Burada deneysel olarak karaciğer dokusu içinde vivoplazma koagülasyon değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bir domuz modelinde mikro lazer Doppler tarafından incelenir, koagülasyon derinlik histolojik olarak ölçülür, koagülasyon sitesini kızılötesi termometre ve termografik kamera ve kanal etkisi sızdırmazlık sıcaklıkta patlama basıncı ile belgelenen deneyler.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Plazma koagülasyon büyük hayvan modeli Vivo içinde karaciğer dokusu üzerinde değerlendirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Plazma koagülasyon elektrokoter biçimi olarak yıllardır karaciğer ameliyatta kanama daha sonraki bir aşamada önlemek için büyük hepatectomy sonra geniş karaciğer kesme yüzeyi mühürlemek için kullanılır. Plazma koagülasyon karaciğer dokusu üzerinde tam etkileri sadece kötü incelenir. Bizim domuz modelinde, koagülasyon etkileri yakın klinik uygulama incelenebilir. Bir kombine lazer Doppler akış ölçer ve spektrofotometre belgeleri mikro koagülasyon 8 mm doku derinlikte sırasında noninvazif,-mek şartıyla hemostaz öznel klinik izlenim ötesinde ölçülebilir vukuf değiştirir. Koagülasyon sitesi sıcaklığında bir kızılötesi termometre rahip ve post Koagülasyon ve termografik kamera ile koagülasyon sırasında değerlendirilir, gaz ışın sıcaklık ölçüm aygıtları üst eşik nedeniyle mümkün değildir. Koagülasyon derinliği mikroskobik hematoksilen eozin/bölümler kalibrasyon sonra lekeli bir nesne mikrometre ile ölçülür ve güç ayarı-koagülasyon derinlik ilişkisi hakkında tam bir bilgi verir. Bir plazma coagulator büyük kan damarları imzalamaya mümkün değil gibi sızdırmazlık etkisi safra kanalları üzerinde incelenir. Patlama basınç deneylerde yürütülen dışarı explanted organlarda kan basıncı dışarı kural etkileri ile ilgili.
Giriş
Argon plazma koagülasyon (APC) için üç yıl1,2' den daha fazla karın cerrahisinde bir yaygın olarak kullanılan alettir. Karaciğer mühürleyerek büyük hepatectomy daha sonra kanama3önlemek için yüzey kestikten sonra sekonder hemostaz başarı için standart bir tekniktir. Plazma koagülasyon iyonize gaz bir yay ile elektrik enerjisi teslim Radyofrekans elektrokoter özel bir şeklidir. Monopolar Elektrotermik hemostaz sağlayarak, bu aygıtlar teknik için doku4sopa elektrot önleme avantajına sahiptir. İyonize gaz ışın en düşük elektriksel direnç alanına otomatik olarak yönlendirilir ve direnç henüz kurumuş diğer bölgelerine kuruma nedeniyle doğduğunda uzakta etkinleşir. Bu bir üniforma sınırlı derinlik koagülasyon5,6üretir. Koagülasyon etkisi etkileyen faktörlerdir belgili tanımlık harekete geçirmek zaman, koagülasyon aygıt ve doku sonda mesafe güç ayarı. Helyum plazma koagülasyon7için kullanılabilir başka bir taşıyıcı gaz var. Histolojik ve fonksiyonel bulgular3,8,9, deneysel çalışmalar üzerine vitro araştırmalar10 odaklanmış iken yerine üzerine konsantre klinik sonuçlar son klinik çalışmalar veya izole organ periosteum11üzerinde deneyler.
Büyük bir hayvan modelinde standart insan domuzlar üzerinde kullanýlýyor klinik uygulama yakın plazma koagülasyon etkileri çalışmanın temel Protokolü sağlar: mikro lazer Doppler Flowmetre tarafından değerlendirildi noninvazif ve spektrofotometre, bu gösterge12,13standart bir klinik araçtır. Sıcaklık değişiklikleri koagülasyon sırasında bir kızılötesi termometre ve termografik kamera ile izlenir. Koagülasyon derinliği histolojik hematoksilen/eozin doku örnekleri hasat sonrası bölümleri lekeli ölçülür. Sekonder hemostaz için diğer araçlar ile karşılaştırma için patlama basınç deneyler yapılmaktadır. Yukarıda açıklanan teknikleri14aksine, Bunlar kan basıncı dışlamak için explanted organları yapılır ile ilgili etkileri. Yerel etkileri plazma koagülasyon açıklanan soruşturma ek olarak, standart kan testleri de domuz modelinde üstlenilen.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan çalışmaları yanı sıra ilkeleri laboratuvar hayvan bakım (Ulusal Sağlık Enstitüleri yayını derleyen 8, 2011) Alman mevzuatı tarafından yönetilen kuralları takip edildi. Toplum hayvan bakımı ofisinden (Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, Almanya) resmi izni verilir.
1. hayvanlar
- (25-30 kg ağırlıklı) dişi Alman landrace domuz açık kafeslerde yer alan kullanın.
- Grup (argon ve helyum) başına 5 hayvanlar kullanın.
- En az bir hafta önce deneyler için çevreye parkenizin hayvanlar izin. Hızlı hayvanlar su ücretsiz erişim ile ameliyat öncesi 24 h için.
2. anestezi
- Ketamin (15 mg/kg vücut ağırlığı [BW]), xylazine (10 mg/kg BW) ve atropin (0.1 mg/kg BW) bir kas içi enjeksiyon hayvanlarla 10 dk önce anestezi indüksiyon premedicate.
- Periferik venöz erişim bir 22'lik kanül yerleştirme bir kulak ven içine tarafından kurulmuştur.
- Genel anestezi propofol 2 mg/kg vücut ağırlığı damardan enjeksiyon tarafından ikna etmek.
- Hayvan sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve bir boyuna cilt kesi şah oluk subkutan doku künt hazırlanması ile yerleştirme damar 2 cm. uzunluğunda üzerinden performans sağlar. Kanül, sonra Seldinger tel yerleştirin.
- Kanül geri çekmek ve kılavuz tel üzerinden 14 Fr. kateter takın. Kılavuzu geri çek. Kateter uzantısı için bağlanmak ve bir kayış veya dikiş kateter bağlayacaktın.
- Dilini ve düz Laringoskop ekleyin. Laringoskop ucu gırtlak kapağını çekmek için kullanın. Ses tellerini tüpten yerleştirin. Manşet altında glottis yerleştirin ve şişirmek.
- 20-26 nefes/dak ve 10 ml/kg gelgit hacmi % 40 oksijen ile son gelgit kısmi karbon dioksit gerilimi 36 ve 42 mm Hg arasında tutmak için havalandırın.
- Anestezi isoflurane, 1-%1,5 konsantrasyon ve fentanil, 3-4 µg/kg/h bir konsantrasyon ile koruyun.
- Zil'ın laktat çözüm 4 mL/kg ilk bir oranda tedarik/s ve sonra laparotomi sürekli infüzyon hızı 8 mL/kg artırmak/s.
3. cerrahi ve plazma koagülasyon
- Hayvan standart bir cerrahi tablo bir sırtüstü pozisyonda yerleştirin.
- Standart cerrahi dezenfektan uygulayarak cilt dezenfekte (2-Propanol 45 g/100 g, 1-Propanol 10 g / 100g, Biphenyl-2-ol 0.2 g/100 g) için 3 kere cerrahi bir bez ile.
- Geniş orta hat laparatomi xiphoid işleminden bir neşter ile pubis için gerçekleştirin ve cerrahi ekartör yükleyin.
- Plazma koagülasyon cihazı yeniden açın, bağlı olarak kullanılan taşıyıcı gaz argon veya helyum gaz şişesi açmak. Gaz akışı için 3 L/dak Select koagülasyon aygıt çıkış gücü istediğiniz gibi ayarlayın.
Not: Her iki asil gazlar, Argon veya helyum, plazma koagülasyon için kullanılabilir. Koagülasyon etkileri karşılaştırılabilir. Başvuru7 Ayrıntılar için bkz:. - Plazma koagülasyon üzerinde karaciğer sol lob yukarıda açıklanan7olarak gerçekleştirin. Bir titanyum kalıp (kare diyafram 1 x 1 cm2) koagülasyon bölgesi standart hale getirmek için kullanın. Koyulaştırmak için 5 bir sonda mesafe 1 cm ile s. Farklı güç ayarları ile coagulations coagulations 5 mm (Şekil 1) arasında kısa bir mesafe ile yan yana gerçekleştirilebilir.
- Karaciğer hasat için tüm bağları bağlantıları karaciğere bölün. İzole ve portal ven ve ortak safra kanalını uzun bölümlerini bırakarak üstün duodenal kivrimi yukarıda hepatik Transpediküler bölün. Yukarıda ve aşağıda karaciğer caval ven bölmek ve organ almak.
- Karaciğer hasat sonrası, domuzlar 0,16 g/kg BW Fentobarbital damardan yönetimi tarafından euthanized.
- Patlama basınç deneyler için sol mediyal karaciğer lob yarısı ile keskin makas çıkarabileceğim. Plazma kesme koagüle yüzey (100W çıkış gücü) veya fibrin dolgu macunu (Şekil 2) ile kesme yüzeyi mühür.
4. mikro ölçüm
Not: Lazer Doppler spektroskopisi doku Doppler kayması eritrositler hareketi tarafından neden ölçme yoluyla kan akışını belirleyebilirsiniz. Lazer sinyal hareketli eritrositler numarası ile karşılıklı olarak ilişkilendirir. Lazer Doppler spektroskopisi klinik kullanımda (örneğin nakli tıp) ve oldu birden çok kez15doğrulanmış.
- Lazer Doppler akış ölçer ve spektrofotometre geçiş yapar. Düz bir sonda kullanın.
- Temel ölçü birimlerinin akışı ve hız için al. Kaydetmek veya değerleri not edin.
- Koagülasyon altında 3.5 açıklandığı gibi gerçekleştirin.
- Koagülasyon siteleri ve ölçü akışı ve hız düz sonda bir yer. Yine, kaydetmek veya değerleri not edin.
- Coagulator aygıt için tüm güç ayarlarını yineleyin.
5. sıcaklık ölçümü
- (Termografik kamera, dizüstü bilgisayar ve kızılötesi termometre) sistemde geçin ve ölçümler gerçekleştirmeden önce en az 1 h için çalışmasına izin.
- Odak ayarlamak ve koagülasyon sitede termografik kamera çerçeve görüntüleyin. Kızılötesi dizileri 20 büyük bir sıcaklık çözünürlük ile 1024 x 768 piksel çözünürlük kayma ile tespit mK. Göz önünde bu Koagülasyon ve çevreleyen doku — ısı transferi tarafından etkilenen — görünüm ortasında yer alır.
Not: Bu en iyi bir uzaysal çözünürlük için mümkün olduğunca çok sayıda piksel çerçeve içermelidir. - Termografik kamera 2 dk süre ile karaciğer yüzeyinde plazma coagulator ile kayıt koagülasyon işlemi.
- Görüntü sıralarıyla termografi analiz yazılımı analiz: bölgeleri ilgi tanımlamak.
Not: Yazılım zaman içinde karşılık gelen ortalama sıcaklığı sahası hesaplar.
6. koagülasyon derinlik ölçümü
- Sol mediyal karaciğer lob keskin makas ile hasat.
- Koagülasyon siteleri 1 cm kalınlık ile tüketim. İçin daha fazla alay 3 mm kalınlığında boyuna bölümler halinde kesin.
- Düzeltme doku örnekleri gecede tarafsız % 10 ile 4 ° C'de formalin arabelleğe alınmış. Parafin erime noktası üzerinden 2 ° C ısı ve dilimleri embed. İşlem gecede.
- Hematoksilen eozin boyama gerçekleştirmek.
- Deparaffinize ve doku daha sonra 2'de daldırma tarafından hidrat x ksilen, % 100 etanol (alkol), % 95 alkol, %70 alkol, deiyonize H2O 2 dk için.
- Meyer'ın hematoksilen çözüm 3 dk ile doku örneği leke.
- Şimdi 5 min için musluk suyundaki durulayın.
- Eozin çözüm 3 dk dokuyla leke.
- 2 x EtOH %95 ve o zaman ksilen 3 dk her durulayın. Standart Montaj orta ile bağlayın.
- Sistem (düşsel bilgisayar yazılımı mikroskop bağlı fotoğraf makinesinde) geçin. 40 X büyütme ile tüm bölümleri görüntüleyin.
- Bir nesne mikrometre görüntüsünü 40 X büyütme oranında al. Hedefleri penceresinde yapılan düğmesine basın. Manuel Kalibrasyon seçin. 100 µm. mm, iletişim kutusunda Enter 0,1 mikrometre görüntü üzerinde bir çizgi çizin ve OK tuşuna basın.
- Uzunluğu görünümünde seçin > analiz denetimleri > ek açıklamaları ve ölçümler pencere. Koagülasyon kenar boşluğuna fare ile karaciğer yüzeyden ölçmek. Verme veya sonuç not edin. Aynı slaytta yer alan başka bir yere ölçüm yineleyin.
Not: Koagülasyon derinliği kolayca normal hepatosit kordonlar ve nekroz küçülmüş sitoplazma, pyknotic çekirdeği ve kanama bölgeler bölge arasında keskin farkla normal karaciğer dokusundan farklı. - Dışarı iki ölçüm ortalamasını hesaplamak.
7. patlama basınç ölçüm
- Anahtarı (otomatik pompalar, basınç ölçer) üstünde belgili tanımlık sistem. Karaciğer örnekleri adım 3.7 göre hazırlayın.
Not: bir 3-yol-stopcock yolu ile bağlı iki paralel pompa kullanın. 1500 mm Hg maksimal baskısı ile tek bir pompa alınamıyor. - Portal ven, ortak hepatik arter ve safra kanalını haptic Transpediküler makasla izole etmek. Portal ven overholt forseps ile kelepçe ve monofil dikiş 4-0 ile ligate. Ortak hepatik arter overholt forseps klamp ve monofil dikiş 4-0 ile ligate.
- Ch-16 kateter ortak safra kanalını yerleştirin ve 2-0 ipek sütür ile ligate. Kateter otomatik pompalar bağlanmak, 3'lü stopcock olan basınç ölçer (Şekil 3) yükleyin.
- Serum perfüzyon şırıngaya doldur.
- Otomatik pompalar 99 mL/h teslimat oranı ile başlayın.
- Karaciğer kesme yüzeyi ve basınç ölçer patlama basınç kaçağı ve kayıt için izleyin.
Not: sızıntı daha kolay tanınması için patent mavi serum (2 mL patent mavi + 18 mL serum fizyolojik) eklenebilir. Patlama basınç basınç ölçer üzerinde basınç kaybı saat fark tarafından gözlemlemek kolaydır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Mikro: Hemostazın plazma koagülasyon takip için tanı cihazı kullanan mikro değişikliklerden göstermiş olabilir. Kılcal kan akışı (rasgele birimleri (AU) görüntülenir) azalır 142.7 ± 76,08 bir temel değerinden AU 57.78 ± 49.57 48,5 ± 7.26 25 W aygıt çıkış gücü AU AU 50 W ve 5,04 ± 1,31 AU 100 W (Şekil 4).
Sıcaklığı: Koagülasyon siteleri sıcaklığında termografik kamer...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kemirgen modelleri karaciğer ameliyatı için uzun süre16için kurulur. Yine de, büyük hayvan modeller belirli avantajlar sunuyor: mikrocerrahi hiçbir ekipman gibi insanlar için standart operatif ekipman uygulanabilir, cerrahi teknik klinik kullanım için karşılaştırılabilir ve standart klinik değerlendirme yöntemleri-ebilmek var olmak gerekli deneyler için transfer. Örneğin, standart klinik kan testleri için özel laboratuvar test yöntemleri (Şekil 10) gerek kalmadan yapı...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Yazarlar hiçbir katkıda bulunanlar var.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Ksilazin 20 mg / mL | Vetoquinol GmbH | Xylapan | |
| Ketamin 100 mg / mL | Ceva GmbH | Ceva Ketamin Enjeksiyonu | |
| Atropin 100 mg / 10 mL | Dr. Franz Kö hler Chemie GmbH | Atropinsulfat Kö hler 100mg Amp. | |
| Propofol | Fresenius Kabi GmbH | Propofol %1 MCT Fresenius | |
| Fentanyl | KG Rotexmedica GmbH | Fentanyl 0,5mg Rotexmedica | |
| Isoflurane | Abbot GmbH | Forene %100 (V/V) 250 mL | |
| Ringer laktat çözeltisi | Baxter Deutschland GmbH | sodyum 131 mmol/l, potasyum 5 mmol/l, kalsiyum 2 mmol/l, klorit 111 mmol/l, laktat 29 mmol/l | |
| Cerrahi dezenfektan | Schü lke & Mayr GmbH | Kodan Tinktur forte gefä rbt 1l 104804 | |
| Motorlu mikroskop | Nikon Instruments Europe | Eclipse TE2000-E | |
| Mikroskop kamerası | Nikon Instruments Europe | Digitalsight DS-Qi1Mc | |
| Görüntüleme yazılımı | Nikon Instruments Europe | NIS elemanları Vers. 4.40 | |
| Plazma pıhtılaştırıcı | Sö ring GmbH | CPC-1000 | |
| Argon gazı | Linde AG | Argon 4.8 | |
| Helyum gazı | Linde AG | Helyum 4.8 | |
| O2C | LEA Medizintechnik GmbH | O2C Sürüm 1212 | LF-2 veya LF-3 problu |
| Kızılötesi termometre | Voltcraft | VOLTCRAFT IR 260-8S | |
| Termografik kamera | InfraTec GmbH | VarioCAM HD kafa 820 | |
| Termografik analiz yazılımı | InfraTec GmbH | IRBIS 3 | |
| Mayer'in Hematoksilen çözeltisi | Merck 1.09249 | ||
| Eosin çözeltisi | VWR International GmbH | Merck 1.09844 | |
| Rollerpump Masterflex L/S kolay Yük | Cole-Parmer Enstrüman Şirketi | modeli 7518-10 | |
| Perfusorpump | B. Braun Melsungen AG | Perfusor secura FT | |
| Dijital basınç ölçer | Greisinger elektronik | GMH 3161 | |
| Perfusör şırıngası, 50 mL | B. Braun Melsungen AG | REF 8728810 F | |
| Perfüzör hattı, Tip IV Standart, PVC Luer kilidi | B. Braun Melsungen AG | REF 8722960 | |
| 3 musluk, Dicofix C35C | B. Braun Melsungen AG | REF 16494 C | |
| İpek 2-0. 3 metrik | Resorba | REF H5F | |
| Vicryl 4-0 Sutupak | Ethicon | V1224H | |
| NaCl %0,9 | B. Braun Melsungen AG |
Kaynaklar
- Link, W. J., Incropera, F. P., Glover, J. L. A plasma scalpel: comparison of tissue damage and wound healing with electrosurgical and steel scalpels. ArchSurg. 111, 392-397 (1976).
- Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury. EurJSurg. 167, 316-318 (2001).
- Frilling, A., et al. Effectiveness of a new carrier-bound fibrin sealant versus argon beamer as haemostatic agent during liver resection: a randomised prospective trial. Langenbecks ArchSurg. 390, 114-120 (2005).
- Raiser, J., Zenker, M. Argon plasma coagulation for open surgical and endoscopic applications: state of the art. J Phys Appl Phys. 39 (16), 3520-3523 (2006).
- Farin, G., Grund, K. E. Technology of argon plasma coagulation with particular regard to endoscopic applications. EndoscSurgAllied Technol. 2, 71-77 (1994).
- Grund, K. E. Argon plasma coagulation (APC): ballyhoo or breakthrough? Endoscopy. 29, 196-198 (1997).
- Glowka, T. R., Standop, J., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. Argon and helium plasma coagulation of porcine liver tissue. J Int Med Res. , (2017).
- Dowling, R. D., Ochoa, J., Yousem, S. A., Peitzman, A., Udekwu, A. O. Argon beam coagulation is superior to conventional techniques in repair of experimental splenic injury. JTrauma. 31, 717-720 (1991).
- Go, P. M., Goodman, G. R., Bruhn, E. W., Hunter, J. G. The argon beam coagulator provides rapid hemostasis of experimental hepatic and splenic hemorrhage in anticoagulated dogs. JTrauma. 31, 1294-1300 (1991).
- Brand, C. U., Blum, A., Schlegel, A., Farin, G., Garbe, C. Application of argon plasma coagulation in skin surgery. Dermatology. 197, 152-157 (1998).
- Carus, T., Rackebrandt, K. Collateral tissue damage by several types of coagulation (monopolar, bipolar, cold plasma and ultrasonic) in a minimally invasive, perfused liver model. ISRNSurg. , 518924(2011).
- Bludau, M., Vallbohmer, D., Gutschow, C., Holscher, A. H., Schroder, W. Quantitative measurement of gastric mucosal microcirculation using a combined laser Doppler flowmeter and spectrophotometer. DisEsophagus. , (2008).
- Beckert, S., Witte, M. B., Konigsrainer, A., Coerper, S. The impact of the Micro-Lightguide O2C for the quantification of tissue ischemia in diabetic foot ulcers. Diabetes Care. 27, 2863-2867 (2004).
- Erdogan, D., de Graaf, W., van Gulik, T. M. Adhesive strength of fibrinogen-coated collagen patch or liquid fibrin sealant in an experimental liver resection model in pigs. Eur Surg Res Eur Chir Forsch Rech Chir Eur. 41 (3), 298-302 (2008).
- Knobloch, K., et al. Microcirculation of the sternum following harvesting of the left internal mammary artery. ThoracCardiovascSurg. 51, 255-259 (2003).
- Kanzler, S., et al. Recommendation for severity assessment following liver resection and liver transplantation in rats: Part I. Lab Anim. 50 (6), 459-467 (2016).
- Pehböck, D., Dietrich, H., Klima, G., Paal, P., Lindner, K. H., Wenzel, V. Anesthesia in swine optimizing a laboratory model to optimize translational research. Anaesthesist. 64 (1), 65-70 (2015).
- Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver. Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).
- Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study. Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).
- Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size. AnnSurg. 227, 559-565 (1998).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
