Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Lipopolysaccharide enjeksiyon bağırsak bariyer ihlali sonra giriş ürünlerin mikrobiyal kaynaklı taklit etmek için fareler içine

19.7K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/57610

⸱

2 Mayıs 2018

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedicine, University of Basel, 2Division of Gastroenterology and Hepatology, University Hospital of Basel

Bu makalede

Düzeltme bildirimi

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Özet

Burada bağırsak bariyer ihlali sonra girişinde bileşiklerin bakteriyel kaynaklı taklit için bir protokol sunulmuştur. Lipopolysaccharide sublethal düşük dozda sistemik 24 saat sonrası enjeksiyon için izlenen fareler içine enjekte ettiler. Pro-inflamatuar sitokinlerin ifade dalak, karaciğer ve iki nokta üst üste birkaç saat noktada tespit edilmiştir.

Özet

Bağırsak epitel bariyer normalde tolere veya göz ardı microbiota konaktan ayırır. Bu bariyer ihlali ana bilgisayar dolaşım ve iç organların iltihabi bağırsak hastalığı (IBD) olgularda gözlenen gibi kontrolsüz iltihap için önde gelen erişim ana bilgisayar içine bakteri veya bakteri kaynaklı ürün giriş sonuç bu tarafından artan bir bağırsak epitel geçirgenliği ile karakterizedir.

Ana girişinde bileşiklerin bakteriyel kaynaklı taklit etmek için bir endotoksemi modeli kabul hangi lipopolysaccharide (LPS), gram-negatif bakteri dış hücre duvarına bir bileşenidir, fareler enjekte edildi. Bu çalışmada, LPS sublethal bir doz intraperitoneally enjekte ettiler ve fareler daha sonra 8 h bir hastalık Puan kullanarak takip. Ayrıca, Il6, Il1b ve Tnfa inflamatuar sitokinlerin düzeyde dalak, karaciğer ve kolon qPCR farklı zaman noktalarda tarafından analiz edildi ifade LPS enjeksiyon sonrası. Bu model bağışıklık yanıtı araştırmaların ardından mikroorganizmalar veya vücut yüzeyleri bariyer ihlali tarafından neden olduğu bakteriyel kaynaklı ürünler işgali ile ilgili çalışmaları için yararlı olabilir.

Giriş

İnsan bağırsak bir karşılıklı yararlı ilişkilerini evrimi sırasında ana bilgisayar ile geliştirmiştir microbiota, oluşturan mikroorganizmaların büyük bir konsorsiyum ile kolonize. Vitaminler, besin sindirim ve patojenler koruma microbiota1bulunduğu ana bilgisayara microbiota sağlar, ancak bu ilişkide, ana bilgisayar güvenli bir niş microbiota için sağlar. Ev sahibi ve microbiota yararlı bu ilişkisi rahatsız zaman, iltihabi bağırsak hastalığı (IBD) gibi hastalıklar gelişebilir. IBD bir multifaktöriyel kronik inflamatuar iki önemli biçimde, Crohn hastalığı (CD) ve Ülseratif Kolit (UC) oluşan genetik ve çevresel faktörler nedeniyle bağırsak hastalığıdır. İki IBD form arasındaki benzerlikler olsa da, onlar konum ve inflamatuar değişiklikler doğası bazı farklılıklar karakterizedir. CD UC transmural sigara ve kolon sınırlı iken potansiyel olarak gastrointestinal sistem herhangi bir bölüme genişletebilirsiniz bir relaps transmural inflamatuvar hastalıktır. Ayrıca, mutasyonlar nükleotit bağlama Oligomerizasyonda etki alanını içeren protein 2 (NOD2), Muramil dipeptid (MDP), bir bileşeni en gram-pozitif - negatif bakteriler, hücre duvarı tanıdığı bir desen tanıma reseptör (PRR) olduğunu CD2ile ilişkili. Ayrıca, Escherichia coli (e.coli), Listeria ve streptokok ürünlerini tüm makrofajlar içinde bir bariyeri sonra3ana girdiğiniz CD hastalarda bulunmuştur. Bakteri veya ürünlerini ana CD geliştirilmesi sırasında girdiğinizde, anti-bakteriyel antikorlar4dolaşan üretimi için önde gelen bir yanıt bağışıklık sistemi geliştirir. Belki de, en inandırıcı kanıt microbiota IBD patogenezinde rol için fare modelleri kaynaklanıyor. Hayvanlar antibiyotiklerle tedavi edilir zaman, ya da fareler döl-özgür (GF) koşullarda tutulur, hastalığın şiddeti en kolit modellerinde gibi farelerde IL-10-/-kolit GF İmkanları5,6geliştirdiğiniz değil azalır. Ayrıca, kolit da dengesiz bir kompozisyon ile karakterizedir ve dysbiosis7denilen zenginlik azaltılmış microbiota bileşimi rahatsız ediyor. Mikroplar ve mikrobiyal kaynaklı ürünler girişine doğru ev sahibi açabilir artan bir bağırsak geçirgenliği IBD sonucu olabilir.

Hayvanlarda, uygulama Dextran sodyum sülfat (DSS) epitel bariyer8bir artan geçirgenliği için önde gelen bir bağırsak epitel gedik neden olmaktadır. DSS kolit9ile hayvanlarda Portal LPS konsantrasyonları yüksek. İlginçtir, C tipi lektin reseptör belirli hücre içi adezyon molekülü-3 eksik hayvanlar nonintegrin kapma homolog ile ilgili 1 (işareti-R1) DSS kolit ve LPS kaynaklı endotoksemi10korunur. Daha fazla ana bilgisayar yaymak için bakteri veya türetilmiş bakteri ürünleri vasküler bariyer11, küçük ve büyük bağırsak bulunur Periton boşluğuna, Mezenterik lenf düğümleri ve/veya karaciğer12geçmek zorunda. Bu sistem karmaşıklığını azaltmak için tanımlanmış bir bakteriyel kaynaklı bileşik kullanıldı. LPS, endotoksemi yol açan mayi (IP) veya Intravenous (IV) sonra enjeksiyon13 İnterlökin Il6 ifade ve Bab ve sitokin Tnfa LPS karşılık olarak çalışmaya fareler, içine enjekte.

LPS olduğunu lipid A oluşan bir hücre duvarı bileşeni Ayagin Gram-negatif bakteriler, olarak ifade edilen bir patojen ilişkili moleküler desen (PAMP) (LPS yapısı ana PAMP), çekirdek oligosakkarit ve bir O zinciri14yan. Toll benzeri reseptör dendritik hücreler, makrofajlar ve epitel hücreleri tarafından ifade edilen 4 (TLR4) Co reseptörleri için uygun bağlama gerektiren LPS15, tanır. Akut Faz LPS farklılaşma 14 kümeye LPS (CD14), bir glycosylphosphatidylinositol bağlantılı membran protein aktarır bir kompleks oluştururlar, protein LPS-bağlayıcı protein (LBP) bağlar. CD14 daha fazla LPS lenfosit antijeni 96 veya diğer adıyla MD-2, TLR4 ekstrasellüler etki alanı ile ilişkili olduğu taşırma su bendi kapakları. MD-2 LPS bağlama Miyeloid farklılaşma İlköğretim içeren aşağı akım sinyal yolu14, etkinleştirmek için hücre içi adaptör molekülleri askere konformasyon değişiklikleri ikna etmek için TLR4/MD-2 dimerization kolaylaştırır Yanıt gen 88 (MyD88) - bağımlı yolu ve tır etki alanını içeren adaptör-inducing interferon-β (TRIF) - bağımlı yolu16. LPS TLR4 tarafından tanınması sonra NF-κB yolu etkinleştirir ve proinflamatuar sitokinler, TNFα, Il-6 ve IL-1β17gibi ifadesi indükler.

LPS enjekte edilir zaman hayvanlar, hayvanlar için verilen LPS konsantrasyonu içine özellikle, hayvan ve diyet genetik arka plan kabul gerekir. LPS yüksek konsantrasyonda hipotansiyon ve birden fazla organ arızaları, ile karakterize bir septik şoka yol açar ve sonunda ölüm18. Fareler nerede LPS konsantrasyonları 2-4 ng/kg vücut ağırlığı (BW) arasında bir sitokin fırtına19ikna edebiliyoruz daha az göre uzatmaktı, LPS duyarlıdır. Fareler için öldürücü doz (LD50), hangi ölüm yarısı 10-25 mg/kg BW20 bağlı olarak kullanılan fare zorlanma fareler aralıklarının neden olmaktadır. C57Bl/6 ve BALB/c, yaygın olarak kullanılan fare suşları için 10 mg/kg BW (LD50) % öldürücü doz 50'dir. Buna ek olarak, suşları C3H/HeJ ve C57BL/10ScCr Tlr421mutasyonların kaynaklanmaktadır indüklenen LPS endotoksemi korunuyorsunuz demektir. Sonuç olarak, Tlr4-eksik fareler hiporesponsif LPS22ile enjeksiyonlar için değildir. Diğer genetik olarak değiştirilmiş fare, PARP1/fareler23 gibi LPS kaynaklı toksik şok dayanıklı vardır.

Açıklanan fare modeli burada sistemik bir bariyer ihlali sonra LPS yayılması vücudun yüzeyler sonuçlarını taklit etmek için yönetilen LPS sublethal bir doz kullanır. Seçilen LPS konsantrasyonu (2 mg/kg BW) mortalite C56Bl/6 farelerde ama pro-inflamatuar sitokinlerin indüklenen sürümü ikna etmek değil.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Fareler yetiştirilen ve belirli patojen-Alerjik (SPF) şartlarda, biyomedikal bölümü, Basel Üniversitesi (Basel, İsviçre) hayvan tesisi devam etti. Tüm fare deneyleri İsviçre Federal ve Kanton düzenlemeler (hayvan iletişim kuralı numarası 2816 [Kanton Basel-Stadt]) uygun olarak yapıldı.

1. LPS çözüm hazırlanması

  1. Escherichia coli 0111:B4 steril koşullarda gelen saf LPS stokunun açın ve su 5 mg/mL konsantrasyonu için yeniden oluşturma.
  2. Steril fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) 0.2 µg/µL çalışma konsantrasyonu ile LPS stok sulandırmak.

2. LPS farelere mayi enjeksiyon

  1. Çözüm bir 0.5 mL şırınga 30 G iğne Laminer hava akışı ile çalışma LPS Aspire edin.
  2. Kadın C57Bl/6 fare (10 hafta-in yaş altı) tartmak ve eklenecek LPS, miktarı: 10 µL (2 µg) /g vücut ağırlığı.
    Not: bir fare 20 g ardından 20 g x 10 µL tartmak Eğer örneğin, 200 µL LPS enjekte edilir çözüm ihtiyaçlarını çalışma =.
  3. Nazikçe ama sıkıca fare işlemek ve bir elinde hayvan dizginlemek. Hayvan ama normal nefes değil kıvrıl ve dön sırasında kısıtlama mümkün olduğundan emin olun.
  4. Fare burun biraz karın enjeksiyon için ortaya çıkarmak için yere doğru eğin. Karın ve enjeksiyon yeri orta hat düşük karın sol veya sağ orta hat üzerinden bulun. I.p. PBS LPS yerine kontrol fareler enjekte.
  5. Serbest el ile uygun birimi (2.2 adımda hesaplanan birim) enjekte çözüm çalışma LPS. İğne Periton boşluğuna aksi, mis enjeksiyonları karın kas katmanına oluşabilir girdiğini emin olun. Hala, o bölgede bulunan iç organlara zarar önlemek için peritoneal kavite içine iğneyle çok derine gitme.
  6. Hayvan dikkatli belgili tanımlık kafes kafes başına en fazla 5 fare ile dönün.

3. monitör fareler

  1. Hayvanlar oluşumu ve endotoksemi şiddeti için 8 h için enjeksiyon sonra enjeksiyon ve her 2 h anda izlemek. Bu nedenle, daha önce yayımlanmış makale 24adapte edilmiş bir skor sayfası (Tablo 1) kullanmalıdır.
  2. LPS enjekte fareler tablo 1'de listelenen aşağıdaki parametreler için puan edinildi
    1. Normalde pürüzsüz olan kürk görünümü için kontrol edin. Kürk rahatsızlık ve/veya ağrı gösteren karıştırdı, dikenli veya kabarık kürk görüntülenirse, onları 1, 2 veya 3 puan edinildi.
    2. Fare etkinliği için kontrol edin.
      Not: Fareler normalde serbestçe yeme, içme, tırmanma bütün kafes hareket eder ama bastırılmış ya da kısıtlı aktivite acı belirtisi olabilir.
    3. Bilinç düzeyini kontrol edin.
      Not: Fareler çok meraklı, ve onlar normalde çevreleyen soruşturma kafes hareket eder. Eksikliği veya azaltılmış hareketi ağrı ve rahatsızlık önerebilirsiniz.
    4. Gözlere bakın.
      Not: Tam olarak açık gözleri sağlıklı farelerde bekleniyor, ancak muhtemelen salgılanması ile kısmen veya tamamen kapalı gözler acı belirtisi olabilir.
    5. İçin solunum hızını denetleyin.
      Not: Sağlıklı fareler genellikle normal ve hızlı solunum oranına sahip, düşük solunum oranı rahatsızlık belirtisi olabilir).
    6. Solunum kalitesi için kontrol edin.
      Not: Zahmetli nefes ya da nefes nefese olmadan acı bir işaretidir.

4. doku örnekleme ribonükleik asit (RNA) çıkarımı ve homojenizasyon için

  1. Toplama/homojenizasyon tüpleri hazırlayın: eklemek 1 mL tek adım RNA izolasyon reaktif 2 mL tüpler için 1.4 mm seramik küre ile doldurulmuş.
  2. Uygun zaman noktalarda ((0 h) önce ve 2 h, 4 h ve 8 h LPS enjeksiyon sonra) kan kaybı tarafından takip anestezik aşırı doz (isoflurane) fareyle ötenazi ve diseksiyon ile devam edin.
  3. Deri ve iç organları ile karın boşluğu makas çifti ile açığa kas katmanı kesti.
  4. Dikkatle dalak, karaciğer ve iki nokta üst üste incelemek, fat dosya sisteminden organlara temiz ve onları PBS buz üzerinde tutun.
  5. Makas veya skalpel kullanarak her organ dan küçük bir parça (yaklaşık 0.5 cm uzunluğunda) kesip.
    Not: Her zaman her fare (iki nokta üst üste karaciğer, proksimal veya distal kısmının aynı LOB) organ yaklaşık aynı bölümünden parça almak önemlidir.
  6. Kısa bir süre doku kağıt doku parçası üzerinde kuru ve toplama/homojenizasyon tüp tamamen RNA izolasyon reaktif içinde batırılır emin yerleştirebilirsiniz.
  7. Bir yüksek hızlı benchtop homogenizer dokusunda lunaparkçı. Dalak, karaciğer ve iki nokta üst üste 1 döngüsü homojenizasyon için 30 6,00 hızda kullanmak gibi yumuşak dokular için s.
  8. Örnekleri, oda sıcaklığında 5 min için kuluçkaya.
  9. Dikkatli bir şekilde yer ek bileşeni için sıvı azot tüp dondurma doku lysate. RNA izolasyon kadar-80 ° C'de lysate donmuş ek depolar.

5. RNA doku çıkarma

Not: RNA izolasyon reaktifler, kloroform ve alkoller tehlikeli madde kabul edilir. RNA ayıklama kimyasal bir başlık altında gerçekleştirin. Sertifikalı RNase free reaktifler ve ekipman RNase içermeyen bir ortam sağlamak için kullanın.

  1. Faz ayrımı
    1. Buzda donmuş doku lysate çözülme.
    2. Örnek 4 ° C'de kalmayabilir kalan doku parçacıkları cips için 5 min için 1000 x g santrifüj kapasitesi.
    3. Süpernatant yeni bir 1,5 mL nükleaz ücretsiz tüp aktarın.
    4. 1 mL RNA izolasyon reaktif başına 200 µL buz gibi kloroform ekleyin ve elle 10-15 s için şiddetle çalkalanır.
    5. Oda sıcaklığında 2-3 dakika için kuluçkaya.
    6. Santrifüj 12, 000 x g 4 ° C'de 15 dakika
      Not: Örnek şimdi 3 aşama içerir: alt kırmızı fenol kloroform faz, interfaz ve üst renksiz sulu faz. RNA üst sulu aşamasında bulunuyor.
    7. Üst sulu faz (toplam hacminin % 50) ve transfer yeni 1,5 mL nükleaz ücretsiz tüp içine toplamak.
  2. RNA Yağış
    1. 1 mL RNA izolasyon reaktif başına 0.5 mL buz gibi isopropanol ekleyin ve karışımı yavaşça 5 - 6 kez tüp ters çevirme tarafından.
    2. 10-15 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya.
    3. 4 ° C'de 10 dakika için 12.000 x g, santrifüj
      Not: Bu aşamada RNA Pelet görünür olması gerekir.
  3. RNA Pelet yıkama
    1. Tamamen isopropanol Pelet bozmadan içeren süpernatant kaldırın.
    2. Pelet 1 mL buz gibi % 75 etanol ilk lizis için kullanılan 1 mL RNA izolasyon reaktif başı ile yıkayın.
    3. Girdap örnek kısa bir süre.
    4. Santrifüj örneği 7,500 (ya da 12.000) x g ' 4 ° C'de 5 min için
  4. RNA eriterek
    1. Tamamen etanol içinde süpernatant Pelet bozmadan kaldırın.
    2. 3-5 dakika oda sıcaklığında RNA Pelet kurumasını kimyasal başlık altında açılan tüp bırakın (Bu durumda RNA çözülmeye zor olacak gibi aşırı kuru değil).
    3. 20-50 µL nükleaz ücretsiz su RNA Pelet dikkatlice yukarı ve aşağı pipetting tarafından geçiyoruz.
    4. Örnek 10-15 dk daha fazla RNA'ın çözüm geliştirmek için 55 ° C'de kuluçkaya.
      Not: Bu aşamada, RNA-80 ° c daha fazla analiz kadar saklanabilir.

6. sindirim kalan DNA'ın

  1. RNA konsantrasyon Spektrofotometre ile Spektrofotometre bir aliquot (2 µl) pipetting tarafından ölçmek ve önerilen konsantrasyon için ayarlayın.
  2. Max ile DNA kirletici sindirim başlatın. 10 µg RNA nükleaz ücretsiz 50 µL suda.
  3. 10 ben tampon Dnaz ve ben her örnek ve karışımı yavaşça pipetting tarafından yukarı ve aşağı 1 µL rDNase x 0.1 birimi ekleyin.
  4. 20-30 dk 37 ° C'de kuluçkaya.
  5. Girdap Dnaz Inactivation reaktif ve 0.1 birim de pipet ile karıştırma örnek ekleyin.
  6. Zaman zaman el ile karıştırma oda sıcaklığında 5 min için kuluçkaya.
  7. 10.000 x g 1.5 dakika, santrifüj kapasitesi.
  8. Yeni nükleaz ücretsiz tüp içine DNA-Alerjik RNA içeren süpernatant aktarın.
  9. Ölçü RNA konsantrasyon ve kalitesi ile Spektrofotometre.

7. ters transkripsiyon

  1. Piyasada bulunan deoksiribonükleik asit cDNA ters transkripsiyon (RT) kiti ters transkripsiyon için kullanın.
    Not: Burada, RNA 2 µg kadar kopya etmek ters kaydedilebilir.
  2. 2 µg RNA içeren birimin hesaplayın. Yeni bir PCR tüp 2 µg RNA pipet.
  3. Son hacmi 10 µL PCR tüp örnekte nükleaz ücretsiz su ekleyin.
  4. 2 x Master Mix karıştırma aşağıdaki bileşenleri tarafından Tablo 2 ' de listelenen hazırlamak
  5. 10 µL 2 Master Mix x 1 x Master Mix 20 µL hacmi elde etmek için 10 µl RNA ekleyin.
  6. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) tüp ve örnek aşağı spin kısaca kapatın.
  7. Örnekleri bir PCR Thermocycler yerleştirin ve Tablo 3' te listelenen ayarları ayarlayın.
  8. -20 ° c daha fazla çözümleme için oluşturulan cDNA saklayın.

8. kantitatif PCR (qPCR)

  1. Piyasada bulunan bir kit ile qPCR reaksiyonu gerçekleştirmek.
  2. Kendi tasarım ve intron kapsayan astar şablonu cDNA farklı konsantrasyonları ile kullanımdan önce sınayın. Standart bir eğri oluşturarak astar etkinliğini analiz ve yüksek etkinlik ve doğru erime eğrileri ile astar kullanabilirsiniz.
    Not: Bu deneyde kullanılan astar dizisi Tablo 2' de listelenmiştir.
  3. Tablo 4' te açıklanan tepki Kur ile kantitatif Polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) tepkimesi 384-şey plaka hazırlayın.
  4. Zaman reaksiyon karışımı hazırlanan tüm çözümler ve plaka plaka engellemek için alüminyum folyo kullanarak buz üzerinde ıslak tutmak.
  5. Bütün tepkiler triplicates içinde gerçekleştirin.
  6. Tablo 5' te listelenen ayarı kullanarak bir thermocycler PCR reaksiyon yerine getirir.
  7. Tüm triplicates tepkiler ortalama Ct değeri hesaplamak. Tüm hedef genlerin glycerinealdehyde-3-fosfat dehidrojenaz ifade seviyesine normalize (Gapdh) 2^(-ΔCt) hesaplayarak temizlik gen.
    Not: Tüm hedef genlerin ortalama Ct ile > 35 algılama sınırının altında olmak olarak kabul.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sonuçları için ana bağırsak bariyer ihlali sonra oluşur giriş bakteri veya bakteriyel kaynaklı ürün sonra taklit etmek için LPS enjekte içine sublethal doz (2 µg/g vücut ağırlığı) farelerde C57Bl/6. Her tek fare takip ve fareler görünümünü, hayvanlar, gözler, durumu ve solunum hızı ve kalitesi (Tablo 1) faaliyet içerir skor tablosunda listelenen parametrelerle endotoksemi oluşumu için attı . Hayvanlar içinde 24 h (şekil 1) yeniden elde etmek ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu iletişim kuralı mikrobiyal kaynaklı ürünler tarafından işgalden sonra gerçekleşen immünolojik süreçleri taklit eder. Kritik protokol içinde fare çizgi, fareler hijyen durumunu, LPS, hayvanlar endotoksemi oluşumunu ve deney fesih süresi noktası için izleme doz seçimi adımlardır. En önemlisi, genetik arka plan fare baskı kabul gerekir. Farklı fare suşları LPS farklı duyarlılık var. Örneğin, indüklenen C3H/HeJ ve C57BL/10ScCr fareler için LPS dirençli endotoksemi21,25<...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

JHN İsviçre Ulusal Vakfı (SNSF 310030_146290) tarafından desteklenmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
DreamTaq Green PCR Master Mix (2x)Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABDK1081
Yüksek Kapasiteli cDNA Ters Transkripsiyon Kiti,Uygulamalı Biyosistemler, Foster City, CA, ABD4368813
RNaz İçermeyen DNaz Seti,Qiagen, Hilden, Almanya79254
LPS Escherichia coli O111:B4Invivogen, San Diego, CA, ABD.tlrl-eblps
Omnican 50 Tek kullanımlık insülin şırıngasıB. Braun Melsungen, Melsungen, Almanya9151125
Biyoanalizör 2100Agilent Technologie, Santa Clara, ABDuygulanamaz
Santrifüj 5430Eppendorf, Hamburg, Almanyauygulanamaz
Santrifüj Mikro 220RHettich, Kirchlengern, Almanyauygulanamaz
Diseksiyon araçlarıAesculap, Tuttlingen, Almanyauygulanamaz
Hızlı Hazırlık-24 5G Numune Hazırlama SistemiM.P. Biyomedikal, Santa Ana, CA, ABDuygulanamaz
NanoDrop ND-1000NanoDrop Ürünleri, Wilmington, DE, ABDuygulanamaz
TRI ReaktifiZymo Research, Irvine, CA, ABDR2050-1

Kaynaklar

  1. Backhed, F., Ley, R. E., Sonnenburg, J. L., Peterson, D. A., Gordon, J. I. Host-bacterial mutualism in the human intestine. Science. 307, 1915-1920 (2005).
  2. Abreu, M. T., et al. Mutations in NOD2 are associated with fibrostenosing disease in patients with Crohn's disease. Gastroenterology. 123, 679-688 (2002).
  3. Liu, Y., et al. Immunocytochemical evidence of Listeria, Escherichia coli, and Streptococcus antigens in Crohn's disease. Gastroenterology. 108, 1396-1404 (1995).
  4. Schaffer, T., et al. Anti-Saccharomyces cerevisiae mannan antibodies (ASCA) of Crohn's patients crossreact with mannan from other yeast strains, and murine ASCA IgM can be experimentally induced with Candida albicans. Inflamm Bowel Dis. 13, 1339-1346 (2007).
  5. Sellon, R. K., et al. Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice. Infect Immun. 66, 5224-5231 (1998).
  6. Gkouskou, K. K., Deligianni, C., Tsatsanis, C., Eliopoulos, A. G. The gut microbiota in mouse models of inflammatory bowel disease. Front Cell Infect Microbiol. 4, 28(2014).
  7. Schaubeck, M., et al. Dysbiotic gut microbiota causes transmissible Crohn's disease-like ileitis independent of failure in antimicrobial defence. Gut. 65, 225-237 (2016).
  8. Steinert, A., et al. The Stimulation of Macrophages with TLR Ligands Supports Increased IL-19 Expression in Inflammatory Bowel Disease Patients and in Colitis Models. J Immunol. 199, 2570-2584 (2017).
  9. Gabele, E., et al. DSS induced colitis increases portal LPS levels and enhances hepatic inflammation and fibrogenesis in experimental NASH. J Hepatol. 55, 1391-1399 (2011).
  10. Saunders, S. P., et al. C-type lectin SIGN-R1 has a role in experimental colitis and responsiveness to lipopolysaccharide. J Immunol. 184, 2627-2637 (2010).
  11. Spadoni, I., et al. A gut-vascular barrier controls the systemic dissemination of bacteria. Science. 350, 830-834 (2015).
  12. Balmer, M. L., et al. The liver may act as a firewall mediating mutualism between the host and its gut commensal microbiota. Sci Transl Med. 6, 237ra266(2014).
  13. Maier, R. V., Mathison, J. C., Ulevitch, R. J. Interactions of bacterial lipopolysaccharides with tissue macrophages and plasma lipoproteins. Prog Clin Biol Res. 62, 133-155 (1981).
  14. Lu, Y. C., Yeh, W. C., Ohashi, P. S. LPS/TLR4 signal transduction pathway. Cytokine. 42, 145-151 (2008).
  15. Deng, M., et al. Lipopolysaccharide clearance, bacterial clearance, and systemic inflammatory responses are regulated by cell type-specific functions of TLR4 during sepsis. J Immunol. 190, 5152-5160 (2013).
  16. Kagan, J. C., et al. TRAM couples endocytosis of Toll-like receptor 4 to the induction of interferon-beta. Nat Immunol. 9, 361-368 (2008).
  17. Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell. 124, 783-801 (2006).
  18. Cohen, J. The immunopathogenesis of sepsis. Nature. 420, 885-891 (2002).
  19. Suffredini, A. F., et al. Effects of recombinant dimeric TNF receptor on human inflammatory responses following intravenous endotoxin administration. J Immunol. 155, 5038-5045 (1995).
  20. Fink, M. P. Animal models of sepsis. Virulence. 5, 143-153 (2014).
  21. Poltorak, A., et al. Defective LPS signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr mice: mutations in Tlr4 gene. Science. 282, 2085-2088 (1998).
  22. Hoshino, K., et al. Cutting edge: Toll-like receptor 4 (TLR4)-deficient mice are hyporesponsive to lipopolysaccharide: evidence for TLR4 as the Lps gene product. J Immunol. 162, 3749-3752 (1999).
  23. Corral, J., et al. Role of lipopolysaccharide and cecal ligation and puncture on blood coagulation and inflammation in sensitive and resistant mice models. Am J Pathol. 166, 1089-1098 (2005).
  24. Shrum, B., et al. A robust scoring system to evaluate sepsis severity in an animal model. BMC Res Notes. 7, 233(2014).
  25. Brandwein, S. L., et al. Spontaneously colitic C3H/HeJBir mice demonstrate selective antibody reactivity to antigens of the enteric bacterial flora. J Immunol. 159, 44-52 (1997).
  26. Macpherson, A. J., McCoy, K. D. Standardised animal models of host microbial mutualism. Mucosal Immunol. 8, 476-486 (2015).
  27. Masopust, D., Sivula, C. P., Jameson, S. C. Of Mice, Dirty Mice, and Men: Using Mice To Understand Human Immunology. J Immunol. 199, 383-388 (2017).
  28. Wirtz, S., et al. Protection from lethal septic peritonitis by neutralizing the biological function of interleukin 27. J Exp Med. 203, 1875-1881 (2006).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Düzeltme


Formal Correction: Erratum: Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach
Posted by JoVE Editors on 8/04/2018. Citeable Link.

An erratum was issued for: Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach

One of the authors' names was corrected from:

Katarina Raduolovic

to:

Katarina Radulovic

Daha fazla makale keşfet

Lipopolisakkarit EnjeksiyonuEndotoksemi Modeliİnflamatuar Bağırsak HastalığıSitokin Ekspresyon AnaliziRNA İzolasyon ProtokolüHastalık Skor İzlemiFare Peritoneal EnjeksiyonuDoku HomojenizasyonuQPCR Kantifikasyonu
Lipopolysaccharide enjeksiyon bağırsak bariyer ihlali sonra giriş ürünlerin mikrobiyal kaynaklı taklit etmek için fareler içine
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.