Mantar önleyici bileşikler ve özleri süzmek için bir kolay ve uyarlanabilir suyu microdilution yöntem.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Suyu Microdilution Vitro tarama: yeni mantar önleyici bileşikler algılamak için kolay ve hızlı bir yöntem
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Mantar enfeksiyonları son yıllarda önemli bir sağlık sorunu haline gelmiştir, ancak kullanılabilir antifungal ilaçlar sayısı sınırlıdır. Bu senaryoda, yeni antifungal ilaçlar için arama gereklidir. Rapor burada protokol ekran peptidler bir yönteme antifungal özellikleri için ayrıntıları. Suyu microdilution duyarlılık testi olarak potansiyel yeni Antifungaller antimikrobiyal peptidler araştırma uygun değişiklikler klinik ve laboratuvar Standartları Enstitüsü (CLSI) M27-A3 kurallarına dayanmaktadır. Bu iletişim kuralı antifungal bileşikler etkinliğini değerlendirmek için işlevsel bir tahlil açıklar ve soruşturma altında moleküllerin belirli herhangi bir sınıf uyacak şekilde kolayca değiştirilebilir. Deneyleri 96-şey levha küçük birimleri kullanarak gerçekleştirilen bu yana, büyük ölçekli bir tarama zaman, kısa bir miktarda Eğer özellikle bir otomasyon ortamda yürütülen tamamlanabilir. Bu yordamı bir standart ve ayarlanabilir klinik protokol Mantar hastalıkları tedavi geliştirmek için yeni moleküller tezgah-iş arayışı nasıl yardımcı gösterilmiştir.
Giriş
Mantar enfeksiyonları haline gelmiştir önemli bir tıbbi endişe son yıllarda önemli ölçüde ana toprak dolay iden bu kanser tedavisi ve HIV/AIDS ile yaşayan geçiyor gibi immün sayisi bir artış artış veya organ1,2nakledilmektedir. Ancak, çok sınırlı bir dizi kullanılabilir antifungal ilaçların ve onlara mantar direnç raporlarda artan sayıda büyük sorunlar sistemik Mikozlar3tedavi ile ilgili katkıda bulunur.
Yeni mantar önleyici bileşikler potansiyel kaynağı antimikrobiyal peptidler (Amper), enfeksiyon4onların doğuştan gelen bağışıklık yan....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. çözümler ve medya
- 2 X Roswell Park Memorial Enstitüsü (RPMI) 1640 orta, fosfat tamponlu tuz (PBS), Sabouraud dekstroz suyu ve Sabouraud dekstroz agar Tablo 1göre hazırlayın.
2. mantar Inoculum büyüme koşulları
- İhtiyaç kadar % 35 gliserol-80 ° C'de donmuş hisselerinde olarak tüm mantar suşları depolar.
- Her deneme önce aşağıdaki adımları uygulayın.
- Candida albicans suşları için:
- Bir hisse senedi şişe çözülme ve Sabouraud dekstroz suyu bir kap ve kültür gecede 30 ° C'de ajitasyon (200 devir/dakika) ile bir steril 50 mL polipropilen tüp 10 mL 200 µL aktarmak. Tüp e....
- Candida albicans suşları için:
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Mikrofon tamamen kuluçka dönemi sonundaki görünür mantar büyümesini engeller en düşük antimikrobiyal bileşik toplama olarak tanımlanır. Amacı bu iletişim kuralı, ekran potansiyel Antifungaller hızlı bir yönteme sahip olduğundan, herhangi bir şey ile bulanıklık negatif/büyüme denetim wells için benzer ise herhangi bir şey ile açık kitle iletişim araçları için boş wells benzer olumlu bir sonuç olarak kabul edilir negatif olarak kabul. Ancak, belirli bir AMP fungistatic veya mantar olduğunu .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Microdilution testleri bir hedef bahçedeki küçük miktarlarda kullanarak bileşik potansiyel antifungal etkinliğini analiz ve aynı zamanda konsantrasyonları bir dizi test. Buna göre bu iletişim kuralı tarama potansiyel yeni mantar önleyici bileşikler için bir ilk adım olarak önerilir. Burada sunulan Protokolü başlangıçta klinikler, antifungal tedavi seçiminde yardımcı olmak için tasarlanmış M27-A3 Protokolü dayanmaktadır ve yeni mantar önleyici bileşikler çeşitli için adapte edilebilir. Genel olarak, bu iletişim kuralını ö.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
BURUNLARI-Brezilya, CNPq-Brezilya, FAP/DF mali destek için teşekkür ediyoruz. El yazması gözden geçirilmesi için Dr. Hugo Costa Paes için minnettarız.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
Ekipman ve diğer malzemeler
Fosfat 10 mM)Fosfat tamponlu salin (PBS) için Çok kanallı pippet
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Ortam ve Reaktifler | |||
| RPMI 1640 l-glutamin içeren ortam, sodyum bikarbonat içermez | Thermo Fisher | 31800-022 | |
| 3-(N-morfolino) propan sülfonik asit (MOPS) (o que a gente usa tem um só dio, completa o nome dele lütfen) | Sigma-Aldrich | 2X RPMI ortamını tamponlamak için kullanın | |
| Sodyum klorür (NaCl) | Dinâ mika | 1528-1 | Fosfat tamponlu salin (PBS) için 137 mM) |
| Potasyum klorür (KCl) | J.T.Baker | 3040-01 | Fosfat tamponlu salin (PBS) için 2.7 mM) |
| Sodyum fosfat dibazik (Na2HPO4) | tamponlu salin (PBS) için | Sigma-Aldrich | V000129 |
| Potasyum dihidrojen fosfat (KH2PO4) | Sigma-Aldrich | 60230 | 2 mM |
| BD Difco Sabouraud dekstroz suyu | BD | 238230 | |
| BD Difco Sabouraud Dekstroz Agar | BD | 210950 | |
| Gliserol | Sigma-Aldrich | V000123 | %35 (soluç ã O de estoque? Criopreservaç ã o?) |
| Steril su | Para diluiç ã o das drogas na diluiç ã o seriada | ||
| Antifungal ilaçlar | |||
| Amfoterisin B | Sigma-Aldrich | A2942 | |
| Flukonazol | Sigma-Aldrich | F8929 | |
| Kapofungin | Sigma-Aldrich | PHR1160 | |
| Plastikler | |||
| 50 mL konik tüp | Sarstedt | 62.547.254 | |
| Çanak petri | J.Prolab | 0304-5 | |
| 96 kuyulu plaka | Corning | 3595 | |
| Steril Çözelti Rezervuarı | KASVI | K30-208 | |
| Optik mikroskop | Nikon kullanarak çözümleri pippet etmek için kullanın | E200MV | |
| Santrifüj | Thermo Fisher | MegaFuge 16R | |
| İnkübatör | Ethik Teknolojisi | 403-3D | 37 & deg'e ayarlandı; C |
| Shaker | New Brunswick Scientific | Excella E25 | 37°'e ayarlandı; C, 200 RPM |
| Hücre sayma odası, Neubauer | BOECO Almanya | BOE 13 | |
| Çok kanallı pipet | HTL | 5123 |
Kaynaklar
- Armstrong-James, D., Meintjes, G., Brown, G. D. A neglected epidemic: fungal infections in HIV/AIDS. Trends Microbiol. 22 (3), 120-127 (2014).
- Romani, L. Immunity to fungal infections. Nat Rev Immunol. 11 (4), 275-288 (2011).
- Pfaller, M. A.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
