Burada, antikanser coumarins 3D kültür ve zebra balığı kullanarak preklinik tarama mevcut.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Preklinik antikanser Coumarin OT48 pulcuklarının, koloni oluşumu deneyleri ve zebra balığı Xenografts Bioactivity değerlendirilmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Roman terapötik ajanlar içinde in vitro ve in vivo önceden klinik tarama çoğu kanser ilaç keşif önemli bir araçtır. Her ne kadar insan kanser hücre hatları 2D (boyutlu) monolayer hücre kültürlerinde terapötik bileşiklerin yanıt, 3D kültür sistemleri daha fizyolojik ilgili modelleri ilaçların etkinliğini anlamak için geliştirilmiştir. Son yıllarda, daha doğrusu tümör microenvironment taklit eden 3D kültür sistemlerinde yeni moleküller potens doğrulamak için önceden klinik araştırma bir paradigma kayması gözlendi. Bu sistemler daha fizyolojik ilgili bir şekilde hastalık durumu karakterize ve daha iyi mekanik kavrama ve belirli bir molekül farmakolojik potens anlayış kazanmak için yardım. Ayrıca, in vivo kanser modelleri iyileştirilmesinde mevcut trendi ile zebra balığı vivo içinde tümör oluşumu değerlendirmek ve terapötik ajanlar etkisini incelemek için önemli bir omurgalı model olarak ortaya çıkmıştır. Burada, biz Hidroksikumarin OT48 tedavi edici etkinliği tek başına veya akciğer kanseri hücre kültürünü A549 BH3 mimetics ile birlikte koloni oluşumu deneyleri (CFA), küresel oluşumu tahlil (SFA) dahil olmak üzere üç farklı 3D kültür sistemleri kullanarak araştırdık ve vivo zebra balığı xenografts.
Giriş
Kanser tarafından hücresel mutasyonlar neden olur ve sonuç olarak biyokimyasal sinyal yolları kontrolsüz hücre bölünmesi ve hücre ölümü direnç tetikleyen bozdu. Tümörleri sindirim, sinir, dolaşım sistemi ve daha sonra komşu dokulara1fizyolojik fonksiyonları müdahale. Kapsamlı bir araştırma, kanser dünya2' deki en yaygın hayatı tehdit eden hastalık imlere rağmen. Hassas tıp gelecekteki kanser tedavi temel olarak kabul edilmiştir. Yeni moleküler varlıklar klinik sonuç geliştirmek için mevcut uyuşturucu ile birlikte düzenli olarak test edilir.
Ancak, yeni verimli hedefli tedaviler gelişimi ile il....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. koloni oluşumu deneyleri
- Kültür A549 hücreleri 20.000 hücre/cm2 RPMI1640 15 ml bir konsantrasyon, hücre kültürü 10 ile desteklenmiş orta % FBS (Fetal sığır Serum) ve CO2 kuluçka CO237 ° C ve % 5, 75 cm2 şişeye %1 antibiyotik.
- Deneme günü, bir hemasitometre kullanarak hücre konsantrasyonu belirlemek. Santrifüjü 400 x g 1.5 mL microcentrifuge tüp içinde 7 min için de tarafından 50.000 hücreleri toplamak ve 1 x steril PBS (fosfat tamponlu tuz) 1,5 mL tüpler 100 µL hücrelerde yeniden askıya alma.
- 15 mL tüpler bir multipipette ile yarı katı methylcellulose tabanlı Orta (MCBM) 1.1 mL dağıt....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 2' de, akciğer kanseri hücre satırı A549 MCBM içinde form kolonilere OT48 ile tedavi sonra tek başına veya birlikte belirtilen konsantrasyonlarda BH3 mimetic A1210477 ile seribaşı. Sonuçlar kasanın numarası, boyut ve kolonilerin toplam yüzey alanı kuluçka 10 gün sonra azaltılacağını olduğunu gösterdi.
Şekil 3' te A549 hücreleri ile OT48 tek başına veya birlikte BH.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Koloni oluşumu MCBM ile elde edilen oranda hücre türüne bağlıdır. Genellikle, yapışık olmayan hücreler için koloni sayısı çok daha yüksek yapisan hücrelere karşılaştırılır. A549 hücreleri 10 gün sonra 30-40 kolonileri oluşturduğu görülmektedir. Daha önce farklı lösemi hücreleri için kolonileri sayısının 200-2509arasında olduğunu bildirdin. Sonuçlarımız OT48 yalnız kolonileri yalnız sayısı önemli bir azalma getirmedi gösterdi. Ancak, BH3 ile birlikte mimetic A1210477 koloni şekillendirme yeteneği A.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
SNU Araştırma Kore MEST tümör Microenvironment küresel çekirdek Araştırma Merkezi (GCRC) Bursu, [grant numarası 2011-0030001]; tarafından Ulusal Araştırma Vakfı (NMG) tarafından desteklenmektedir Seul Ulusal Üniversitesi Araştırma Bursu ve beyin Kore (BK21) tarafından program artı.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Koloni oluşumu deneyleri için gerekli malzemeler< / güçlü> | |||
| A549 | ATCC | CCL-185 | 37 C & derece; |
| RPMI 1640 | Londra | 30096 | 4 C & derece; |
| FBS | Biyobatı S1520-500-20 | C & deg; | |
| Penisilin-Streptomisin | Lonza | 17-602E-20 | C & deg; |
| Hücre kültürü şişesi T75 | SPL | 70075 | RT |
| PBS çözeltisi | Hyclone | SH30256.02 | RT |
| 1.5ml tüp | Extragene | Tüpü-170-C | RT |
| 15 ml tüp | Hyundai Micro | H20015 | RT |
| 12 kuyulu plaka | SPL | 30012 | RT |
| MethoCult | StemCell teknolojileri | 4230-20 | C & deg; |
| Tiyazolil Mavi Tetrazolyum Bromür (MTT tozu) | Sigma | M5622 | 4 C & deg; |
| LAS4000 | GE Sağlık Teknolojileri | RT | |
| güçlü>Küresel oluşum deneyi için gerekli malzemeler | |||
| A549 | ATCC | CCL-185 | 37 C° |
| RPMI 1640 | Londra | 30096 | 4 C & derece; |
| FBS | Biyobatı S1520-500-20 | C & deg; | |
| Penisilin-streptomisin | Lonza | 17-602E-20 | C & deg; |
| Hücre kültürü şişesi T75 | SPL | 70075 | RT |
| PBS çözeltisi | Hyclone | SH30256.02 | RT |
| Tripsin-EDTA | Gibco | 25-300-054 | 4 C & deg; |
| Corning costar ultra düşük ataşman 96 kuyulu plaka | Corning | 3474 | RT |
| Mikroskopi | Nikon | Eclipse TS100 | RT |
| Zebra balığı ksenogreftleri için gerekli malzemelerA549 | |||
| ATCC | CCL-185 | 37 C° | |
| RPMI 1640 | Londra | 30096 | 4 C & derece; |
| FBS | Biyobatı S1520-500-20 | C & deg; | |
| Penisilin-streptomisin | Lonza | 17-602E-20 | C & deg; |
| Hücre kültürü şişesi T25 | SPL | 70025 | RT |
| Hücre kültürü şişesi T75 | SPL | 70075 | RT |
| Hücre kültürü şişesi T175 | SPL | 71175 | RT |
| 1.5ml tüp | Ekstragen | Tüpü-170-C | RT |
| 24 kuyulu plaka | SPL | 30024 | RT |
| Petridish | SPL | 10100 | RT |
| PBS çözeltisi | Hidroklon | SH30256.02 | RT |
| Tripsin-EDTA | Gibco | 25-300-054 | 4 C & deg; |
| Sodyum Klorür | Sigma-Aldrich | 71382 | RT |
| Potasyum klorür (KCL) | Sigma-Aldrich | P9541 | RT |
| Magnezyum sülfat heptahidrat (MgSO4.7H2O) | Sigma-Aldrich | M2773 | RT |
| Kalsiyum nitrat tetrahidrat (Ca (NO3) 2) | Sigma-Aldrich | C1396 | RT |
| HEPES çözeltisi | Sigma-Aldrich | H0887 | RT |
| Etil 3-aminobenzoat metansülfonat (Trikain) | Sigma-Aldrich | E10521 | RT |
| Fenol Kırmızısı çözeltisi | Sigma-Aldrich | P0290 | RT |
| Metilselüloz | Sigma-Aldrich | M0512 | RT |
| 1-fenil-2-tiyoüre (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | RT |
| CM-Dil boyası | Invitrogen | C7001-20 | C & deg; |
| Cam kılcal Dünya | Hassas Aletler | TW 100F-4 | RT |
| Mikropipet çektirme | Deklanşör aleti, ABD | P-97 | RT |
| Mikro enjektör | Dünya Hassas Aletler | PV820 | RT |
| Şırınga | KOVAX | 1ml | RT |
| Mikro yükleyici | Eppendorf | 5242956003 | RT |
| Cam kaydırak | Marienfeld | HSU-1000612 | |
| RT Floresan mikroskobu | Leica | DE/DM 5000B | RT |
Kaynaklar
- Giancotti, F. G. Deregulation of cell signaling in cancer. FEBS Letters. 588 (16), 2558-2570 (2014).
- Knowlton, S., Onal, S., Yu, C. H., Zhao, J. J., Tasoglu, S. Bioprinting for cancer research. Trends in Biotechnology. 33 (9), 504-513 (2015).
- Santo, V. E., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
