Burada iletişim kuralları için toplama ve microinjecting precellular Batı Mısır rootworm embriyo germline dönüştürme ve CRISPR/Cas9-genom düzenleme gibi fonksiyonel genomik deneyleri yapmak amacıyla mevcut.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Western Mısır Rootworm, Diabrotica virgifera virgifera, embriyo mikroenjeksiyon Germline dönüştürme veya CRISPR/Cas9 genom düzenleme
Bu makalede
Özet
Özet
Batı Mısır rootworm (WCR) Mısır önemli bir böcek ve haşere Yönetim Stratejileri için hızla adapte kabiliyetini için bilinen. RNA müdahale (RNAi) WCR biyoloji okuyan için güçlü bir araç olduğunu kanıtlamıştır rağmen kendi sınırlamaları vardır. Özellikle, RNAi kendisi geçici (Yani tam yol ilişkili fenotip uzun vadeli Mendel miras), ve hedef gen DNA dizisi bilerek gerektirir. Fenotip ilgi kötü korunmuş veya bile roman genler tarafından kontrol edilir eğer yararlı hedefler belirlenmesi zor olabilir çünkü ikinci imkansız olmasa sınırlama. Bu nedenle, dizi WCR'ın genomik araç kutusundaki araç istikrarlı mutant suşları oluşturmak ve WCR genom dizisi bağımsız çalışmaları etkinleştirmek için kullanılabilir yöntemleri geliştirme tarafından genişletilip. Burada, biz toplamak ve nükleik asitler ile precellular WCR embriyo microinject için kullanılan yöntemleri ayrıntılı. Burada açıklanan protokoller transgenik WCR yaratılması hedefleniyor iken, CRISPR/Cas9-genom düzenleme de embriyo enjekte çözüm bileşimi olmanın tek farkı ile aynı protokolleri kullanılarak gerçekleştirilebilir.
Giriş
Batı Mısır rootworm (WCR), Diabrotica virgifera virgifera, önemli bir böcekten Mısır1var. İlginçtir, denetim üstesinden gelmek için WCR görünür onlar sadece fizyolojik olarak aynı zamanda davranışsal2,3,4,5, uyum bu yana en Tarım zararlıları daha hızlı ölçer 6. son on yıl içinde RNA müdahale (RNAi), güçlü bir işlevsel genomik araç, WCR7,8için potansiyel bir kontrol yöntemi olarak incelenmiş ve gen fonksiyon9eğitim için bir araç olarak da kullanılmıştır. RNAi sık mikroenjeksiyon çift iplikçikli RNA (dsRNA) diğer türler tarafından gerçekleştirilir, ancak, RNAi enjeksiyon tabanlı WCR içinde nadir iken. Aslında, RNAi yolu ile mikroenjeksiyon dsRNA in WCR9içine sadece bir kaç rapor ediliyor. WCR bile annem11' e dsRNA besleyerek embriyonik etkileri çalışma izin dsRNA7,10, için gen devirme yolu ile yenmesi yüksek düzeyde elde edebilirsiniz nedenidir. Bu yöntem WCR fonksiyonel genomik analiz yoluyla RNAi için mükemmel bir konu yapar iken, bu türlerin embriyonik mikroenjeksiyon yöntemleri geliştirmedek ilerlemeyi yavaşladı.
RNAi güç rağmen bazı dezavantajları vardır. Örneğin, tüm genler eşit RNAi için yanıt. Bu değişkenliği daha zor bir işlevsel genomik tahlil sonuçlarını yorumlama yapabilirsiniz. Ayrıca, RNAi geçici ve kalıtsal mutasyonlar oluşturmaz. Öte yandan, germline dönüştürme, başka bir işlevsel genomik aracı, kalıtsal mutasyonlar ile işaretli olan öğesinin içine ekleme genom12,13oluşturabilirsiniz. Bu uzun vadeli genetik çalışmalarda kullanılmak mutant suşları oluşturmak için mükemmel bir araç germline dönüştürme yapar. Dönüştürme bir mutant genom14' e gen işlevsel bir kopyasını sunarak bir mutasyon kurtarmak için de kullanılabilir. Ayrıca, germline dönüştürme moleküler genetik teknikleri çok çeşitli taşıdır. Nakavt ve/veya gen işlevi tahlisiye yanı sıra, germline dönüştürme artırıcı bindirme15, gen bindirme16, Ektopik ifade Gal4 tabanlı17ve genom-wide mutagenesis18için kullanılabilir.
Daha yakın zamanlarda, sofistike genom düzenleme sağlayan araçlar geliştirilmiştir. Bu araçlar transkripsiyon Activator-Like efektör enzimler (TALEN) CRISPR/Cas9-nükleaz sistemi19,20içerir. Bu yeni araçların çift iplikçikli DNA ara hemen hemen her yerde hemen hemen tüm genom içinde ikna yeteneği araştırmacılar sundukları avantajdır. Bir kez bağlı, bu tatili katalizler hangi bir mühendislik yapı huzurunda homoloji yönetmen onarım veya silme veya ekleme hedeflenen gen tanıtmak katılmadan, homolog olmayan iki ucundan aracılığıyla onarılabilir yerine tüm genler veya genetik bölgeleri21,22. Ancak, bu yöntemlerin çok genç embriyo içine DNA, RNA ve/veya protein mikroenjeksiyon gerektirir.
Önemlisi, RNAi, nükleik asitler ve protein germline için kullanılan için kullanılan dsRNAs aksine dönüştürme ve genom düzenleme kolayca hücre zarlarında geçemez. Bu nedenle, mikroenjeksiyon plazmid DNA'lar, mRNA'ların ve/veya proteinler (böcek embriyo cellularizes önceYani ) sinsisyal blastoderm aşamasında yer almalıdır. Bu kritik bir faktör enjeksiyonları zamanlamasını yapar. Örneğin, Drosophila melanogasteriçinde embriyo12yumurta sonra iki saat içinde enjekte edilir gerekir. Bu nedenle, başarılı embriyonik mikroenjeksiyon Protokolü gelişimi için WCR yanı sıra precellular embriyo yeterli miktarda toplamak için en iyi yöntem dişi yumurta döşenmesi için en iyi koşulları dikkate almanız gerekir.
Toplamak ve precellular WCR embriyo microinjecting yöntemleri geliştirmek, WCR Biyoloji üzerinde ayı için moleküler genetik araçları geniş bir yelpazede getirmek için bir çaba gerektirir. Burada WCR araştırmada dönüşüm tabanlı teknikleri kullanmak başkalarına yardım etmek için ayrıntılı talimatlar, ipuçları ve püf noktaları, birlikte sağlamak. İşlevsel genomik çalışmalarda kullanılmak için WCR transgenik teknolojileri uzanan ek olarak bu teknikler de bunda ekonomik açıdan önemli test edilecek gen sürücü23,24 gibi güçlü yeni haşere kontrol stratejileri sağlar haşere.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. koloni düzeyi WCR yetişkin yetiştirme
- WCR yetişkin yeterli miktarda elde etmek (500-1000) üzerinden güvenilir bir şirket veya Araştırma Laboratuvarı ( Malzemeler tablo bir örnek için bkz) ve 30 cm3 kafese koyun.
Not: Bir sigara diapausing yük kullanımı önerilir. - WCR yapay diyet üreticisinin protokolüne hazırlamak ve 1 cm kalınlığında kat 38 oz konteyner içine dökün ( Tablo malzemelerigörmek). Karıştırma sonra kullanılmayan diyet 4 ° C'de 2 aya kadar saklayın.
- Yetişkin diyet (10-15 g) ile Petri kabına (100 x 15 mm) 30 cm3 kafesin içine koymak. Yemek düşük veya kuru olduğunda daha fazla diyet ekleyin.
- Bir şişesi (300 mL) su, bir pamuk rulo (6 "x 3/8"), hizmet etmek için tutmak için kullanılan bir pamuk topağı ile kaplı ile bir su kaynağı olarak koymak. Bu azaldığında değişmek belgili tanımlık su.
- % 60 nem ile 26 ° C'de WCR korumak ve bir 14:10 ışık döngüsü kuluçka yetiştirme bir böcek.
2. embriyo toplama ve hizalama
- Bir yumurta toplama Odası %1 agar suda bir steril 100 x 15 mm2 ' Petri kabına kullanarak olun. Agar katılaşır sonra 4 ° C'de depolayın.
- Yeni koydu yumurta toplamak için filtre kağıdı, tülbent (her kesim boyutu için) 4 kat (şekil 1A) agar yüzeyinde ardından tek bir katman yer.
Not: Tülbent, yıkanmış çamaşır suyu ve autoclaved, kaldıktan sonra yeniden kullanılabilir ancak ilk kullanım için bunun gerekli değildir. Filtre kağıdı yeniden ve steril gerekmez. - Yumurta toplama plaka (son iş günü) olabildiğince kadar geç saatte WCR kafesin içine yerleştirin ve bir folyo çadır ile kaplayın. Gece bırakın.
Not: ışıklar saat 12 (14 h) gecikmeler yumurta için döşeme 10 saatleri arasında açık olması, böylece mikroenjeksiyon için genç yumurta toplama toplama odası gece geç saatlerde kafesin içine yerleştirmek laboratuvar personeli gerek kalmadan kolaylaştırmak. - Yumurta toplama Odası 8 veya 9'da kaldırmak
- Forseps tülbent 1 kat kadar bir zaman ve yerde bir ölçek (500 mL) su almak için kullanın. Yıkayın tülbent kapalı yumurta hafifçe karıştırarak (şekil 1B ve 1 C).
- Bir ampul pipet yumurta başka bir kabı (500 mL) su için aktarmak için kullanın. 2-3 x yumurta temizlemek için yineleyin.
- Ampul pipet su etkilenmişimdir miktarını en aza indirerek yumurta filtre kağıdı (şekil 1 d) üzerine aktarmak için kullanın.
- Siyah filtre kağıdı bir cam slayt ve kaset olarak geniş şeritler halinde kesin sıkıca emin olmak için slayda kağıt düz (şekil 2A) bırakır.
Not: Siyah filtre kağıdı yansıyan ışık miktarını azaltarak mikroskop altında görünürlüğünü artırmak yardımcı olur. - Toksik olmayan yapıştırıcı uygulamak ( Malzemeler tablo bir örnek için bkz) için filtre kağıdı ince çizgileri (şekil 2B) içinde. Tutkal satırları içinde tutkal boyalı yumurta almamak için bir yumurta çapı daha ince tut.
- İnce fırça yavaşça WCR Yumurtaları teker teker tutkal hattına onların filtre kağıdı taşımak için kullanın. Kurumadan uyuşmuşhalde yumurtlamak deneyin ve her yumurta arasında en az bir yumurta'nın uzak dur.
- Enjeksiyon verimliliği maksimize etmek yanında duvar ilanı yumurta birkaç satırlık bir filtre kağıdı slayt (şekil 3).
- Sonra tüm yumurta üzerinde filtre kağıdı koyulur, tüm tutkal mikroenjeksiyon önce kurur kadar bekleyin.
Not: en eski embriyo fazla 19 h eski olması germline dönüştürme ve düzenleme CRISPR/Cas9-aracılı genom, tüm embriyoların öğle vakti (12 üzerinde) enjekte et. Ancak, RNAi için olduğunu hiçbir zaman sınırlama WCR içinde dsRNA hücreler arasında hareket edebilir çünkü. Aslında, RNAi için yaşlanma embriyolar daha iyi sağkalım oranları neden olabilir.
3. hazırlık plazmid DNA'lar ve enjeksiyon iğneler
- Endotoksin-Alerjik bir ticari kullanarak yüksek kaliteli supercoiled plazmid DNA hazırlamak ( Malzemeler tablo bir örnek için bkz) kit.
- Enjeksiyon çözüm hazırlamak için her plazmid konsantrasyonu kontrol ve yardımcı plazmid (250 ng/µL son konsantrasyonu), donör plazmid (750 ng/µL son konsantrasyonu) ve fenol red arabellek (% 20 son konsantrasyonu) birleştirir. Girdap kısaca çözüm ve iğne yapışmasına neden parçacıklar çökelti maksimum hızda 3 dk santrifüj.
- Borosilikat cam iğneler (doz 1 mm, kimlik 0,58 mm, 10 cm uzunluk) çekin bir yanan/kahverengi türü micropipette çektirmenin kullanarak. Güvenli depolama için çift taraflı yapışkan bant Petri kabına veya diğer açık kapsayıcıda çekti iğne falan batmazdı.
Not: micropipette çektirme sistemi için kullanılan ayarları vardı: ısı 335, FIL = = 4, VEL = 40, DEL = 200, PUL = 100. - Is bir mikro-yükleyici kullanarak enjeksiyon iğne ipucu ( Tablo malzemelerigörmek) için damlalıklı 0.5 - 1.0 µL aşağı konik sonuna yakın iğne içinde. Oluşursa kabarcıklar iğneyi ucundan kaldır.
- Enjeksiyon iğne iğne bağı yerleştirin.
- İğne ucu hafifçe forseps güzel bir ikili ile kırma, ya da hafifçe dokunmadan/coverslip veya cam slayt üzerindeki sürükleyerek açın.
Not: Hala dışarı çıkmasını enjeksiyon karışım verir en küçük açılması için hedeftir (daha küçük açıklıklar genellikle daha yüksek enjeksiyon basıncı gerektirir). Onlar zaten açık olduğundan eğimli iğneler bu adımı gerekmez.
4. mikroenjeksiyon ve enjeksiyon sonrası bakım
- İyi bir fırça kullanarak, dikkatli bir şekilde steril su ile 1-3 yumurta yüzeyine ıslak, iğne yerleştirin ve çözüm enjekte. Yüzey kurumadan her yumurta enjekte et. Görünüm için kırmızı renk yumurta içinde az miktarda enjeksiyon sırasında başarılı mikroenjeksiyon belirtmek için bak. Ezmek veya bak hasarlı, boş veya aksi takdirde enjekte cant herhangi bir yumurta kaldırın.
Not: enjeksiyon basıncı iğne delik boyutu bağlı olarak değişir, 10-13 psi iyi bir başlangıç noktası olsa da. - Tüm yumurta enjekte sonra filtre kağıdı cam slayttan kaldırın.
- (Yukarıda açıklanmıştır) %1 agar çanak yüzeyi filtre kağıdı yerleştirin.
- Plastik parafin film çanak mühür ve 12 gün boyunca kuluçka yetiştirme 26 ° C böcek koymak için kullanın.
Not: Parafin film Çapraz kontaminasyon küf yemekleri arasında engellenmesine yardımcı olur. Ancak, küf ve bakterilerin büyüme önlemek için başka bir tedavi enjekte embriyo yaşama azaltmak olabilir.
5. Kültür ve embriyoların çıkım
- Embriyo 12 gün sonrası enjeksiyon yeni yumurtadan larva için kontrol edin ve her gün önümüzdeki 2 hafta boyunca devam edin.
- Larvalar, Filiz Mısır ve toprak bir yetiştirme kutusu için iyi bir fırça kullanarak aktarın.
Not: Kalıp agar tabak içinde büyümek, ama larva hala çoğu durumda yumurtadan. Larva hepsini yakalamak için dikkatli bir şekilde kalıp içinde arayın. Bazı larvaların çanak kapağı için hareket olabilir ve yoğunlaşma içinde sıkışıp. - Larva yetiştirme yöntemleri25standart WCR takip 26 ° C'de arka.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu iletişim kuralı geliştirilirken önemli bir göz mikroenjeksiyon esnasında embriyonik gelişim aşaması oldu. Özellikle, DNA'lar mikroenjeksiyon embriyonik cellularization önce germline dönüştürme gerektirir. Bunun nedeni DNA'lar kolayca hücre zarlarında geçemez. Dechorionation WCR embriyo aslında tüm koruyucu membran embriyonun bütünlüğünü için sorumlu erir çünkü nükleer bir leke kullanarak WCR embriyonik gelişim aşamalarında görselleştirmek için girişimleri başarısız oldu. Ancak, bu satı...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
WCR mikroenjeksiyon RNAi amacıyla dsRNAs ile bildirilen9olmasına rağmen bu precellular WCR embriyo, germline dönüştürme yürütmek için kritik bir işlem microinjecting için en iyi yöntemler kurmak için ilk protokoldür ve/veya CRISPR/Cas9 genom içinde bu tür düzenleme. Dönüşüm verimliliği olduğu gibi WCR embriyo başarılı mikroenjeksiyon birçok etkene bağlıdır. Aşağıda açıklanan bazı önemli konuları bu böceğin germline dönüştürme için bu iletişim kuralını kullanan sonucu etkileyen vardır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser Monsanto Mısır Rootworm bilgi araştırma programı hibe tarafından desteklenen, numara AG/1005 (için MDL ve YC) ve başlangıç fonlar MDL için NCSU verin. FC hibe Monsanto'nun Mısır Rootworm bilgi araştırma programı (AG/1005) ve Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir (MDL) sayı MCB-1244772 verin. Yazarlar hiçbir rakip ilgi bildirin. FC ve MDL gebe ve deneyler tasarlanmış; FC, PW ve SP deneyler yapılır; FC ve MDL sonuçları analiz; ve FC, NG ve MDL el yazması yazdı. Biz Teresa O'Leary, William Klobasa ve Stephanie Gorski WCR eleme konusunda uzman onların yardım için teşekkür ederim. Ayrıca Dr. Wade Fransızca (USDA-ARS, Kuzey Merkez tarımsal araştırma laboratuvarı, Brookings, SD) laboratuar koloniler ve yetiştirme protokolleri sağlayarak kurmak için yumurta gönderiler için teşekkür ediyoruz.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kalitatif Filtre Kağıdı (Siyah) | Ahlstrom | 8613-0900 | Yumurta mikroenjeksiyonu için |
| 1 oz Kaplar | Anny'nin Plastik Sofra Takımı | ASET101 | Yumurta kabı |
| Drosophila Agar Tip II | Apex | 66-103 | WCR yumurtlama tabağı için Yüzey |
| Tüy Ağırlığı Forseps | Bioquip | 4748 | Larva ve pupaların işlenmesi |
| Clorox Normal-Çamaşır Suyu1 | Clorox | 44600-30770 | Mısır ve bulaşıkları yıkayın |
| Trucker'ın Favorisi Yellow | Coor Farm Supply | 502 | WCR Mikroenjeksiyon Sistemini beslemek için Mısır |
| (Ev yapımı) | NA | Parçalar ve talimatlar istek üzerine temin edilebilir | Enjeksiyon basıncını kontrol eder (0-20 psi) |
| Elmer'in Toksik Olmayan Yapıştırıcısı | Elmer's Products, Inc. | E304 | Yumurtaları filtre kağıdına yapıştırın |
| epTIPS Mikro Yükleyici Uçları | Eppendorf | C2554691 | Doldurma iğnesi yükleme uçları |
| Falcon Doku Kültürü Kapları | Falcon | 25383-103 | Filizlenen mısır /150 x 25 mm |
| Fisherbrand Kantitatif Dereceli Filtre Kağıdı Daireleri | Fisher Scientific | S47576C | Yumurtlama için agar kabı yapımı / 9cm |
| Sparkleen | Fisher Scientific | 04-320-4 | Bulaşıkları yıkayın |
| Düz Mikroskop Slaytları | Fisher Scientific | 12-549-3 | Mikroenjeksiyon için filtre kağıdı ve yumurtaları tutma |
| Batı Mısır Kök kurdu Polen İkamesi Olmadan | Sınır Tarım Bilimleri | F9766B | WCR yetişkin yapay diyet |
| Pamuk Topları, Büyük | Genesee Scientific | 51-101 | Şişeyi kapatın |
| Globe Scientific 3.0 mL Küçük Ampul Transfer Pipetleri | Globe Scientific | 137035 | Yumurtaları toplayın ve aktarın |
| Leica M165 FC Floresan Stereomikroskop | Leica | M165 FC | WCR taraması |
| Floresan Stereomikroskop için DsRed Filtre Seti | Leica | DSR | Uyarma filtresi: 510-560 nm, emisyon filtresi: 590-650 nm |
| EGFP filtresi | Leica | GFP2 | Uyarma filtresi: 440 ve ndash; 520 nm, emisyon filtresi: 510 nm |
| Yetişkin koloni için BugDorm | MegaView Bilim | DP1000_5P | Kafesi |
| Minyatür Boya Fırçası | MyArtscape | MAS-102-MINI | Liner 2/0 |
| Joystick Mikromanipülatör | Narishige | MN-151 | Mikromanipülatör ve iğne tutucu |
| Mikroskop XY Aşaması | Olympus | 265515 | Mikroskop aşaması (stereoskop ile kullanım için uyarlanmıştır) |
| Sınıf 90 Tülbent | Online Kumaş Mağazası | CHEE90 | Yumurta bırakma için |
| Plastik parafin filmi | Pechiney Plastik Ambalaj | PM-996 | Mikroenjeksiyon sonrası agar kabını kapatın / Rulo boyutu 4 inç x 125 ft |
| Percival İnkübatör | Percival & nbsp; | I41VLH3C8 | WCR yetiştirme odası (böcek yetiştirme kuluçka makinesi) |
| Dar Ağızlı Erlenmeyer Şişeleri | VWR | 4980-300-PK | Yetişkin koloni için su kabı |
| Griffin Düşük Form Beherler | VWR | 1000-600-PK | Yumurta yıkama için |
| Örgülü Pamuk Ruloları | Richmond Dental Cotton Co. | 605-3599 | Yetişkin koloni için su temininde kullanım |
| Petri Kapları (35x10mm) | SIGMA | CLS430588-500EA | Diyet plakaları için |
| Fenol Kırmızı | Sigma | 143-78-8 | Mikroenjeksiyon tamponu |
| Lazer Tabanlı Mikropipiette Çektirme | Sutter Aleti | P-2000/G | İğne çektirme/Isı = 335, FIL = 4, VEL = 40, DEL = 200, PUL = 100 |
| Premium Üst Toprak | The Scotts Company | 71130758 | Cron yetiştiriciliği |
| için toprakReloc Zippit 2 Mil Fermuarlı Çanta | Amerika Birleşik Devletleri Plastik Şirketi | 48342 | Mikroenjeksiyon sonrası torba agar kabı / 5x7 |
| Petri Kapları (100x15m) | VWR | 89038-968 | Yumurtlama için agar kabı yapma / 100 x 15 mm |
| 6 oz Kaplar | Webstaurantstore | 128E506 | WCR tek çift çiftleşme odası |
| 38 oz Kaplar | Webstaurantstore | 128NC888 | Larva yetiştirme kutusu/38 oz |
| ChoiceHD 16 oz. Mikrodalgada Yarı Saydam Plastik Şarküteri Kabı | Webstaurantstore | 128HRD16 | Larva yetiştirme kutusu/16 oz |
| Mikroenjeksiyon Kapsamı | Wild Heerbrugg | WILD-M8 | XY aşaması ile donatılmış mikroenjeksiyon kapsamı |
| Standart Cam Kılcal Damarlar | Dünya Hassas Aletler | 1B100F-4 | Mikroenjeksiyon |
| iğneleri Yetişkin Batı Mısır Kök kurtları | Kuzey Merkezi Tarım Araştırma Laboratuvarı | Diyapaz olmayan suş | Dr. Bryan Wade'den talep French'in laboratuvarı |
| Plazmid DNA Midi Kiti | Qiagen | 12143 | Enjeksiyona hazır plazmit DNA'larının saflaştırılması |
Kaynaklar
- Gray, M. E., Sappington, T. W., Miller, N. J., Moeser, J., Bohn, M. O. Adaptation and Invasiveness of Western Corn Rootworm: Intensifying Research on a Worsening Pest. Annual Review of Entomology. 54, 303-321 (2009).
- Gassmann, A. J., Petzold-Maxwell, J. L., Keweshan, R. S., Dunbar, M. W. Field-evolved resistance to Bt maize by western corn rootworm. PLoS One. 6 (7), e22629(2011).
- Gray, M. E., Levine, E., Oloumi-Sadeghi, H. Adaptation to crop rotation: western and northern corn rootworms respond uniquely to a cultural practice. Recent research developments in entomology. 2, 19-31 (1998).
- Meinke, L. J., Siegfried, B. D., Wright, R. J., Chandler, L. D. Adult Susceptibility of Nebraska Western Corn Rootworm (Coleoptera: Chrysomelidae) Populations to Selected Insecticides. Journal of Economic Entomology. 91 (3), 594-600 (1998).
- Roselle, R., Anderson, L., Simpson, R., Webb, M. Annual report for 1959, cooperative extension work in entomology. , University of Nebraska Extension. Lincoln, NE. (1959).
- Wright, R., Meinke, L., Siegfried, B. Corn rootworm management and insecticide resistance management. Proceedings. , 45-53 (1996).
- Baum, J. A., et al. Control of coleopteran insect pests through RNA interference. Nat Biotechnol. 25 (11), 1322-1326 (2007).
- Velez, A. M., et al. Parameters for Successful Parental RNAi as An Insect Pest Management Tool in Western Corn Rootworm, Diabrotica virgifera virgifera. Genes (Basel). 8 (1), (2016).
- Alves, A. P., Lorenzen, M. D., Beeman, R. W., Foster, J. E., Siegfried, B. D. RNA interference as a method for target-site screening in the Western corn rootworm, Diabrotica virgifera virgifera. J Insect Sci. 10, 162(2010).
- Rangasamy, M., Siegfried, B. D. Validation of RNA interference in western corn rootworm Diabrotica virgifera virgifera LeConte (Coleoptera: Chrysomelidae) adults. Pest Management Science. 68 (4), 587-591 (2012).
- Khajuria, C., et al. Parental RNA interference of genes involved in embryonic development of the western corn rootworm, Diabrotica virgifera virgifera LeConte. Insect Biochem Mol Biol. 63, 54-62 (2015).
- Cooley, L., Kelley, R., Spradling, A. Insertional mutagenesis of the Drosophila genome with single P elements. Science. 239 (4844), 1121-1128 (1988).
- Robertson, H. M., et al. A stable genomic source of P element transposase in Drosophila melanogaster. Genetics. 118 (3), 461-470 (1988).
- Spradling, A. C., Rubin, G. M. Transposition of Cloned P Elements into Drosophila Germ Line Chromosomes. Science. 218 (4570), 341-347 (1982).
- O'Kane, C. J., Gehring, W. J. Detection in situ of genomic regulatory elements in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 84 (24), 9123-9127 (1987).
- Lukacsovich, T., et al. Dual-tagging gene trap of novel genes in Drosophila melanogaster. Genetics. 157 (2), 727-742 (2001).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted Gene Expression as a Means of Altering Cell Fates and Generating Dominant Phenotypes. Development. 118 (2), 401-415 (1993).
- Horn, C., Offen, N., Nystedt, S., Hacker, U., Wimmer, E. A. piggyBac-based insertional mutagenesis and enhancer detection as a tool for functional insect genomics. Genetics. 163 (2), 647-661 (2003).
- Bassett, A. R., Tibbit, C., Ponting, C. P., Liu, J. L. Highly efficient targeted mutagenesis of Drosophila with the CRISPR/Cas9 system. Cell Rep. 4 (1), 220-228 (2013).
- Moscou, M. J., Bogdanove, A. J. A simple cipher governs DNA recognition by TAL effectors. Science. 326 (5959), 1501(2009).
- Bibikova, M., Golic, M., Golic, K. G., Carroll, D. Targeted chromosomal cleavage and mutagenesis in Drosophila using zinc-finger nucleases. Genetics. 161 (3), 1169-1175 (2002).
- Jeggo, P. A. DNA breakage and repair. Adv Genet. 38, 185-218 (1998).
- Gantz, V. M., Bier, E. Genome editing. The mutagenic chain reaction: a method for converting heterozygous to homozygous mutations. Science. 348 (6233), 442-444 (2015).
- Windbichler, N., et al. A synthetic homing endonuclease-based gene drive system in the human malaria mosquito. Nature. 473 (7346), 212-215 (2011).
- Branson, T. F., Jackson, J. J., Sutter, G. R. Improved Method for Rearing Diabrotica virgifera virgifera (Coleoptera, Chrysomelidae). Journal of Economic Entomology. 81 (1), 410-414 (1988).
- Siebert, K. S., Lorenzen, M. D., Brown, S. J., Park, Y., Beeman, R. W. Tubulin superfamily genes in Tribolium castaneum and the use of a Tubulin promoter to drive transgene expression. Insect Biochem Mol Biol. 38 (8), 749-755 (2008).
- Chu, F., et al. Germline transformation of the western corn rootworm, Diabrotica virgifera virgifera. Insect Mol Biol. , (2017).
- Ingolia, T. D., Craig, E. A., McCarthy, B. J. Sequence of three copies of the gene for the major Drosophila heat shock induced protein and their flanking regions. Cell. 21 (3), 669-679 (1980).
- Berghammer, A. J., Klingler, M., Wimmer, E. A. A universal marker for transgenic insects. Nature. 402 (6760), 370-371 (1999).
- Branson, T. The selection of a non-diapause strain of Diabrotica virgifera (Coleoptera: Chrysomelidae). Entomologia Experimentalis et Applicata. 19 (2), 148-154 (1976).
- Handel, K., Grunfelder, C. G., Roth, S., Sander, K. Tribolium embryogenesis: a SEM study of cell shapes and movements from blastoderm to serosal closure. Dev Genes Evol. 210 (4), 167-179 (2000).
- Handler, A. M., James, A. A. Insect transgenesis: methods and applications. , CRC Press. (2000).
- Lorenzen, M. D., et al. piggyBac-based insertional mutagenesis in Tribolium castaneum using donor/helper hybrids. Insect Mol Biol. 16 (3), 265-275 (2007).
- Gilles, A. F., Schinko, J. B., Averof, M. Efficient CRISPR-mediated gene targeting and transgene replacement in the beetle Tribolium castaneum. Development. 142 (16), 2832-2839 (2015).
- Phuc, H. K., et al. Late-acting dominant lethal genetic systems and mosquito control. BMC Biol. 5, 11(2007).
- Horn, C., Wimmer, E. A. A transgene-based, embryo-specific lethality system for insect pest management. Nat Biotechnol. 21 (1), 64-70 (2003).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
