Protokol bir küresel perfusable vasküler ağlarda mühendisi açıklar. Küresel'ın çevresindeki microenvironment angiogenez teşvik ve küresel bir mikrosıvısal cihazın mikro bağlanmak için planlanmaktadır. Yöntemi uzun zamandır beklenen tekniktir üç boyutlu kültürlerde küresel perfüzyon sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Perfusable vasküler ağ özellikli bir doku içinde bir mikrosıvısal aygıt
Bu makalede
Özet
Özet
Bir küresel (çok hücreli agrega) insan vücudunun içinde yaşayan doku iyi bir model olarak kabul edilir. Küresel kültürler içinde önemli ilerleme rağmen pulcuklarının perfusable vasküler ağlarda korumak ve protein ifadeler ve morfogenetik gibi işlevlerini geliştirmek için gerekli uzun vadeli kültür için kritik bir meydan okuma kalır. Protokol perfusable bir damar ağı içinde küresel bir mikrosıvısal cihazın entegre etmek için yeni bir yöntem sunuyor. Küresel perfusable vasküler ağlarda ikna etmek için mikro için bağlı anjiogenik lahanası için küresel anjiogenik faktörler küresel kültürlü insan akciğer fibroblastlar üzerinden kullanarak destekli. Anjiogenik lahanası küresel işbirliği kültürlü endotel hücreleri ile birleştirilmiş küresel ulaştı ve sürekli bir damar ağı kurdu. Vasküler ağ olmadan herhangi bir küresel iç sıvı. İnşa vasküler ağ daha fazla besin temini ve atık ürünlerin, kan dolaşımını içinde vivotaklit kaldırılması için bir yol olarak kullanılabilir. Yöntemi küresel kültür yaşam dokuların daha iyi Rekapitülasyon doğru yeni bir platform sağlar.
Giriş
Üç boyutlu bir kültüre monolayer (iki boyutlu) kültüründen değişen motive yaşayan hücresel işlevlerini taklit kültür modelleri ile çalışması gerektiğinden dokular1,2,3. Düz ve sert plastik yüzeylerde yaygın olarak kullanılan hücre kültüründe insan vücudu hücre dışı ortamlarda çoğu benzer değil. Aslında, birçok çalışma o üç boyutlu kültür yeniden doku özgü mimari, mekanik ve biyokimyasal ipuçları ve hücre-hücre iletişim, geleneksel iki boyutlu kültür4' tegözlenen değil göstermek, 5,6....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. mikrosıvısal aygıt kalıp imalatı
- Piyasada bulunan yazılım kullanarak mikrosıvısal aygıt desen tasarım (Clewin5 veya AutoCAD 2016, vs.). Clewin5 işlevi için (http://manualzz.com/doc/7159150/clewin-user-s-manual) kullanım kılavuzuna başvurun.
Not: Tasarım dosyası ek dosya 1' de kullanılabilir. - Bir mikro desen jeneratör için tasarım dosya transferi ve olumlu fotorezist ile kaplı bir krom maske aracı yükleyin.
- Bir mikro Desen Oluşturucu'yu kullanmamanızı desen alanında pozitif fotorezist maruz.
- Geliştirici (Tablo reçetesi) kullanarak pozitif fotorezist geliştirmek ve maskeyi deiyonize....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1 bir tasarım ve fotoğraf mikrosıvısal cihazın gösterir. Hangi kanalda 2 küresel de içeren üç paralel kanal içerir. Kanal 1 ve 3 HUVEC kültürü için kullanılan ve 2 için küresel kanalıdır. Her kanal trapez microposts desen PDMS tasarlanmış ayrılır. Microposts Kanal 2 hidrojel yüzey gerilimi tarafından kanallarına 1 ve 3 sızıntı önlemek ve mikro28arasında küresel ve HUVECs maddelerin değişimi sağlar.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Önceki raporları hLFs angiopoietin-1, angiogenin, hepatosit büyüme faktörü, büyüme faktör-α, tümör nekrozis faktör ve bazı hücre dışı matriks proteinleri29dönüşüm gibi birden çok anjiogenik faktörlerin bir kokteyl salgılar göstermek, 30. Bu tahlil anjiogenik salgı ilgili kısıtlama tekniği, coculture küresel hLFs üzerinden kullanır. Bu nedenle, coculture küresel ve Kanal 1 ve 3 HUVECs arasındaki mesafe kısaltılmış bir kuyunun dibinde bir coculture küresel ayarlam.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazar ilan hiçbir rakip mali çıkarlarının zorundalar.
Teşekkürler
Bu eser CREST JST (grant sayı JPMJCR14W4), toplum için promosyon, bilim (JSP'ler) KAKENHI (grant sayı 25600060, 16 K 16386), MEXT ve JST, proje anahtar değerlendirme teknoloji geliştirme odaklı yenilik Program Merkezi tarafından desteklenmiştir Tıbbi araştırma ve geliştirme, AMED, Mizuho temel bilimler tanıtımı için Japonya Ajansı. Microfabrication Kyoto Üniversitesi Nano teknoloji Hub tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| AutoCAD 2017 | Autodesk | AutoCAD 2017 | |
| AZP 1350 ile kaplanmış bir krom maske. | TEMİZ YÜZEY TEKNOLOJİSİ | CBL2506Bu-AZP | |
| Mikro model üreteci | Heidelberg | uPG101 | |
| MF CD-26 geliştiricisi | Rohm ve haas elektronik | malzemeler-Protokol | 1.4 |
| S-Clean | Sasaki Chemical | S-24 | Protokolde krom aşındırıcı 1.5 |
| Aseton | Wako | 012-00343 | |
| Silikon Gofret | Canosis | SiJ-4 | |
| Spin Kaplayıcı | MIKASA | 1H-D7 | |
| Heksametildisilazan (HMDS) | Tokyo Ohka Kogyo | H0089 | |
| SU-8 3050 | MicroChem-Negatif | fotorezist protokol 1.9 | |
| UV Maruz Kalma | Nanometrik Teknoloji Inc | LA310s | |
| SU-8 Geliştirici | MicroChem | Y020100 | Protokol 1.13'te negatif fotorezist için geliştirici |
| 2-propanol | Wako | 163-04841 | |
| Yüzey profilleyici | Veeco | Veeco Dektak XT-S | |
| (Trikloro (1H, 1H, 2H, 2H-perflorooktil) silan | Sigma | 448931 | |
| Polidimetilsiloksan (PDMS) | Dow Corning Toray | 184W/C | |
| Biyopsi Punch (1.0mm) | Kai Industries | BP-10F | |
| Biyopsi Punch (2.0mm) | Kai Industries | BP-20F | |
| Plazma Sistemi | Femto Science | COVANCE | |
| Kapak camı | MATSUNAMI CAMI | C024241 | |
| Kültür Yemekleri | Iwaki | 1000-035 | |
| RFP İnsan Göbek Veni Endotel Hücresi | Anjiyo Proteomie | Eksprese Etme cAP-0001RFP | |
| Normal İnsan Akciğer Fibroblastları | Lonza | CC-2512 | |
| Endotel Hücre Büyüme Ortamı | Lonza | CC-3162 | |
| Fibroblast Büyüme Ortamı Kitleri | Lonza | CC-3132 | |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific | 11965092 | |
| Fetal Sığır Serumu | Thermo Fisher Scientific | 26140079 | |
| Penisilin-Streptomisin Çözeltisi | Wako | 168-23191 | |
| 0.05w/v% Tripsin-0.53mmol/l EDTA&boğa; Fenol | Wako | 204-16935 | |
| PBS (Fosfat Tamponlu Tuzlar) | Takara bio | T900 | |
| 96 oyuklu plaka | Sumitomo bakalit | 631-21031 | |
| 1000ul Çip | NIPPON Genetik | FG-402 | |
| 200ul ve nbsp; Çip | NIPPON Genetik | FG-301 | |
| 10ul Çip | NIPPON Genetik | 37650 | |
| CO2 inkübatörü | Thermo Fisher Bilimsel | Model 370 | |
| GFP İnsan Göbek Veni Endotel Hücresi | Anjiyo Proteomie | cAP-0001GFP | |
| Sığır plazmasından fibrinojen | Sigma | F8630 | |
| Sığır akciğerinden aprotinin | Sigma | A6279 | |
| Kollajen I | Corning | 354236 | |
| Sığır plazmasından trombin | Sigma | T4648 | |
| Hoechst 33342 | Invitrogen | H21492 | Protokol 5.5'te çekirdekleri boyamak için floresan boya |
| Paraformaldehit Çözeltisi | Wako | 163-25983 | |
| Ters Floresan Mikroskobu | OLYMPUS | IX71 | |
| Dijital CCD Kamera | OLYMPUS | ORCA-R2 | |
| Konfokal Lazer Taramalı Biyolojik Mikroskop | OLYMPUS | FV1000 | |
| Ters Floresan Mikroskobu | OLYMPUS | IX-83 | |
| Floresein izotiyosiyanat-dekstran | Sigma | FD70S |
Kaynaklar
- Abbott, A. Cell culture: Biology's new dimension. Nature. 424 (6951), 870-872 (2003).
- Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 8 (10),....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
