Bu eser basılı glycan dizi (PGA) teknoloji küçük hayvanlarda Anti-karbonhidrat antikorlar dolaşan analiz için potansiyelini gösterir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Basılı Glycan dizi: Anti-karbonhidrat antikorlar küçük hayvanlarda dolaşan repertuar analizi için hassas tekniği
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Anti-karbonhidrat antikorlar verilen bireyin dolaşan repertuar kez immünolojik durumu ile ilişkilidir. Sadece iç ve dış potansiyel tehlike sinyalleri mücadelede başarı bireysel bağışıklık durumu belirler, ama aynı zamanda anti-glycan antikorlar (ve onların serolojik düzey varyasyon) dolaşan belirli bir desene varlığı olabilir bir önemli nokta başlangıçlı ve patolojik belirli koşullar ilerleme. Burada, glycan hedefler yüzlerce ile çok yüksek duyarlılığı ölçmek için bir fırsat sunuyor Glycan dizi PGA baskılı tabanlı bir metodoloji açıklayan; ortak bir sınırlama mevcut küçük hayvanlar olan örnek, en az bir miktarda kullanarak (sıçanlar, fareler, hamster, vb) adresi yönleri insan hastalıkları ile model olarak kullanılır. Bu yaklaşım bir temsili örnek olarak, biz doğal anti-glycan antikorlar BALB/c farelerde repertuar analizinden elde edilen sonuçları göster. Biz her BALB/c fare olmanın genetik olarak aynı ve aynı koşullarda yapılmaktadır rağmen çalışma dahil belirli bir desene doğal anti-karbonhidrat antikor geliştirir göstermek. Bu eser repertuar (özelliklerine) araştırmak için PGA teknoloji kullanımı ve anti-karbonhidrat antikorlar, hem sağlık hem de herhangi bir patolojik durum sırasında dolaşan düzeylerini genişletmek iddia ediyor.
Giriş
Antikorlar merkezi bir rol özrüne patojenler doğrudan virüs1,2 ve bakteri2,3, Kompleman sistemi4,5 aktive ederek nötralize tarafından istila karşı oynamak ve fagositoz6geliştirme. Ayrıca, onlar kanser hedefleme ve kötü huylu hücreleri7ve homeostasis bakım8,9ortadan kaldırılması önemli unsurlardır.
Bozuklukları bağışıklık sisteminin otoimmün ve inflamatuar hastal....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Glycochips üretim
-
Mikrodizi hazırlık
- Glukanlardir (50 mM) baskı ve polisakkaritler (10 µg/mL) 300 mM fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS, pH 8,5) 6 çoğaltır kullanarak N-hydroxysuccinimide-derivatized cam slaytlar temassız robotik arrayer (damla birim ~ 900 pL). Her slayt 6 kez tekrar 4 farklı blok alt diziler (Şekil 1A, renklerde) içerir. Her tek alt dizi (8 × 14 sütun satırda) denetimleri de dahil olmak üzere 112 farklı glycan noktalar tarafından oluşturulur (Şekil 1B).
Not: ek tablo 1' de Glycan ile ilgili bilgiler sağlanır. İçin yazdırma mikroçip....
- Glukanlardir (50 mM) baskı ve polisakkaritler (10 µg/mL) 300 mM fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS, pH 8,5) 6 çoğaltır kullanarak N-hydroxysuccinimide-derivatized cam slaytlar temassız robotik arrayer (damla birim ~ 900 pL). Her slayt 6 kez tekrar 4 farklı blok alt diziler (Şekil 1A, renklerde) içerir. Her tek alt dizi (8 × 14 sütun satırda) denetimleri de dahil olmak üzere 112 farklı glycan noktalar tarafından oluşturulur (Şekil 1B).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada, doğal anti-glycan antikorlar 20 BALB/c farelerin bir popülasyondaki repertuar miktar elde edilen temsilcisi sonuçlarının özetini mevcut. Bu çalışmada kullanılan glycochips 419 farklı glycan yapılar içermektedir. Çoğu glukanlardir -CH sentezlenmiş2CH2CH2NH2 spacer Osilahlı-glikosidler, çeşitli durumlarda -CH2CH2NH2 veya NHCOCH -2NH2 glikosidler olarak. Tüm glycan yapıları tar.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Glycan microarrays protein-glycan etkileşimleri40eğitim için vazgeçilmez araçlar haline gelmiştir. Mevcut çalışma BALB/c farelerde Anti-karbonhidrat antikorların dolaşan repertuar çalışmaya PGA teknolojisi tabanlı bir protokol açıklar. PGA biyolojik olarak bilinmeyen glukanlardir ekran çok sayıda imkanı sunuyor, bir son derece uygun bulma aracı13,15,28oldu. Önerilen yöntem aynı Deneysel ortamda, yüz-in se.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Nailya Khasbiullinave Alexey Nokel çalışanları Semiotik LLC, bu çalışmada kullanılan glycochips biridir.
Teşekkürler
Bu eser "Fondo de Investigaciones Sanitarias" tarafından desteklenmiştir (FIS) PI13/01098 Carlos III Sağlık Enstitüsü, İspanyol Sağlık Bakanlığı vermek. DB-G Avrupa Birliği Yedinci Çerçeve Programı (FP7/2007-2013) hibe sözleşmesi 603049 (bağlantı) altında tarafından finanse edilen bir doktora sonrası araştırma konum yararlanmış. NK, NS ve NB çalışmalarını grant #14-50-00131 Rus Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir. DB-G Marta Broto, J. Pablo Salvador ve mükemmel teknik destek için Ana Sanchis ve Alexander Rakitko yardım istatistiksel analiz için minnettarlığını ifade etmek istiyor. Desteği ile "Pla de Doctorats sanayi de la Secretaria d'Universitats ben Recerca del ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| antikorlar< / güçlü> | |||
| biyotinile keçi anti-insan Igs | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD | Referans #: 31782 | |
| biyotinile keçi anti-fare IgM + IgG | Thermo Fisher Bilimsel | Referans #: 31807 | |
| Equipment | |||
| Robotik Arrayer sciFLEXARRAYER S5 | Scienion AG, Berlin, Almanya | http://www.scienion.com/products/sciflexarrayer/ | |
| Leke Tepsisi (slayt kuluçka odası) | Simport, Beloeil, QC, Kanada | Ref. #: M920-2 | |
| Santrifüj | Eppendorf, Hamburg, Almanya | Referans #: 5810 R | |
| Pipetler | Gilson, Middleton, WI, ABD | http://www.gilson.com/en/Pipette/ | |
| Slayt Tarayıcı | PerkinElmer, Waltham, MA, ABD | ScanArray GX Plus | |
| Çalkalama inkübatörü | Cole-Parmer, Staffordshire, İngiltere | Ref. #: SI50 | |
| Biological samples | |||
| BALB/c fareler sera | Bu makale | N/ A | |
| Kompleks İmmünoglobulin Preparatı (CIP) | İmmüno-Gem, Moskova, Rusya | http://www.biomedservice.ru/price/goods/1/17531 | |
| Kimyasallar, Reaktifler ve Glikanlar | |||
| Glycan kütüphanesi | Biyoorganik Kimya Enstitüsü (IBCh), Moskova, Rusya | N/ A | |
| Sığır serum albümini (BSA) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, | Referans #: A9418 | |
| Etanolamin | Sigma-Aldrich | Referans #: 411000 | |
| Tween-20 | Merck Kimyasallar & Life Science S.A., Madrid, İspanya | Referans #: 655204 | |
| Phospahte tamponlu salin (PBS) | VWR International Eurolab S.L, Barselona, İspanya | Referans #: E404 | |
| Sodyum azid | Sigma-Aldrich | Referans #: S2002 | |
| Streptavidin Alexa Fluor 555 konjugat | Thermo Fisher Scientific | Ref. #: S21381 | |
| Streptavidin Cy5 konjuge | GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire, Birleşik Krallık | Ref. #: PA45001 | |
| Malzemeler< / güçlü> | |||
| N-hidroksisüksinamid türevli cam slaytlar H | Schott-Nexterion, Jena, Almanya | Ref. #: 1070936 | |
| Whatman filtre kağıdı | Sigma-Aldrich | Ref. #: WHA10347509 | |
| 1.5 mL tüp | Eppendorf | Referans #: 0030120086 | |
| Yazılım ve algoritmalar | |||
| ScanArray Express Mikrodizi Analiz Sistemi | PerkinElmer | http://www.per | |
| kinelmer.com/microarray | |||
| Hiyerarşik Kümeleme Gezgini uygulaması | Maryland Üniversitesi, MD, ABD | http://www.cs.umd.edu/hcil/hce/ |
Kaynaklar
- Karlsson, G. B., Fouchier, R. A., Phogat, S., Burton, D. R., Sodroski, J., Wyatt, R. T. The challenges of eliciting neutralizing antibodies to HIV-1 and to influenza virus. Nat Rev Microbiol. 6 (2), 143-155 (2008).
- Lu, L. L., Suscovich, T. J., Fortune, S. M., Alter, G.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
