Bir roman vitro boncuk tahlil bu protokolü sunar daha uygun modelleri perisitlerden dahil ederek angiogenez çimlenme vivo içinde süreci. Bu değişiklik daha sadakatle heterotypic hücresel etkileşimlerin endotel hücreleri ve anjiogenezi için kritik olan duvar hücreler arasındaki özetlemek boncuk tahlil sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Perisitlerden tahlil filizlenen bir endotel hücre boncuk birleşmeyle
Bu makalede
Özet
Özet
Angiogenez önceden varolan damarlara yeni gemileri büyüme ve oküler ve kardiyovasküler hastalıklar ve embriyo ve geliştirme, yara iyileşmesi, tümör büyüme ve metastaz, gibi birçok biyolojik süreçleri önemli bir bileşenidir. Biyoloji angiogenez özetlemek etkili vitro modelleri uygun şekilde bu işlem çalışma ve sonuçta hedeflenebilir düzenleme mekanizmaları için yeni tedavi stratejileri belirlemek için gereklidir. Boncuk angiogenez tahlil daha önce birden fazla aşamalarında endotel çimlenme özetlemek için göstermiş olduğu tüp bebek. Ancak, bu testin bir sınırlama bir olmaması, endotel – duvar hücre etkileşimleri, endotel hücre moleküler ve fenotipik Yönetmeliği anahtarıdır vivoişlev. Burada verilen protokol duvar hücreleri birleşme boncuk angiogenez tahlil içine bir metodoloji sunar ve sıkı Derneği endotel hücreleri ve perisitlerden çimlenme içinde vitrosırasında gösterir. Protokol Ayrıca siRNA endotel hücrelerinde mekanik çalışmaları için kullanarak hedef genlerin etkili susturulması için bir metodoloji ayrıntıları. Özet olarak, bu iletişim kuralı daha uygun farklı hücre tipleri angiogenez çimlenme dahil modelleri ve terapötik değerlendirme ve roman keşfi için daha fizyolojik-alakalı bir platform sağlayan bir vitro tahlil sağlar angiogenez düzenleme mekanizmaları.
Giriş
Angiogenez uygun embriyo ve yara iyileşmesi için hayati önem taşımaktadır ve bu da kanser ilerleme1 ve koroner arter hastalığı da dahil olmak üzere çok sayıda hastalıklarda kilit rolü oynar. 2 , 3 daha iyi anlamak nasıl angiogenez normal gelişim sırasında oluşur ve nasıl patolojik bağlamlarda yeniden sahip roman, etkili tedavi gelişimi için önemlidir. Önemli aşamaları ve hücre tipleri angiogenez vivo içinde içinde yer alan özetlemek sadık vitro modelleri araştırmacılar daha iyi angiogenez sürüş moleküler mekanizmaları karakterize ve yeni keşifler yapmak için izin verme....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. gün:
1. geçici Transfection endotel hücrelerinin
- İstenirse, geçici transfection, insan göbek damar endotel hücreleri (gen düzenleyici oligonucleotides (örneğin mikro RNA'lar veya küçük müdahale RNA (siRNA)) ve uygun lipofectamine reaktif göre kullanarak HUVEC) gerçekleştirmek prosedürü yerine getirin.
Not: Bu protokol özel siRNA dizileri ve ticari transfection reaktifi (bkz: malzemeler tablo) ile ters transfections gerçekleştirme büyük başarı elde etti. Yazarlar diğer transfection protokolleri ve Kimyasalları bu tahlil ile test etmedim. Listelenen reaktifler kullanarak geriye doğru transfection için....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu iletişim kuralı iki hücre türleri in vitro sıkı bir Derneği için izin verir ve perisitlerden varlığı çimlenme (şekil 1A, B) oluşumunu tamamlar. Sağlayan protokol Ayrıca etkili susturmak (örneğin RNA müdahale yoluyla) bir genin bir hücre tipi faiz (özellikle de endotel hücreleri VEGFA) veya perisitlerden PDGFRβ gibi7,12 ilgi tahlil sırasında hangi tahlil içinde fil.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu iletişim kuralı için karmaşık aşamaları ve araştırmacı ayrıntılı mekanik soruşturma yapma genetik ve görüntüleme yaklaşımlar istihdam sağlayarak angiogenez çimlenme heterotypic hücresel etkileşimlerin karakterize bir yöntem sunuyor. Tahlil gerçekleştirirken, verimli endotel kaplama boncuk boncuk sırasında ajitasyon adımlar yer alır gereklidir. Zavallı endotel kaplama boncuklar bir golf topu gibi pütürlü yüzeyi jel implantasyon öncesinde ertesi sabah olması ve bunun yerine tamamen düzgün görünür gibi görünüyorsa belirg.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Biz yararlı tartışmalar için Drs. Victoria Bautch ve Joshua Boucher teşekkür ederim ve standart boncuk en iyi duruma getirme konusunda tavsiye tahlil koşulları ve filizlenen bir tahlil Protokolü boyama, çimlenme. S.H.A. kısmen bir hibe--dan ulusal genel tıbbi Bilimler Enstitüsü altında tarafından desteklenen 5T32 GM007092 ödül.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Steril Pipet uçları | VWR | ||
| Pipetleyiciler | Eppendorf | ||
| Komple EGM2 Medya Bullet Kiti | Lonza | CC-3162 | HUVEC Media |
| MEM Gibco | 11095114 | 10T1/2 Media | |
| DMEM | Gibco | 11965118 | NHLF Media |
| Doku kültürü sınıfı PBS | Gibco | 14190-144 | Magnezyum ve kalsiyum içermeyen |
| Accutase | Life Technologies | A1110501 | HUVEC |
| Tripsin | Life Technologies | 15050065 | kaldırmak için 10T 1/2 ve NHLF |
| Gümrük siRNA'ları | Sigma | ||
| Lipofektamin RNAiMax | Life Technologies | 13778150 | |
| HUVEC | Lonza | C2517A | |
| 10T'yi kaldırmak için 1/2 | ATCC | ||
| NHLF | ATCC | ||
| Cytodex 3 mikro taşıyıcı boncuklar | Sigma | C3275 | |
| Doku kültürü kaplı 6 ve 10 cm'lik plakalar | Sığır plazmasından Corning | ||
| Fibrinojen | Sigma | F8630 | |
| Trombin | Sigma | t9549 | |
| Aprotinin | Sigma | a3428 | |
| Falcon Yuvarlak Tabanlı Tüpler | Corning | ||
| Doku kültürü inkübatörü ve başlık | |||
| 24 kuyulu cam alt plakalar | MatTek | P24G1.513F | Cam tabanlı plakalara yalnızca filizler görüntülenecekse ihtiyaç duyulur. Değilse, doku kültürü plastiği de kabul edilebilir. |
| Steril Filtrasyon Cihazı |
Kaynaklar
- Hanahan, D., Folkman, J. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis. Cell. 86 (3), 353-364 (1996).
- Semenza, G. L. Angiogenesis in ischemic and neoplastic disorders. Annu Rev Med. 54, 17-28 (2003).
- Zhang, Z. G., Chopp, M.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
