Bu yazıda, Xenopus laevis Kurbağa yavrularını retinotectal devre eğitim için tüm cep telefonu yama kelepçe kaydetmek için kullanılan üç beyin hazırlıkları görüşmek. Kendi belirli avantajları ile her hazırlık Xenopus iribaş deneysel tractability nöral devre işlevi incelemek için bir model olarak katkıda bulunmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Ürünleri ve tüm hücre yama kelepçe kayıt Xenopus laevis Tectal nöronlar için iletişim kuralları
Bu makalede
Özet
Özet
Hangi formu synapses doğrudan üzerine nöronlarda optik tectum göz retina ganglion hücrelerinin (RGCs) oluşan Xenopus iribaş retinotectal devre nasıl sinir devreleri çalışma popüler modelidir kendini topla. Bütün taşıma yeteneği yama kelepçe kayıtları tectal nöronlar ve RGC uyarılmış yanıt, ya da içinde vivo hücre veya tüm beyin hazırlık kullanarak büyük bir vücut, normal yatan mekanizmaları yüksek çözünürlüklü verilerin üretti ve anormal, devre oluşumu ve işlev. Burada nasıl vivo içinde hazırlık, özgün tüm beyin hazırlık gerçekleştirileceğini açıklar ve daha yakın zamanda yatay beyin dilim hazırlık tectal neurons tüm cep telefonu yama kelepçe kayıtları elde etmek için geliştirilmiştir. Her hazırlık benzersiz deneysel avantajları vardır. Vivo hazırlık tectal nöronlar doğrudan yanıt göz yansıtılan görsel uyaranlara karşı kayıt sağlayan. Tüm beyin hazırlık için son derece kontrollü bir şekilde var olmak harekete geçirmek RGC akson, ve yatay beyin dilim hazırlık kaydından tectum tüm katmanları arasında sağlar.
Giriş
Retinotectal devre amfibi görsel sisteminin önemli bileşenidir. Hangi onların aksonlar optik tectum nerede postsinaptik tectal nöronlar ile sinaptik bağlantıları oluşturmak için proje RGCs gözünde, oluşur. Xenopus iribaş retinotectal devre nöral devre oluşumu ve işlev eğitim için popüler bir gelişim modelidir. Bu kurbağa'nın retinotectal devrenin bir güçlü deneysel model1,2,3render birçok özniteliği vardır. Bir büyük öznitelik ve odağı bu makalenin tüm cep telefonu yama kelepçe kayıtları tectal nöronlar, içinde VIVO veya tüm beyin hazırlık kullanarak yürütme....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC), Wyoming Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. Elektrofizyolojik kayıtlar da dahil olmak üzere tüm yordamları oda sıcaklığında yaklaşık 23 ° c yapılmaktadır Tüm yöntem tanımlamak burada tectal Kurbağa yavrularını gelişimsel sahne 42 ve (Neiuwkoop ve Faber15göre sahnelenen) 49 arasında neurons kaydetmek için optimize edilmiştir.
1. Vivo içinde hazırlık
- İribaş anestezi.
- İribaş % 0,01 ile Steinberg'ın solüsyon içeren küçük bir Petri kabına yerleştirin MS-222 yaklaşık 5 min için.
Not: Ortak bir balık ve amfibi a....
- İribaş % 0,01 ile Steinberg'ın solüsyon içeren küçük bir Petri kabına yerleştirin MS-222 yaklaşık 5 min için.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Tüm alan flaş ışık ışık uyarılmış yanıt-e doğru kaydetmek için elde edilen yanıt bireysel tectal neurons (şekil 4A) kaydedilir iken retina tahmin edilmektedir. Bu belirli iletişim kuralı her iki nöron (yanıt "On") açma ve 15 off dönüm ışığa tepki ölçmek için tasarlanmıştır daha sonra "Off yanıt." ölçmek için s Tectal nöronlar genellikle sağlam ve yanıt kapalı sergi (nöron gösterilen burada içinde kaydedilen gerilim kelepçe moduyla klempe 60mV.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışmada açıklanan tüm yöntemleri tectal Kurbağa yavrularını gelişimsel sahne 42 ve (Neiuwkoop ve Faber15göre sahnelenen) 49 arasında neurons kaydetmek için optimize edilmiştir. Sahne 42 ile Kurbağa yavrularını yeterince büyük ve yeterince gelişmiş böylece böcek pimleri beyin vivo kayıtları için ve tüm beyin diseksiyon taşımak için her iki tarafında yerleştirilebilir. Daha önceki aşamalarında, Kurbağa yavrularını aslında iki boyutlu olduğunda (Yani, düz), burada açıklanan yak.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
SBC COBRE 1P20GM121310-01 NIH grant tarafından desteklenen.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Stemi Stereo 508 | Zeiss | 495009-0006-000 | Diseksiyon mikroskobu |
| MS-222 "Tricane" | Finquel | ARF5G | Amfibi genel anestezik |
| Sodyum Klorür (NaCl) | Fisher Scientific | S271-3 | Stienberg çözeltisini ve harici çözeltiyi hazırlamak için kullanılır |
| Potasyum Klorür (KCl) | Fisher Scientific | P217-500 | Stienberg çözeltisini ve harici çözeltiyi hazırlamak için kullanılır |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375-1KG | Stienberg'in çözeltisini ve harici çözeltisini hazırlamak için kullanılır |
| Kalsiyum nitrat tetrahidrat (Ca(NO3) ve boğa; 4H2O) | Sigma-Aldrich | 237124-500G | Stienberg'in çözeltisini hazırlamak için kullanılır |
| Magnezyum Sülfat (MgSO4) | Mallinckrodt Chemicals | 6066-04 | Steinberg çözeltisini hazırlamak için kullanılır |
| Kalsiyum Klorür (CaCl2< / sub>) | Sigma-Aldrich | C5080-500G | Harici kayıt çözeltisi hazırlamak için kullanılır |
| Magnezyum Klorür (MgCl2< / sub>) | JT Baker | 2444-01 | Harici kayıt çözümü hazırlamak için kullanılır |
| D-glikoz Susuz | Mallinckrodt Kimyasalları | 6066-04 | Harici kayıt çözeltisi hazırlamak için kullanılır |
| Tubokurarin hidroklorür pentahidrat | Sigma | T2379 | Nikotinik asetilkolin reseptör antagonisti |
| Böcek Pimleri | Güzel Bilim Araçları | 26002-10 | 0.1mm çaplı paslanmaz çelik pimler |
| Sylgard 184 Silikon Elastomer Kiti | Dow Corning | 761028 | Önceden tartılmış monomer ve kürleme maddesi kiti |
| Steril Polistiren Petri Kabı - 60x15mm | Fisher Scientific | AS4052 | Küçük petri kapları |
| PrecisionGlide İğne 25Gx5 / 8 (.0.5mm X 16mm) | BD | 305122 | Şırınga iğneleri |
| 1mL Kayma Ucu Tüberkülin Şırıngası | BD | 309659 | Tek kullanımlık, steril şırıngalar |
| Borosilikat pipet camı | Sutter Aleti | BF150-86-10HP | Pipet çekme makinesi kullanılarak istenen özelliklere çekildi |
| Alevli/Kahverengi Mikropipet Çektirme | Sutter Aletleri | P-97 | Elektrofizyolojik kayıt için mikropipetler üretir |
| Kimwipes Kimtech mendil | Kimberly-Clark | 34120 | Hassas Görev Tüy bırakmayan silecekler |
| Axon Instruments MultiClamp 700B Headstage CV-7B | Moleküler Cihazlar | 1-CV-7B | Akım kelepçesi ve gerilim kelepçesi headstage |
| MP-285 Masaüstü Kontrolörlü Motorlu Manipülatör | Sutter Aleti | MP-285/T | Elektrofizyoloji teçhizatında headstage kontrolü |
| Fiber Bağlantılı LED (Yeşil) | Thorlabs | M530F2 | Yeşil LED ile eşleştirilmiş fiber optik kablo |
| Küme Bipolar Elektrot (25 & mikro; m çapı) | FHC | 30207 | Bipolar uyarıcı elektrot |
| ISO-Flex Stimülatör | AMPI (İsrail) | Üreticiyle iletişime geçin | Esnek uyaran izolatörü |
| Axon Instruments 700B Multipatch Amplifikatör | Moleküler Cihazlar | 2500-0157 | Voltaj ve akım kelepçesi kaydı için amplifikatör |
| Digidata 1322A sayısallaştırıcı | Moleküler Cihazlar | 2500-135 | Elektrofizyoloji kaydı için veri toplama sistemi |
| Axio Examiner.A1 | Zeiss | 491404-0001-000 | Elektrofizyoloji için mikroskop |
| Micro-g Lab Masası | TMC | 63-533 | Elektrofizyoloji mikroskobu için hava masası |
| Inspiron 620 Windows 7 64-bit Dell D06D001 Bilgisayarlı Kişisel Masaüstü | Bilgisayar Elektrofizyoloji yazılımı | ||
| c2400 CCD kamera | Hamamatsu | 70826-5 | Elektrofizyolojik görüntüleme için şarj bağlantılı cihaz kamerası |
| Saat 7 O'Clock Süper Platin Paslanmaz Tıraş Bıçağı | Gillette | CMM01049 | Platin kaplı paslanmaz tıraş bıçakları |
| Transfer Pipetleri | Fisher Scientific | 13-711-7M | Tek Kullanımlık Polietilen transfer pipetleri |
Kaynaklar
- Pratt, K. G., Khakhalin, A. S. Modeling human neurodevelopmental disorders in the Xenopus tadpole: from mechanisms to therapeutic targets. Dis. Model Mech. 6, 1057-1065 (2013).
- Pratt, K. G. Finding Order in Human Neurological Disorder Using a Tadpole. Curr. Pathobio. Rep. 3 (2), 129-136 (2015).
- Liu....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
