Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

En iyi duruma getirilmiş bir Evans mavi Mouse vasküler sızıntı değerlendirmek için iletişim kuralı

28.4K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/57037

⸱

12 Eylül 2018

 ,  ,  , 
1Cardiovascular Pulmonary Research Laboratory, University of Colorado Denver, 2Division of Pulmonary Sciences and Critical Care Medicine, University of Colorado Denver, 3Denver VA Medical Center

Bu makalede

Özet

Bu makalede, ekonomik, en iyi duruma getirilmiş ve basit bir protokol bu Evans mavi boya yöntemi diğer suşları, türler ve diğer organ veya doku kullanmak için adapte edilebilir FVBN farelerin organlarda plazma ekstravazasyonu değerlendirmek için kullandığı açıklanmıştır.

Özet

Vasküler sızıntı veya plazma ekstravazasyonu, bir nedeni vardır ve ciddi sonucu veya bir enflamatuar yanıt belirtisi olabilir. Bu çalışmada sonuçta nedenleri ile ilgili yeni bilgi ya da inhibe veya plazma ekstravazasyonu tedavi etmek için yeni yollar açabilir. Araştırmacılar plazma ekstravazasyonu çalışmak için en iyi yöntemler kullanılabilir, dahil olmak üzere uygun araçlara sahip önemlidir. Bu makalede, biz FVBN farelerin organlarda plazma ekstravazasyonu değerlendirmek için Evans mavi boya yöntemini kullanarak bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı kasten basittir, için iyi bir derece, mümkün olduğunca ama sağlar yüksek kalitede veri. Evans mavi boya öncelikle çünkü kullanmak ortalama laboratuvar için kolay seçildi. Enzim neprilysin plazma ekstravazasyonu karşı damarlara korusun hipotez için kanıt ve destek sağlamak için bu protokolü kullanmış. Ancak, bu iletişim kuralını deneysel olarak kullanılan olabilir ve kolayca anlama, önlenmesi ve tedavisinde önemli diğer faktörler içerebilir çalışmaları için diğer suşların fareler veya diğer türler, birçok farklı organ veya doku, kullanılacak adapte plazma ekstravazasyonu. Bu iletişim kuralı kapsamlı bir şekilde optimize edilmiş ve kullanımı, ekonomi ve genel availability-in malzeme ve ekipman, bu iletişim kuralını kullanmak ortalama laboratuvar için üstün yapım kolaylığı varolan iletişim kuralları ve birleştiren güvenilirlik modifiye, plazma ekstravazasyonu düşük organlarını miktarının.

Giriş

Organlarda vasküler sızıntı ekstravazasyonu için başvurur veya kan plazma arasındaki endotel üretilen geçitlerden kaçağı sonrası kapiller venüller organlarda. Bu plazma ekstravazasyonu veya bazı tip bir enflamatuar yanıt ortaya çıkabilecek, artmış vasküler geçirgenliği ciddi sonuçlara yol açabilir. Bu nedenle, bu fenomen, nedenleri, modülatörler ve sonuçları, okudu ve anlaşılır, aynı şekilde, müfettişler kadrini ve araçları protokol önemli ve onları çalışma kullanılacak. Endotel boşluklar uyaran bir dizi üretilen ama genellikle peptid nörotransmitter ve/veya tachykinins endothelia üzerinde eylem tarafından üretilmektedir. Artmış plazma ekstravazasyonu oluşur, bu sürecin önemli doğal olarak meydana gelen arabulucular biridir undecapeptide tachykinin peptit, madde P1.

Evans mavi boya albümin-bağlama özelliği kullanmak, araştırmak ve vasküler geçirgenliği veya plazma ekstravazasyonu, ölçmek için yöntemler geliştirilmiştir ve genellikle onların doğruluğu, basitlik, ekonomi, güvenlik ve izin yeteneği için bilinen Hemen, plazma ekstravazasyonu birkaç doku üzerinden belirlenmesi Eğer öyleyse istenen2,3,4,5,6,7,8,9 . Plazma ekstravazasyonu organlarda FVBN farelerin değerlendirmek için bu Evans mavi iletişim kuralı tüm bunlar kullanır, ancak genellikle yararlı ve gelecekteki araştırmalar yapar veya olacak ortalama laboratuvar içeren, uyarlanabilir olsun bazı önemli değişiklikler ekler plazma ekstravazasyonu veya vasküler geçirgenliği ile ilişkili faktörler önemli çalışmalar yapmak. Bu protokol için madde P 1 nmol/kg, hangi 1.5-fold tarafından plazma ekstravazasyonu zenginleştirerek fareler için verilir. Bu daha kolay gözlemlenebilir ve elde edilebilecek sonuçlarında ortaya çıkan protokolü, hassasiyeti artırır. Geçirgenliği gibi çeşitli diğer peptidler, kimyasal madde veya toksik yaralanma, bazı türlerinin etkileyen diğer faktörler kullanılan ya da istediğiniz gibi diğer laboratuvarlar tarafından okudu. Juguler ven enjeksiyonları terminal ameliyat gerektiren Evans mavi ve madde P sistemik, tanıtmak için bu protokol için kullanılır. Ancak, juguler ven enjeksiyonları5,7,10, hatta gerekli terminal cerrahi teknikleri, dikkate sonra daha kolay usta ve diğerinden daha tutarlı sonuçlar üretim yol venöz enjeksiyonu, kuyruk dahil olmak üzere enjeksiyonları4,9damar. Retro-orbital venöz sinüs enjeksiyonları tarafından teslim edilmek üzere mavi Evans için mümkün olabilir, ancak hiçbir başvuru literatürde teslimat Evans mavi bu yöntemi kullanan tespit edilmiştir. Ancak, kuyruk ven enjeksiyon gelince, yüksek seviyede uzmanlık ve büyük ölçüde bu tekniği tekrarlanarak master için pratik kullanımı başarılı Evans mavi enjeksiyonlar için sınırlar. Buna ek olarak, alternatif juguler ven enjeksiyon yöntemi bizim iletişim kuralında, açıklandığı gibi teknik olarak elde edilebilecek bir çözüm sunar. Bir çok önemli fare damar, perfüzyon için müdahalede sonra sadece mavi periosteum Evans fare kurban aşırı Evans mavi boya kaldırır ve bu protokol için standart. Perfüzyon, önceden açıklanan yöntemleri dikkatle inceledi ve mevcut prosedür elde etmek için değiştirilebilir. Burada açıklanan diğer değişiklikler tüm en iyi duruma getirilmiş, basit ve ucuz.

Evans mavi boya yönteminin önemli bazı sınırlamalar vardır. Örneğin, bazen bu yöntemle ilişkili düşük duyarlılık Evans mavi enjekte hayvanlardan dokuların bazı ek brüt patolojik ve histolojik muayene engelleyebilir. Ancak, bu ve diğer sınırlamalar alternatif yöntemler ve yine de, hala Evans mavi kullanan modelleri gelişmesine yol açmıştır. Evans mavi ölçümü Floresan (yerine göre görsel menzilli) spektroskopisi yönteminin duyarlılığını artabilir. Ayrıca, floresans mikroskobu Evans mavi lekeli dokuların daha farklı yerlerde11vasküler sızıntı gözlenmesi için izin vermek için geliştirilmiştir. Ayrıca, tüm vücut görüntüleme ve yaşayan bir hayvan tarama daha önce mavi12 Evans mavi konsantrasyonları incelenmesi için sürekli bir şekilde sağlar Evans ile enjekte yerine bir belirli zaman seçilmiş deneme üzerine gelin. Ancak, bu yöntem uygun görüntüleme özellikleri gerektirir ve çok pahalı olabilir. Değişiklikler, Evans mavi ve gerçekleştirilen bir vitro tür modeli içeren gibi bir hücreye kültür ya da piliç chorioallantoic modeli13 (CAM) Ayrıca tarif edilmiştir. Bu modeller floresans ve intravital14 mikroskobu, tarafından izlenir ve vasküler permeabilite değişiklikleri miktar, zaman içinde izin ama doğru modelleme ile ilgili sorular vivo durumlardan artırabilir ve de kullanabilirsiniz pahalı.

Evans mavi yönetim içermeyen diğer yöntemleri belirlemek ve vasküler sızıntı veya geçirgenliği, ölçmek için geliştirilmiş oldu. Bu Yöntemler (örneğin, albümin veya fluoresein) uygun bir floresan molekül veya canlı hayvanlar için bir isotopically etiketli veya başka bir şekilde etiketlenmiş molekül istihdam (veya modelleri13non-invaziv tarafından takip, kültür veya chorioallantoic (CAM) hücre için görüntüleme (PET tarama, MRI, intravital mikroskobu, tüm vücut tarama) veya invaziv görüntüleme (Floresan Mikroskobu)3,12,15. Her ne kadar bu teknikler mavi yöntemleri bir dizi diğer Evans avantajlar sunabilir, aynı zamanda onların önemli karmaşıklığı, gerekli uzmanlık, kaynak ve yüksek parasal maliyeti içerebilir dezavantajları var.

Neprilysin16 (peptidaz enzim NEP, olarak da bilinen CD10, MME veya Enkephalinase) plazma ekstravazasyonu, en azından bölümünde, enzimatik metabolizma ve endojen madde p. inactivation inhibe içinde dahil olmak için önerilen Böylece, hücre yüzey peptidaz NEP oluşmasına neden olan dokularda olabilir bir zayıflama etkisinin bir madde P, muhtemelen NEP. peptidaz etkinliği tarafından

Başlangıçta, madde P kaynaklı plazma ekstravazasyonu bu değiştirilmiş Evans mavi iletişim kuralı, FVBN vahşi türü (WT) ve NEP nakavt (KO) fare ile kullanmak için test ettik. Madde P artar plazma ekstravazasyonu NEP katılımı bu ilk çalışmalardan şüphelenildi ve bunlar tarif ve daha fazla plazma ekstravazasyonu içeren NEP'ın rolü deneyler. Ancak, bu yazının odak NEP veya plazma ekstravazasyonu rolü değil, ama oldukça plazma ekstravazasyonu kendilerini deneyler. Değiştirilmiş bu iletişim kuralı kullanımı ile elde edilen sonuçlar tür temsilcisi NEP sonuçlarıdır. Evans mavi yöntem plazma ekstravazasyonu ölçmek için en iyi duruma getirilmiş ve FVBN fareler için ayrıntılı olarak açıklandığı gibi değiştirilebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm ilgili uluslararası, ulusal ve/veya kurumsal yönergeleri bakım ve hayvanlar (fare) kullanımı için bu el yazması açıklanan deneylerde takip edildi.

Bu yöntem FVBN yetişkin fareler, 16-20 hafta, bu çalışmanın amaçları için en uygun olduğu tespit yaşlı kullanır. 2 gün 6 ile 7 (Şekil 1) içerir ve adım 1-5 gün 1 içerir.

1. ekipman hazırlık

  1. Ketamin/xylazine anestezik olarak (önerilen) kullanılıyorsa, steril, tek kullanımlık şırınga ve iğne, yeterli kaynağımız tutun. İsoflurane anestezik kullanılırsa, oksijen tüpü ve isoflurane başlamadan önce deney için yeterli malzeme olduğundan emin olmak için sıvı seviyesi kontrol edin. De, devreler nefes nosecone montajı ve indüksiyon kutusuna ekleyebilirsiniz; Yeni kömür kutu nefes devreler ekleyin. İndüksiyon kutusu üzerinde oksijen dönüm ve ikinci aşamada yaklaşık 50 psi okur ascertaining hazırlayın.
  2. 37 ° c ısıtma yastığını açmak
  3. Rektal sıcaklık probu ameliyat için hazırlayın.

2. fare hazırlık

Bu adım, anestezi, epilasyon ve konumlandırma (yetişkin FVBN fareler-yaş 16-20 hafta) içerir.

  1. Fareler tartmak ve ağırlıkları kaydedin.
  2. Fareler anestezi.
    1. Ketamin ve xylazine IP yönetmek (80-100 mg/kg ve 7,5-16 mg/kg, sırasıyla). Ancak, ketamin ve xylazine daha düşük doz ile başlamak tavsiye edilir (30 mg/kg ve 6 mg/kg, sırasıyla).
    2. Anestezi ile yaklaşık 0.1 korumak - ketamin/xylazine ameliyat boyunca doz 0.25 kez ilk. Ketamin ve xylazine daha fazla tekrarlanabilirlik ve Beka gözlendi olarak anestezik temsilcisi belirli bu çalışmada tercih edildi. Anestezik temsilcisi seçim diğer çalışmalarda farklı olduğu tespit.  İsoflurane kullandıysanız, fare bir indüksiyon odasında koymak ve isoflurane %5 için fareyi tam bilincini kaybeder kadar açmak. Daha sonra 1,5-%2,5 isoflurane yordamı kalanı boyunca ayarlamak bir burun nosecone kullanın.
  3. Fareler her 2-3 dk uygun anestezi derinliği için kontrol etmek için ayak çimdik tarafından izlemek.
  4. Fare ventral boyun bölgesi tıraş.
  5. Önceden ısıtılmış panelindeki sırtüstü pozisyonda fareyi getirin. Pençeleri ve ayak bandı ile cerrahi yüzeye fare güvenli.
  6. Suni gözyaşı merhem ameliyat sırasında kurumasını önlemek için gözlerinin üzerine yerleştirin.

3. cerrahi ayrıntıları

  1. 1 cm kesi şu ventral boynundan juguler ven içinde olun.
  2. Lidocaine (% 1-2) bir veya iki damla ağrı yönetimi için ve vazodilatasyon tanıtmak için kesi bölgeye uygulanır. Lidokain etkili olması için 2 dk. bekleyin.
  3. Ortaya çıkarmak ve künt diseksiyon ile Şu iç juguler ven yalıtır. Ven 4-0 sütür ile bağlayın ve yavaşça bir hemostat ile gemi rostral sonu geri çek. Bir delik, ince makas, yaklaşık 3 mm aşağıda veya kaudal bağlamak için damar çapı yaklaşık olarak yarısına kullanarak.
  4. Bir PV-1 Polivinil kateter sonundan itibaren 1.5 cm işaretlemek ve juguler ven bir gemi dilatör kullanarak delikten takın ve kateter gemi, yaklaşık olarak 1.5 cm kaudal sonuna doğru iplik.
  5. Kaudal bölümü (aşağıda kesim), geminin içinde güvenli bir şekilde kateter ile 4-0 ipek. Kateter dışarıya adım 3.3 rostral juguler ven bağlamaya kullanılan dikiş gevşek uçları ile gemi rostral parçası bağla.
  6. Tack cilt gevşek geri birlikte vücut ısı kaybı ve kurutulma dokuların önlemeye yardımcı olmak için 4-0 ipek sondayla çevresinde.
  7. Kateter heparinized serum fizyolojik (10 U/mL) içeren bir şırınga bağlanmak ve kateter floş.

4. enjeksiyonları

  1. Evans mavi çözüm (% 0,9 normal, unheparinized serum fizyolojik veya yaklaşık 50 mg/kg 30 mg/mL solüsyon 50 μL) çizgi temizlemek için heparinized serum küçük bir birim tarafından takip juguler ven kateteri içine enjekte.
  2. 2 dk sonra madde satırı temizlemek için heparinized serum küçük bir birim tarafından takip P (0.3 mikron çözüm % 0,9 normal, unheparinized serum fizyolojik veya 1 nmol/kg 100 μL), enjekte et. Madde P endotel katmanı üzerinden proteinler plazma ekstravazasyonu zenginleştirerek; Bu protokol için rutin olarak plazma ekstravazasyonu değerleri ölçmek daha kolay hale bir büyütme plazma ekstravazasyonu değerleri arasında yaklaşık 1.5-fold neden olmaktadır.
  3. Madde P enjekte sonra 18 dk bekleyin. Bu süre boyunca, Evans mavi boya equilibrate ve dolaşımda.
  4. Deney 18 dk madde P (20 dk sonra Evans mavi enjeksiyon) enjeksiyon sonra fare ile servikal çıkığı feda ederek sona erdirmek. Fareyi doğrudan cervically olabilir muhtemelen çıkık, anestezi, aşırı dozda vermeden faredir muhtemelen hala iyi imzalat ameliyattan. Eğer gerekirse, ancak, aşırı doz anestezikler ketamin/xylazine, isoflurane veya Fentobarbital, servikal çıkığı tarafından takip verilebilir.

5. yalıtım organları

  1. Göğüs boşluğu fare derini yüzüp, kalp ve kan damarlarının 50 mL 50 mM sodyum sitrat, pH 3.5 ile (bir yükseklikten 51 cm veya 20") yerçekimi sıvı. pH 3.5 muhtemelen Evans mavi bağlayıcı albumin için korur.
  2. 1-5 ilgili organları (mendil) (Örneğin idrar kesesi, böbrek, mide, karaciğer, pankreas, distal veya proksimal kolon, ileum, oniki parmak bağırsağı, gögüs deri, kulaklar, kuyruk, kalp, ve/veya akciğer) parçalanmış bir neşter ile tüketim ve eğer herhangi bir kalıntı içeriği kaldırmak mevcut.
  3. Oda sıcaklığında (RT) fosfat tamponlu tuz (PBS; Na2HPO4, KH2PO4, 8.0 g 0,24 g NaCl 1.44 g ve 1 L, pH 7.4 KCl 0.20 g) organları durulayın.
  4. Doku organlarla leke, her organ yarıya ve her yarı ağırlığında (ıslak ağırlıkları, g).
  5. Bir kuru bir kurutma fırın 48 h için folyo üzerinde 150 ° C'de dokusunda yarısı.
  6. Formamide bir microfuge içinde tutarlı hacmi (en fazla 200 µL) ikiye tüp 48 h için (ve en fazla 72 s) diğer doku yerleştirmek mavi Evans ayıklamak için.

6. ölçüm doku OD

  1. Evans mavi-infüzyon formamide (48-72 h RT kuluçka sonra) 50 µL microfuge tüp ve yer 96-şey polistiren tabakta bir kuyunun içine çıkarın. Doku parçaları ile birlikte formamide aktarmak için dikkatli olun.
  2. Yeni, saf formamide her iki boş Wells 96-şey plaka boşlukları için yer 50 µL.
  3. Ölçü ve kaydı 96-şey plaka üzerinde bir absorbans plaka okuyucu her şey OD620 . 620 nm olduğunu absorbans max Evans mavi.

7. plazma ekstravazasyonu hesaplanması

  1. Kuru doku tartmak yarısı 48 h fırında olmuştur.
  2. Bu aynı doku kuru ağırlığının tarafından yarı bölünmüş belirli organ dan bireysel her fare (içinde elde edilen adım 5,4), yarı başlayan bu doku ıslak ağırlık ile ilgi (içinde elde edilen adım 7.1) ıslak ağırlık/Kuru ağırlık oranını hesaplamak.
  3. Kuru ağırlık (g) dokusunun formamide ikiye yarısı daha önce yerleştirilir (5.4. adımda elde) formamide tarafından ıslak mendil ıslak ağırlığına bölünerek hesaplamak: Kuru ağırlık oranı (7,2 adımda hesaplanır) ilgi belirli organ için.
  4. OD620 düzeltilmiş değerleri hesaplar. İle OD620 başlangıç değeri (Evans formamide 6,3. adımda elde her dokusundan mavi-infüzyon içeren) 96-şey plaka deneysel her kuyudan çıkarmak boş iyi OD620 değeri (ortalama OD620 değeri saf formamide, 6.2, adımda hazırlanan içeren iki kuyu 6.3. adımda elde620 değerleri OD) deneysel her değerinden.
  5. Plazma ekstravazasyonu değer doku kuru ağırlığının tarafından düzeltilen OD620 (içinde hesaplanan adım 7,4) bölerek formamide (içinde hesaplanan adım 7.3) ikiye hesaplayın. Plazma ekstravazasyonu birim OD620/g kuru ağırlık olacaktır.
  6. Verileri çözümlemek ve SEM istatistiksel ortalama ± karşılaştırmak gibi gruplar t testi veya tek yönlü varyans analizi ve Scheffé'ın çoklu karşılaştırma testi (lycofs01.lycoming.edu), uygun olarak ifade eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1' de, bir şematik yordam, hangi FVBN farelerin organları en güvenilir ve tutarlı madde P kaynaklı plazma ekstravazasyonu değerleri neden tespit edilmiştir gösterilir. Bu yordam genellikle iş, bekleme süresi en az 48 saat tarafından ayrılmış iki gün sürer. Bu karşılaştırılmak üzere tüm deneylerin tutarlı bir şekilde yapılırsa daha, yaymak mümkündür. Organları üzerinde gün 1 izole sonra Örneğin, organları sıvı azot içinde donmuş ve-80 ° C'de depolanan fl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Yukarıda da açıklandığı gibi plazma ekstravazasyonu çalışmanın sonuçta nedenleri ile ilgili yeni bilgi ya da inhibe veya plazma ekstravazasyonu tedavi etmek için yeni yollar açabilir. Başarılı kullanımı, plazma ekstravazasyonu Protokolü (üstte), Evans mavi boya, kullanarak geçerli el yazması kanıtlanmıştır. Her ne kadar gösterilen verileri NEP damarlara korusun hipotez plazma ekstravazasyonu karşı bu bir ikincil halen, kolayca ortalama laboratuvar için kullanılabilir en iyi duruma getirilmiş bir iletişim kuralı sunmak iç...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar Andy Poczobutt ve Dr. Jori Leszczynski onların değerli yardım ve düzenlemeleri için bu el yazması için teşekkür etmek istiyorum.  Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (NHLBI RO1 HL078929, PPG HL014985 ve RO3 HL095439) ve gazileri departmanı işleri (Merit Review) alınan hibe tarafından desteklenen.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
isofluranVet One200-070inhale anestezik
ketaminVet One200-055enjekte edilebilir anestezik
ksilazinLloyd Laboratories139-236enjekte edilebilir anestezik
şırınga (10,3 & 1 cc)Becton Dickinson309604, 309657, 309659
iğneleri (20G1,23G1 & 26G1/2)Becton Dickinson305178, 305193, 305111
izofluran indüksiyon odasıVetEquip9414431 Litre
nosekon solunum devreleri VetEquipRC2Kemirgen Devre Kontrol Cihazı 2
oksijen tankıAirgasUN 1072%100 tıbbi
ısıtma yastığıCWE Inc.TC-1000sıcaklık kontrol cihazı
rektal sıcaklık probuCWE Inc.10-09012fare
terazisi (kemirgenler için)OhausCS 2000
cerrahi aletler-makasGüzel Bilim aletleri15000-00Vannas Yaylı makas 3mm düz bıçak (kesme kapları)   
cerrahi aletler-forsepsGüzel Bilim aletleri11151-10Graefe ekstra ince forseps (fare damarlarını izole etme)
cerrahi aletler-hemostatlarGüzel Bilim aletleri13009-12Halstead-sivrisinek kanama durdurucular (künt diseksiyon, tutma dokusu)
cerrahi aletler -sütür sürücüleriGüzel Bilim araçları12502-12Olsen-Hegar sütür sürücüleri (dikiş)
cerrahi aletler-forsepsİnce Bilim araçları11627-12Adson-Brown timsah forseps (doku kavrama, dikiş, sıçan)
cerrahi aletler-makasGüzel Bilim aletleri14110-15Mayo sert kesim makas 15 cm (cerrahi, diseksiyon, kemikler, sıçan)
cerrahi aletler-forsepsGüzel Bilim aletleri18025-10sütür bağlama forseps (Millar kateter için kullanılır)
cerrahi aletler-makasGüzel Bilim araçları14078-10Lexer Baby makas düz (cerrahi, fare)
cerrahi aletler-forsepsGüzel Bilim aletleri11254-20Dumont #5 ince uçlu forseps (sıçan damarları, diseksiyon)
cerrahi aletler-makasGüzel Bilim araçları14082-09Dissektör makası 12 mm (cerrahi, sıçan fare)
cerrahi aletler-forsepsGüzel Bilim aletleri11051-1010 cm Graefe forseps (doku kavrama, sıçan faresi)
cerrahi aletler-forsepsGüzel Bilim aletleri11251-35Dumont 5/45 forseps (damarlar için tanıtıcı)
cerrahi aletler-ekartörlerGüzel Bilim aletleri17012-11Weitlaner ekartörleri 2/3 diş (sıçan cerrahi)
cerrahi aletler-forsepsGüzel Bilim araçları11294-00Dumont #4 forseps (damar izolasyon sıçanları, fareler)
cerrahi aletler-forsepsİnce Bilim aletleri11297-00Dumont #7 forseps (doku kavrama, diseksiyon)
cerrahi aletler-makasGüzel Bilim aletleri14058-11sert kesim iris makası (fare diseksiyonu, kemikler)
cerrahi aletler-forsepsGüzel Bilim araçları11009-13tırtıklı, kavisli Semken forseps (doku kavrama, fare faresi)
cerrahi aletler-hemostatlarGüzel Bilim araçları13003-10Hartman kavisli hemostatlar (künt diseksiyon, doku tutma)
cerrahi aletler-forsepsGüzel Bilim araçları11006-12Adson tırtıklı forseps (doku kavrama)
makasıOsterA5
bantFisherbrand159015G
yapay gözyaşı merhemiAkorn Inc13985-600-03
lidokainHospira0409-4277-01%2 enjekte edilebilir
polivinil kateterlerTygonPV-1
Evans maviSigma AldrichE2129
Madde PBachem H-1890
heparinSagent İlaç25201-400-101000 U / ml
tuzlu su çözeltisiHospira0409-7138-090.9 sodyum klorür
fenobarbital ve nbsp;Vortech0298-9373-68
sodyum sitratFisher ScientificBP327-1
PBSSigma AldrichP4417-50TAB 
Kurutma için KimwipesFisher Scientific06-666A
formamidSigma Aldrich47670
mikroteraziDenver EnstrümanAPX-60
mikrofüj tüpleriFisher Scientific07-200-534
polistiren 96 kuyulu plakaBecton Dickenson351172
emicilik plakası okuyucuBioTekSynergy 2
poliakrilamid jellerBio-Rad3450014 
protein moleküler ağırlık standardıBio-Rad1610374
Protran destekli nitroselülozAmersham (GE)10600015
jel kutusuBio-Rad1658005
TrisFisher ScientificBP152-1
Tween20Sigma AldrichP-1379
sodyum klorürFisher BilimselS271-1
primer NEP poliklonal antikoru Ar-Ge D SistemleriAF1182
doksisiklin chowTeklad (HARLAN)TD.130750 
FVB / NJ vahşi tip farelerJackson001800
ikincil antikor (keçi anti-tavşanı)ZyMed81-6120
ECL çözeltisi-Western Lightening PlusPerkinElmerNEL104001EA
filmiPierce34091
%

Kaynaklar

  1. Snijdelaar, D. G., Dirksen, R., Slappendel, R., Crul, B. J. Substance P. Eur J Pain. 4 (2), 121-135 (2000).
  2. Rubinstein, I., Iwamoto, I., Ueki, I. F., Borson, D. B., Nadel, J. A. Recombinant neutral endopeptidase attenuates substance P-induced plasma extravasation in the guinea pig skin. Int Arch Allergy Appl Immunol. 91 (3), 232-238 (1990).
  3. Szabo, A., Menger, M. D., Boros, M. Microvascular and epithelial permeability measurements in laboratory animals. Microsurgery. 26 (1), 50-53 (2006).
  4. Radu, M., Chernoff, J. An in vivo assay to test blood vessel permeability. J Vis Exp. (73), e50062(2013).
  5. Moitra, J., Sammani, S., Garcia, J. G. Re-evaluation of Evans Blue dye as a marker of albumin clearance in murine models of acute lung injury. Transl Res. 150 (4), 253-265 (2007).
  6. Figini, M., et al. Substance P and bradykinin stimulate plasma extravasation in the mouse gastrointestinal tract and pancreas. Am J Physiol. 272 (4), Pt 1 785-793 (1997).
  7. Awad, A. S., et al. Selective sphingosine 1-phosphate 1 receptor activation reduces ischemia-reperfusion injury in mouse kidney. Am J Physiol Renal Physiol. 290 (6), 1516-1524 (2006).
  8. Lu, B., et al. The control of microvascular permeability and blood pressure by neutral endopeptidase. Nat Med. 3 (8), 904-907 (1997).
  9. Gendron, G., Simard, B., Gobeil, F., Sirois, P., D'Orleans-Juste, P., Regoli, D. Human urotensin-II enhances plasma extravasation in specific vascular districts in Wistar rats. Can J Physiol Pharmacol. 82 (1), 16-21 (2004).
  10. Xu, Q., Qaum, T., Adamis, A. P. Sensitive blood-retinal barrier breakdown quantitation using Evans blue. Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (3), 789-794 (2001).
  11. Saria, A., Lundberg, J. M. Evans blue fluorescence: quantitative and morphological evaluation of vascular permeability in animal tissues. J Neurosci Methods. 8 (1), 41-49 (1983).
  12. Fricke, I. B., et al. In vivo bioluminescence imaging of neurogenesis - the role of the blood brain barrier in an experimental model of Parkinson's disease. Eur J Neurosci. 45 (7), 975-986 (2017).
  13. Pink, D. B., Schulte, W., Parseghian, M. H., Zijlstra, A., Lewis, J. D. Real-time visualization and quantitation of vascular permeability in vivo: implications for drug delivery. PLoS One. 7 (3), 33760(2012).
  14. Jain, R. K., Munn, L. L., Fukumura, D. Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy. Nat Rev Cancer. 2 (4), 266-276 (2002).
  15. Vandoorne, K., Addadi, Y., Neeman, M. Visualizing vascular permeability and lymphatic drainage using labeled serum albumin. Angiogenesis. 13 (2), 75-85 (2010).
  16. Turner, A. J., Nalivaeva, N. N. Proteinase dysbalance in pathology: the neprilysin (NEP) and angiotensin-converting enzyme (ACE) families. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 52 (4), 40-48 (2006).
  17. Lu, B., Gerard, N. P., Kolakowski, L. F., Finco, O., Carroll, M. C., Gerard, C. Neutral endopeptidase modulates septic shock. Ann N Y Acad Sci. 780, Mar 22 156-163 (1996).
  18. Dempsey, E. C., et al. Neprilysin null mice develop exaggerated pulmonary vascular remodeling in response to chronic hypoxia. Am J Pathol. 174 (3), 782-796 (2009).
  19. Karoor, V., Oka, M., Walchak, S. J., Hersh, L. B., Miller, Y. E., Dempsey, E. C. Neprilysin regulates pulmonary artery smooth muscle cell phenotype through a platelet-derived growth factor receptor-dependent mechanism. Hypertension. 61 (4), 921-930 (2013).
  20. Chu, P., Arber, D. A. Paraffin-section detection of CD10 in 505 nonhematopoietic neoplasms. Frequent expression in renal cell carcinoma and endometrial stromal sarcoma. Am J Clin Pathol. 113 (3), 374-382 (2000).
  21. Bircan, S., Candir, O., Kapucuoglu, N., Serel, T. A., Ciris, M., Karahan, N. CD10 expression in urothelial bladder carcinomas: a pilot study. Urol Int. 77 (2), 107-113 (2006).
  22. Koiso, K., Akaza, H., Ohtani, M., Miyanaga, N., Aoyagi, K. A new tumor marker for bladder cancer. Int J Urol. 1 (1), 33-36 (1994).
  23. Wick, M. J., et al. Protection against vascular leak in neprilysin transgenic mice with complex overexpression pattern. Transgenic Res. 25 (6), 773-784 (2016).
  24. Natah, S. S., Srinivasan, S., Pittman, Q., Zhao, Z., Dunn, J. F. Effects of acute hypoxia and hyperthermia on the permeability of the blood-brain barrier in adult rats. J Appl Physiol. 107 (4), (1985) 1348-1356 (2009).
  25. Scholzen, T. E., et al. Neutral endopeptidase terminates substance P-induced inflammation in allergic contact dermatitis. J Immunol. 166 (2), 1285-1291 (2001).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Evans Blue BoyasPlazma EkstravazasyonuFare OrganlarKateterizasyon ProtokolSubstans P EnjeksiyonuNeprilysin KnockoutOrgan zolasyonuBoya EkstraksiyonuHeparinli Salin
En iyi duruma getirilmiş bir Evans mavi Mouse vasküler sızıntı değerlendirmek için iletişim kuralı
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.