111473 Ulusal Sağlık enstitüleri, Mart, Dimes Vakfı Hibe No 5-FY17-79, çocuk Discovery Enstitüsü Washington Üniversitesi ve St. Louis Çocuk Hastanesi ve Anabilim Dalı tarafından desteklenmektedir Pediatri Washington Üniversitesi School of tıp, St. Louis. CJL R01DK104946 tarafından desteklenmektedir (PI: Silverman), çocukların Discovery Enstitüsü Washington Üniversitesi ve St. Louis Çocuk Hastanesi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Dulbecco'nun 4.5 g / L Glikoz ve L-Glutamin ile Modifiye Eagle's Medium (DMEM) | Lonza | 12-604F | |
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | Gibco | 26140-079 | |
| Penisilin-Streptomisin | Gibco | 15140-122 | |
| Humulin N (İnsülin) | Eli Lilly And Company | 0002-8315 | |
| 1x Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin ( DPBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Gentamisin | Gibco | 15750-060 | |
| Amfoterisin B | Gibco | 15290-026 | |
| 0.5 M Etilendiamintetraasetik asit (EDTA), pH 8.0 | Invitrogen | 15575-020 | |
| 1x Gelişmiş DMEM / F-12 | Invitrogen | 12634-028 | |
| 200 mM L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
| 1 M N-2-Hidroksietilpiperazin-N-2-Etan Sülfonik Asit (HEPES) | Sigma-Aldrich | H3537 | |
| N-Asetilsistein | Sigma-Aldrich | A9165 | |
| 100x N-2 Takviyesi | Gibco | 17502-048 | |
| 50x B-27 Takviyesi Eksi A Vitamini | Gibco | 08-0085SA | |
| 100x ROCK İnhibitörü Y-27632, Dihidroklorür | Sigma-Aldrich | Y0503 | |
| Rekombinant Fare Wnt3a Protein R | & D Systems | 1324-WN | |
| Murine Noggin | PeproTech | 250-38 | |
| Rekombinant Fare R-Spondin 1 | R& D Systems | 3474-RS | |
| Rekombinant Murin Epidermal Büyüme Faktörü (EGF) | PeproTech | 315-09 | |
| Matrigel Büyüme Faktörü Azaltılmış Bazal Membran | Matrisi Corning | 356231 | |
| 35 x 10 mm Hücre Kültürü Petri Kabı | Eppendorf | 0030700112 | |
| 24 Kuyulu Hücre Kültürü Plakası | Eppendorf | 0030722116 | |
| 48 Kuyulu Hücre Kültür Plakası | Eppendorf | 0030723112 | |
| 8 Kuyulu Nunc Lab-Tek II Hazneli Kızak Sistemi | Thermo Scientific | 154534 | |
| 50 mL Konik Tüp | Corning | 352070 | |
| 100 & mu; M Steril Hücre Süzgeci | Fisher Scientific | 22-363-549 | |
| 70 μ M Steril Hücre Süzgeci | Fisher Scientific | 22-363-548 | |
| 1x Fosfat Tamponlu Salin (PBS), pH 7.2 | Invitrogen | 20012-027 | |
| %16 Paraformaldehit (PFA) | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 15710 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | |
| Normal Eşek Serum (NDS) | Sigma-Aldrich | D9663 | |
| 4 ',6-Diamidino-2-fenilindol, Dihidroklorür (DAPI) | İnvitrojen | D1306 | |
| Mikroskop Kapağı Cam | Fisher Scientific | 12-544-D | |
| Konfokal Mikroskop Leica TCS SP8 X | Leica Microsystems | N/A | |
| Photoshop CS6 | Adobe Systems | N/A | |
| 18 G 1.5 İnç İğne | Becton Dickinson | 305196 | |
| İzofluran | Sigma-Aldrich | 792632 | |
| Oksitosin | Sigma-Aldrich | O3251 | |
| İnsan Çift Elektrikli Göğüs Pompası | Lansinoh | 044677530163 | |
| 5 mL Yuvarlak Alt Test Tüpü | Corning | 352058 | |
| Kauçuk Tıpalar | Frey Scientific | 560761 | |
| Ki67 | Antikoru Abkam | AB15580 | |
| İnsan Mki67 primeri F: 5'-GACCTCAAACTGGCTCCTAATC-3' R: 5'-GCTGCCAGATAGAGTCAGAAAG-3'Entegre | DNA Teknolojileri | N/A |
Kaynaklar
- Patel, R. M., Denning, P. W. Therapeutic use of prebiotics, probiotics, and postbiotics to prevent necrotizing enterocolitis: what is the current evidence? Clin Perinatol. 40 (1), 11-25 (2013).
- Caplan, M. S., Jilling, T. New concepts i....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
