Method Article

Kantitatif analiz Drosophila nöronal dendritik Arborization karmaşıklığı

DOI:

10.3791/57139

⸱

January 7th, 2019

 ,  , 
1Genetics and Aging Research Unit, Department of Neurology, Massachusetts General Hospital, Mass General Institute of Neurodegenerative Disease, 2Department of Geriatric Neurology, Nanlou Clinical Division, PLA General Hospital

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu iletişim kuralı dendritik morfogenez çalışmaları için kullanılan Drosophila, nöronal dendritik arborization karmaşıklık (NDAC) kantitatif analiz üzerinde duruluyor.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dendrites bir nöron dallı projeksiyonları vardır ve sinir sisteminin gelişimi sırasında sinaptik kuruluşunda dendritik morfoloji yansıtır. Drosophila larva nöronal dendritik arborization (da) morfogenez sinir dendrites ve gen fonksiyon sinir sisteminin gelişiminde eğitim için ideal bir modeldir. Da nöronların dört sınıflardır. Sınıf IV en neredeyse larva beden Duvarı'nın tüm alanı kaplamaktadır dallanma desenli karmaşıktır. Daha önce SOX5 Drosophila ortholog Sınıf IV nöronal dendritik arborization karmaşıklık (NDAC) dört parametre kullanarak susturmak etkisini nitelendirmiştir: dendrites uzunluğu, dendrite kapsama, yüzey alanı Şube ve dallanma yapısı toplam sayısı. Bu iletişim kuralı NDAC kantitatif analiz, larva diseksiyon, confocal mikroskobu ve görüntü analiz prosedürleri ImageJ yazılımını kullanarak iş akışı sunar. Da nöronal gelişim ve onun temel mekanizmaları içine daha fazla fikir nöronal fonksiyon anlayış geliştirmek ve nörolojik temel nedenleri hakkında ipuçları sağlayabilir ve nörogelişimsel bozukluklar.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dendrites, bir nöron dallı projeksiyonlar olan nöron'ın duyusal ve sinaptik girişleri diğer neurons1,2kapsar alan kapak. Dendrites sinaps oluşumu önemli bir bileşenidir ve sinaptik girişleri entegre yanı sıra bir nöron elektrokimyasal stimülasyon yayılıyor kritik bir rol oynamaktadır. Dendritik arborization (da) hangi nöronlar yeni dendritik ağaçlar ve dalları yeni sinapslar oluşturmak için formu bir süreçtir. Geliştirme ve morfoloji da şube yoğunluğu ve gruplandırma desenleri, gibi çok adımlı biyolojik süreçlerden neden ve son derece için nöronal fonksiyonu ilişkili. Bu iletişim kuralının amacı nöronal dendri....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. deneysel hazırlık

  1. Aşağıdaki reaktifler hazırlamak: Dulbecco'nın fosfat tamponlu tuz (PBS); Triton X-100; %0,2 PBST (PBS + % 0,2 Triton X-100); % 32 paraformaldehyde (PFA), %4 kullanmadan önce içine seyreltilmiş; silikon elastomer Bankası ve kür Ajan; antifade montaj Orta (Örneğin, uzatmak altın); ve tırnak Lehçe.
  2. Aşağıdaki donanımları hazırlamak: diseksiyon mikroskop, iki keskin forseps ve makas mikrodiseksiyon, pins mikrodiseksiyon, diseksiyon çanak, mikroskop slaytlar ve coverslips, confocal mikroskop yapmak için bir petri için bir dizi için ve bir Fiji ImageJ yazılımı yüklü bilgisayar.

2. larvalar kole....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dendrites da nöronların co-overexpressing GFP (UAS GFP; ppk-GAL4) tarafından da sinirsel soma ve dendritik arbors GFP floresans analiz görüntüleme için etiketli. Da nöron dendrites morfoloji bir ters confocal mikroskobu (Şekil 2) tarafından görüntüsü.

Dendrites da nöronların Fiji ImageJ yazılımını kullanarak takip edildi. Dosyayı dendrite uzunluğu (Şekil 3) tahmin etmek.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Epidermis innervate dendrites nöronların giriş bölgeleridir ve onların türleri morfoloji nasıl bilgi alınır ve bireysel nöronlar tarafından işlenen belirler. Geliştirme dendrite morfoloji gen modülasyon dendrite organizasyon yansıtır. Drosophila larva da nöron periferik sinir sisteminin dendrite geliştirme eğitimi için önemli bir model olduğunu: 1) memeliler11,12ile; fonksiyonel benzerlik 2) dört sınıf ayrımlar dendrite yapısı11

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

William A. Eimer görüntüleme teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser tedavisi Alzheimer Fonu'na [R.E.T], tarafından desteklenen Ulusal Enstitüsü Sağlık [R01AG014713 ve R01MH60009 için R.E.T; R03AR063271 ve Al R15EB019704] ve Ulusal Bilim Vakfı [NSF1455613 için al].

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Fosfat tamponlu salin (PBS)Gibco Yaşam Bilimleri10010-023
TritonX-100Fisher Scientific9002-93-1
Paraformaldehit (PFA)Elektron Mikroskobu Bilimleri15714-S
Sylgard 184 silikon elastomer baz ve kürleme maddesiDow Corning Corportation3097366-0516; 3097358-1004
ProLong Altın Antifade MountantThermo Fisher ScientificP36931
Tırnak cilası CVS72180
Stereo mikroskopNikonSMZ800
Konfokal mikroskopNikonEclipse Ti-E
Petri kabıFalcon353001
ForsepsDumont11255-20
Makas Roboz Cerrahi Alet CoRS-5611
Böcek İğneleri Roboz Cerrahi Alet CoRS-6082-25
Mikroskop slaytları ve lamelFisher Scientific15-188-52

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wassle, H., Boycott, B. B. Functional architecture of the mammalian retina. Physiol Rev. 71 (2), 447-480 (1991).
  2. MacNeil, M. A., Masland, R. H. Extreme diversity among amacrine cells: implications for function. Neuron. 20 (5), 971-982 (1998).
  3. Losonczy, A., Makara, J. K.,....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Dendritic ArborizationNeuronal MorphologyDrosophila LarvaeConfocal MicroscopyImageJ AnalysisDendrite Length MeasurementSurface Area CalculationBranching Structure AnalysisSOX5 Gene SilencingZ series Imaging

Related Articles