Method Article

Kanserle ilgili yorgunluk mitokondriyal işlev rolünün değerlendirilmesi

DOI:

10.3791/57736

⸱

May 17th, 2018

 ,  ,  , 
1National Institute of Nursing Research, National Institutes of Health

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Amacımız mitokondrial disfonksiyon kanser hastalarında yorgunluk ile ilişkili değerlendirmek için pratik bir protokol geliştirmekti. Bu yenilikçi protokol döneminde klinik kullanımı içeren yalnızca standart flebotomi ve Temel Laboratuvar işlemleri için optimize edilmiştir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yorgunluk bir ortak ve çoğu kanser hastaları etkileyen durum zayıflatıcı olduğunu. Bugüne kadar bu durumun şiddetini ölçmek için objektif yorgunluk kalır kötü hiçbir tanı ile karakterize sınayın. Burada PBMCs yorgun kanser hastalarına toplanan mitokondriyal işlev değerlendirmek için en iyi duruma getirilmiş bir yöntemi açıklanmaktadır. Bir kompakt ekstraselüler akı sistemi ve solunum inhibitörleri sıralı enjeksiyon kullanma, biz PBMC mitokondrial fonksiyonel durum bazal mitokondrial solunum, yedek solunum kapasitesi ve açıklar enerji fenotip ölçerek muayene strese yanıt vermek için tercih edilen enerji yolu. Taze PBMCs klinik ayarı standart flebotomi kullanarak kolayca kullanılabilir. Bu protokol için açıklanan tüm tahlil karmaşık biyokimyasal tekniklerin katılımı olmadan 4 saatten az bir süre içinde tamamlanabilir. Ayrıca, tekrarlanabilir veri almak için gerekli olan bir normalleştirme yöntemi açıklanmaktadır. Sunulan basit yordamı ve normalleştirme Yöntem aynı hasta ve potansiyel tedavisinin etkileri değerlendirmek için zaman puan arasında karşılaştırılabilir tekrarlanabilir veri nesil tekrarlanan örnek toplama için izin vermek.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yorgunluk, kanser hastaları1yaşam kalitesi üzerinde olumsuz bir etkisi vardır yaygın ve üzücü bir durumdur. Bu tarihe kanser yorgunluk kötü tanımlanmış kalır ve sadece öznel hastalar2tarafından raporlama üzerinde dayanır. Bu nedenle, yorgunluk klinik ayarı3,4objektif olarak niteleyen bir kolayca uyarlanabilir tanılama laboratuvar testi tanımlamak için acil bir ihtiyaç vardır.

Mitokondri disfonksiyon, dahil olmak üzere birden çok temel mekanizmaları yorgunluk5neden önerilen. Mitokondri hücresel enerji ihtiyacı ile Oksidatif fosforilasyon, % 95'i sağlayan elektrik santrali organelleri ve kalsiyum sinyal, apoptozis, bağışıklık sinyal ve diğer hücre içi sinyal olaylar6 düzenlenmesi önemli bir rol oynamak . Buna göre Engelli mitokondriyal bioenergetics ve enerji üretim hatalarını yorgunluk için katkıda bulunabilir. Bu hipotezi destekleyen, önceki çalışmalarda kronik yorgunluk sendromu7olan hastalarda mitokondriyal DNA'da mutasyonlar gözlemledim. Olup merkezi sinir sistemi veya iskelet kasları8,9gibi periferik doku içinde yorgunluk patofizyolojik kökeni yatıyor belirsiz kalırken işte şu anda doğru değerlendirmek için doğrudan Yöntem Mitokondrial disfonksiyon canlı, respiring hücrelerdeki yorgunluk ile ilgili.

Mitokondriyal işlev çalışmaya periferik kan mononükleer hücreler (PBMCs) kullanarak birçok avantaj sunar. İlk olarak, PBMCs standart flebotomi kullanarak klinik ortamda kullanılabilir ve hızlı bir şekilde temel laboratuvar teknikleri kullanarak ayrılmış olabilir. İkinci olarak, kan diğer dokulara kas biyopsisi gibi toplama daha az invaziv oluşur. Böylece, kan örnekleri aynı hastadan art arda tedavisinin etkileri boyuna değerlendirilmesi kolaylaştırır zaman içinde toplanabilir. İlginçtir, PBMCs mitokondriyal işlevde de bir hayvan modeli10böbrek mitokondrial durumu ile ilişkili olduğu ortaya çıktı. Ayrıca, bağışıklık hücre mitokondri farklı hastalık koşulları11,12altında sistemik değişiklikleri algılamak için bir proxy olarak kullanılmaya başlandı. Mitokondri bağışıklık hücreleri dolaşan içinde özellikle bağışıklık işlevlerindeki değişikliklere duyarlı ve bağışıklık sitokinler13,14,15gibi moleküller sinyal vardır. Örneğin, PBMCs hastalarda akut romatizmal inflamatuar hastalıklar ile yüksek temel oksijen tüketimi14sergi gözlenmiştir. Buna ek olarak, oksijen tüketimi sepsis16dahil olmak üzere sistemik inflamatuar koşullar ile hastalardan izole PBMCs düşürüldü. İnflamatuar koşullar altında serbest radikaller tarafından işlevsiz mitokondri üretilen daha fazla yüksek oksidatif stres ve uzun süreli iltihap17için katkıda bulunabilir. Mitokondri oksidatif stres gibi enerji üretiminde de merkezi rol yorgunluk kanser hastaların 13' te çalışmak için bir proxy olarak mitokondriyal işlev kullanarak potansiyel yardımcı programı öneriyor.

Mitokondriyal işlev inceleyerek önceki çalışmalarda kullanılan biyokimyasal teknikleri, mitokondrial membran potansiyeli ölçüm veya klinik ayarı5', kolayca adapte olmayabilir belirli hücre popülasyonlarının yalıtım 14,18. Son yıllarda, hücre dışı akı deneyleri gelişimi araştırmacılar için kolayca izin verdi ve doğru bir şekilde yanıt olarak solunum inhibitörleri19,20 otomatik enjeksiyon oksijen tüketim oranını (OCR) değişiklikleri incelemek , 21 , 22. ancak, bu çalışmaların en belirli hücre tipleri için tasarlanmıştır ve yüksek üretilen iş büyüklüğündeki bir klinik ortamda geçerli olmayabilir. Bu makale, klinik kullanım için mitokondriyal işlev incelenmesi için en iyi duruma getirilmiş bir protokol açıklar.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çalışmada (NCT00852111) Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB tarafından) ulusal kurumları, sağlık (NIH), Bethesda, Maryland kabul edildi. Bu çalışmada kayıtlı katılımcılar ötimik adamları, 18 yaş yaş ve üstü, kim sigara metastatik prostat kanseri ile veya olmadan önceki prostatektomi tanısı konuldu ve vardı dış beam radyasyon terapisi (EBRT) almak üzere zamanlanmış. Potansiyel katılımcılar hariç onlar önemli yorgunluk, neden olabilir ilerleyici bir hastalık olsaydı, psikiyatrik hastalık son beş yıl içinde vardı düzeltilmeyen hipotiroidizm veya anemi, ya da ikinci bir malignite vardı. Sakinleştirici, steroidler veya non-steroid anti-enflamatuar ajanlar kullanılan bireyler de dışlandı. Sağlıklı kontrol kan örnekleri, NIH nakli bölümü tıp bir IRB tarafından onaylanan Protokolü (NCT00001846) altında sağlıklı bağışçılardan elde edilmiştir. Tüm katılımcılar NIH Magnuson klinik araştırma Merkezi'nde yaşında işe alınmış. İmzalı yazılı bilgilendirilmiş izinlerin çalışma katılım önce elde edilmiştir.

1. mitokondriyal işlev ölçüm hazırlık (1. gün deneme)

  1. Sensör kartuş hidrat (süresi yaklaşık Malzemeler tablo; görmek: 5 dk).
    1. Sensör kartuşu paketinden çıkarın. Yardımcı program plaka her kuyuya 200 μL Calibrant çözüm ekleyin, sonra her hendek 400 μL Calibrant çözüm ile doldurun.
    2. Şimdi Calibrant çözüm var yardımcı programı plaka sensörü plaka dönün. Kartuş sigara-CO2 37 ° C kuluçka gecede hidrat.
      Not: Sensör kartuş 4 h en az ve en fazla 72 h için nemli gerekiyor.

2. Klinik numune hazırlama (2. gün deneme)

  1. Yorgunluk 13 maddelik işlevsel değerlendirme, kronik hastalık tedavisi - temel (önce EBRT başlatma), orta nokta ve tamamlanması EBRT ve 1 yıl sonrası-EBRT, yorgunluk (FACIT-K)2,23,24 kullanarak ölçmek.
    1. Kullanım a 0 - 4 ölçek nerede bir 0 "hiç de" temsil eder ve bir 4 davalı için karşılık gelen deyimi "çok fazla" ilgilidir her madde yanıt için Toplam puanları ile daha düşük Skorlar yüksek yorgunluk şiddeti yansıtan 16-53, mesafe.
    2. Yorgunluk bir FACIT-F 43 düşük puan ≥43 yokluğu veya klinik-rağmen anlamlı olmayan yorgunluk2gösteren FACIT-F puanı olarak tanımlayın.
      Not: 43 en iyi FACIT-F puan yorgunluk puanları kanser hastaları ve genel nüfus2böler.
    3. FACIT yorgunluk ölçeğinde aşağıdaki 13 bileşen içerir: 1) yorgun; hissediyorum 2) her yerde güçsüz hissediyorum; 3) Ben bitkin hissediyorum ("yıkanmış"); 4) kendimi yorgun hissediyorum; 5) ben yorgun olduğum için işler başladı sorun var; 6) ben yorgun olduğum için şeyler bitirme sorun var; 7) ben enerji var; 8) Ben her zamanki benim faaliyetleri yapmak am güçlü; 9) gündüz uyumak istiyorum; 10) yemek için çok yorgunum; 11) benim her zamanki faaliyetleri yaparken yardıma ihtiyacım var; 12) ben çok yapmak istediğim şeyleri yapmak için yorgun tarafından hayal kırıklığına; ve 13) yorgun olduğum için benim sosyal etkinlik sınırlamak zorunda.
  2. PBMC taze toplanan kan örneklerinden izole (yaklaşık süre: 1 h).
    1. 8 mL kan mononükleer hücreler hazırlık tüp içine toplamak ( Tablo malzemelerigörmek).
      Not: Kan örnekleri içinde 2 h koleksiyonunun işlenmesi gerektiğini. Kan örnekleri daha 2 h örnek toplandıktan sonra işlenirse PBMCs kalitesini tehlikeye olabilir.
    2. 1750 x g (18-25 ° C) Oda sıcaklığında 30 dakika, santrifüj kapasitesi. Bulutlu katman 15 mL konik tüp aktarın. PBS ilâ 15 mL ekleyin ve 5 kez tersine çevirin.
    3. 300 x g de 4 ° C'de 15 dakika santrifüj kapasitesi Dikkatle kaldırmak ve süpernatant rahatsız edici Pelet olmadan. Pelet ilâ 10 mL PBS ekleyerek yeniden askıya alma ve 5 kez tersine çevirin.
    4. 4 ° C'de 10 dakika için 300 x g, santrifüj Süpernatant sıvı atın ve 1 mL PBS hücrelerde yeniden askıya alma. PBMCs 1.5 mL microfuge tüp aktarın.
    5. 610 x g de 10 dakika santrifüj kapasitesi. Dikkatle süpernatant kaldırmak ve Pelet tam RPMI-1640 yılında resuspend (RPMI-%1640 10 ile desteklenmiş FBS, 10 mM penisilin/streptomisin).
  3. Kat hücre plakaları yapışık olmayan hücreler için (yaklaşık süresi: 30 dk).
    1. Hücre ve doku yapıştırıcı çözüm hazırlamak ( Tablo malzemelerigörmek) 0.1 M sodyum bikarbonat pH 8.0 hisse senedi çözümde sulandrarak tarafından. Çalışma çözüm 3,5 μg/cm2 yüzey alanının adlı olmalıdır.
      Not: Bu çözüm deniz midyesi, Mytilus mantarı--dan hulâsa polifenolik proteinleri içerir. Bu proteinler kendisi yüzeylere tutturmak midye tarafından salgılanan tutkal anahtar bileşenleridir. Biz hücre-Tak PBMCs ile en uygun bulmak.
    2. Her şey için yapıştırıcı seyreltilmiş çözeltinin 100 μL ekleyin ve oda sıcaklığında en az 20 dk için kuluçkaya. Üç kez DI su ve hava ile kuru yıkayın.

3. mitokondriyal işlev ölçüm

  1. Tahlil medya hazırlanması (yaklaşık süre: 10 dk.).
    Not: Tahlil medya denemenin gün taze hazırlanmalıdır.
    1. L-glutamine, pyruvate ve glikoz medya (aynı bileşenlerin Dulbecco'nın modifiye kartal Orta (DMEM) olarak, ama sodyum bikarbonat, glikoz, glutamin veya sodyum pyruvate olmadan) üsse tahlil medya yapmak için ekleyin. Medya ısınmak için 37 ° C, sonra pH 7.4 için ayarlayın.
      Not: L-glutamine, pyruvate ve şekeri konsantrasyonları normal büyüme medya konsantrasyonlarda genellikle aynıdır, ancak üzerinde tahlil göre ayarlanabilir.
  2. PBMCs Mito stres test için hazırlamak (yaklaşık süre: 2 h).
    1. Adım 2 yeterli PBMCs % 80-90 confluency ulaşmak için her kuyuya plaka. Deneyim, 1.5 x 105 hücreleri/iyi en tutarlı sonuçlar vermiştir.
      Not: Kuyu A ve H arka plan kuyu vardır ve yalnızca tahlil medya ile hiçbir hücre içermelidir. Wells B G için en az 3-6 kuyu hasta örnek başına outliers için hesap için kaplama öneririz.
    2. Tabak iyi spin aşağı 200 x g hücreleri kuyu dibine bağlı kalmak izin vermek 2 min için de. Hücreleri bir kez tahlil medya ile yıkayın. Bu adımı serum ve sodyum bikarbonat büyüme medyasından kaldırır.
      Not: deneyim, çamaşır adım genellikle 20-%30 hücre kaldırır.
    3. Bir sigara-CO2 37 ° C kuluçka 45-60 dk için arka plan kuyu A ve H. Incubate dahil olmak üzere her kuyuya 180 μL tahlil medya ekleyin.
  3. Mito stres testi çalıştırma
    1. Uyuşturucu Mito stres seti tahlil medya ile aşağıdaki gibi yeniden oluşturma:
      1. Oligomycin: 252 μL tahlil medya 50 mikron hisse senedi bir çözüm üretmek için şişe içine ekleyin.
      2. FCCP: 288 μL tahlil medya 50 mikron hisse senedi bir çözüm üretmek için şişe içine ekleyin.
      3. Antimycin A / Rotenon: 216 eklemek μL tahlil medya 25 mikron hisse senedi bir çözüm üretmek için şişe içine.
    2. Girdap uyuşturucu yaklaşık 1 dakika için yeniden düzenlendi. Çalışma çözümlerinizle sulandırmak.
      Not: Çalışma çözümleri konsantrasyonları titre ve önceden belirlenen hücre türüne bağlı olarak deney öncesinde gerekir. PBMCs için biz Oligomycin bu 1 mikron, 1 mikron FCCP ve 0.5 mikron antimycin A bulmak / Rotenon en iyi iş.
    3. Uyuşturucu her bağlantı noktasına sensör kartuşundaki pipette sırayla:
      1. Bağlantı noktası A: Pipet 20 μL 10 mikron, Oligomycin, 1 mikron her iyi son bir konsantrasyon için.
      2. Bağlantı noktası B: 10 mikron FCCP, 1 mikron her iyi son bir konsantrasyon pipet 22 μL.
      3. Bağlantı noktası C: Pipet 25 μL 5 mikron antimycin A, / Rotenon 0.5 mikron her iyi son bir konsantrasyon için.
  4. "Mito stres testi" hücre dışı akı enstrüman üzerinde seçin. Enstrüman istemi izleyin ve sensör kartuşu takın. Araç kalibrasyon etiket sensörü otomatik olarak gerçekleştirir. Kalibrasyon etiket sensörü ve enstrüman tahlil kalan bitirdikten sonra hücre montaj levhası. Oksijen dynamics 530 ölçülen nm (uyarma) / 650nm (emisyon), ve proton konsantrasyon 470 ölçülen nm (uyarma) / 530 nm (emisyon).

4. mitokondriyal işlev veri normalleştirme

  1. Hücre çoğalması tahlil çözüm hazırlamak (yaklaşık süresi: 5 dk).
    1. 48 μL nükleik asit leke (500 x) ve 240 μL arka plan bastırıcı 11.7 mL PBS ekleyin (2 x). Nükleik asit leke bir hücre permeant DNA'ya bağlanıcı boya ve arka plan bastırıcı ölü hücreleri veya hücre lekeli üzerinden güvenliği aşılan hücre zarının bütünlüğü ile bloklar maskeleme boya. DNA'ya bağlanıcı boya ve arka plan bastırıcı yalnızca canlı hücreleri lekeli sağlar.
    2. Mito stres testi tamamlandıktan sonra her şey ortamda doğrudan çalışma çözüm (180 μL) x 2 eşit miktarda ekleyin.
  2. Hücreleri hücre proliferasyonu tahlil çözümü için 45-60 dk. miktarını canlı hücre (floresan) 508, plaka okuyucu sayısı 37 ° C kuluçka huzurunda kuluçkaya nm (uyarma) / 527 nm (emisyon) ve OCR verileri normalleştirmek (yaklaşık süre: 10 dk.) .
    Not: numara canlı hücreleri ek olarak, kullanıcılar aynı zamanda onların veri hücreleri toplam sayısı, nükleik asit, protein konsantrasyonları, vbmiktarı ile normalize etmek seçebilirsiniz.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mito stres testi oksijen tüketim oranını (OCR) ölçme üzerinde tam bir mitokondri profil eşleştirmek için çeşitli solunum inhibitörleri sıralı enjeksiyon sonra dayanır. Her uyuşturucu enjekte aşağıdaki parametreleri hesaplamakta kullanılan sonra OCR ölçümleri ile ilgili mitokondrial sağlığına: Bazal OCR ilk düzey ATP talep dinlenme karşılamak için gerekli oksijen tüketimi değerlendirmek için herhangi bir uyuşturucu enjekte önce ölçülen. Bazal Solunum Sigara mitokondrial So...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yorgunluk kanser hastalarında iyi tanımlanmış değil veya1ile karakterize zayıflatıcı bir durumdur. Yorgunluk tanısında tamamen öznel raporlama kullanır ve hiçbir geçerli tanılama standart ya da tedavi için bu durum, büyük ölçüde onun pathobiology2anlayış eksikliği nedeniyle. Kanser hastalarında yorgunluk temel önerilen mekanizmaları, mitokondriyal işlev bozukluğu en tedavi amaçlı targetable yollar biridir. Bu nedenle, biz proaktif hasta yorgunluk, o kadar erken de dahil olm...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada bölme, Intramural araştırmaya, Ulusal Enstitüsü Hemşirelik araştırma NIH, Bethesda, Maryland, tam olarak desteklenir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
CPT Mononükleer Hücre Hazırlama Tüpü BD Biosciences362761 'yi takiben PBMC'leri izole etmek için
;Corning10-040PBMC'ler için büyüme ortamı yapmak için
Fetal sığır serumu (FBS)Corning35-010-CVPBMC'ler için büyüme ortamı yapmak için
Penisilin/StreptomisinThermoFisher15140122PBMC'ler için büyüme ortamı yapmak için
Cell-TakCorning354240Hücre ve Doku yapıştırıcı çözeltisi; süspansiyon hücrelerinin yüzeye
yapışmasını sağlarDenizatı XF Kalibrant ÇözeltisiAgilent103059-000Nemlendirici kartuşlar için
XFp Fluxpak (mini plakalar ve sensör kartuşları)Agilent103022-100XFp hücre kültürü mini plakaları ve sensör kartuşları içerir
XF temel ortamıAgilent103335-100XF tahlil ortamı yapmak için
% 45 hücre kültürü D-(+)-Glikoz çözeltisiCorning25-037-CIXF yapmak için tahlil ortamı
Sodyum piruvat çözeltisiCorning 25-000-CIXF tahlil ortamı yapmak için
L-glutamin çözeltisiThermoFisher25030081XF tahlil ortamı yapmak için
Denizatı XFp Mito Stres Test KitiAgilent103010-100Oligomisin, FCCP, antimisin A/rotenon içerir
CyQUANT Doğrudan Hücre Proliferasyon TestiThermoFisherC35011Canlı hücrelerin miktar tayini ve veri normalizasyonu için
Denizatı XFp AnalizörüAgilentS7802AEACanlı hücrelerde mitokondriyal fonksiyonu ölçmek için
Cytation 5 Hücre Görüntüleme Çok Modlu Okuyucu (veya bir plakadaki floresan hücreleri ölçebilen herhangi bir alet)BioTekBTCYT5PVCanlı hücrelerin nicelleştirilmesi ve veri normalizasyonu için
Flebotomi RPMI-1640

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Berger, A. M., et al. Cancer-Related Fatigue, Version 2.2015. Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 13 (8), 1012-1039 (2015).
  2. Feng, L. R., Dickinson, K., Kline, N., Saligan, L. N. Different phenotyping approaches lead to dissimilar biologic profiles in men with chronic fatigue following radiation therapy. Journal of Pain and Symptom Management. 52 (6), 832-840 (2016).
  3. Feng, L. R., et al. Clinical Predictors of Fatigue in Men With Non-Metastatic Prostate Cancer Receiving External Beam Radiation Therapy. Clinical Journal of Oncology Nursing. 19 (6), 744-750 (2015).
  4. Feng, L. R., Wolff, B. S., Lukkahatai, N., Espina, A., Saligan, L. N. Exploratory Investigation of Early Biomarkers for Chronic Fatigue in Prostate Cancer Patients Following Radiation Therapy. Cancer Nursing. 40 (3), 184-193 (2017).
  5. Myhill, S., Booth, N. E., McLaren-Howard, J. Chronic fatigue syndrome and mitochondrial dysfunction. International Journal of Clinical and Experimental Medicine. 2 (1), 1-16 (2009).
  6. Pernas, L., Scorrano, L. Mito-Morphosis: Mitochondrial Fusion, Fission, and Cristae Remodeling as Key Mediators of Cellular Function. Annual Review of Physiology. 78 (1), 505-531 (2016).
  7. Vecchiet, L., et al. Sensory characterization of somatic parietal tissues in humans with chronic fatigue syndrome. Neuroscience Letters. 208 (2), 117-120 (1996).
  8. Jones, D. E. J., Hollingsworth, K. G., Taylor, R., Blamire, A. M., Newton, J. L. Abnormalities in pH handling by peripheral muscle and potential regulation by the autonomic nervous system in chronic fatigue syndrome. Journal of Internal Medicine. 267 (4), 394-401 (2010).
  9. Feng, L. R., Suy, S., Collins, S. P., Saligan, L. N. The role of TRAIL in fatigue induced by repeated stress from radiotherapy. Journal of Psychiatric Research. 91, 130-138 (2017).
  10. Karamercan, M. A., et al. Can peripheral blood mononuclear cells be used as a proxy for mitochondrial dysfunction in vital organs during hemorrhagic shock and resuscitation. Shock. 40 (6), (2013).
  11. Ijsselmuiden, A. J. J., et al. Circulating white blood cells and platelets amplify oxidative stress in heart failure. Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine. 5, 811(2008).
  12. Kong, C. -W., et al. Leukocyte mitochondrial alterations after cardiac surgery involving cardiopulmonary bypass: Clinical correlations. Shock. 21 (4), 315-319 (2004).
  13. Straub, R. H. The brain and immune system prompt energy shortage in chronic inflammation and ageing. Nature Reviews Rheumatology. 13, 743(2017).
  14. Kuhnke, A., Burmester, G., Krauss, S., Buttgereit, F. Bioenergetics of immune cells to assess rheumatic disease activity and efficacy of glucocorticoid treatment. Annals of the Rheumatic Diseases. 62 (2), 133-139 (2003).
  15. Kramer, P. A., Ravi, S., Chacko, B., Johnson, M. S., Darley-Usmar, V. M. A review of the mitochondrial and glycolytic metabolism in human platelets and leukocytes: Implications for their use as bioenergetic biomarkers. Redox Biology. 2, Supplement C 206-210 (2014).
  16. Garrabou, G., et al. The Effects of Sepsis on Mitochondria. The Journal of Infectious Diseases. 205 (3), 392-400 (2012).
  17. Mittal, M., Siddiqui, M. R., Tran, K., Reddy, S. P., Malik, A. B. Reactive oxygen species in inflammation and tissue injury. Antioxidants & Redox Signaling. 20 (7), 1126-1167 (2014).
  18. Adrie, C., et al. Mitochondrial Membrane Potential and Apoptosis Peripheral Blood Monocytes in Severe Human Sepsis. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164 (3), 389-395 (2001).
  19. Traba, J., Miozzo, P., Akkaya, B., Pierce, S. K., Akkaya, M. An optimized protocol to analyze glycolysis and mitochondrial respiration in lymphocytes. Journal of Visualized Experiments. (117), e54918(2016).
  20. Nicholls, D. G., et al. Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells. Journal of Visualized Experiments. (46), e2511(2010).
  21. Van den Bossche, J., Baardman, J., de Winther, M. P. J. Metabolic characterization of polarized M1 and M2 bone marrow-derived macrophages using real-time extracellular flux analysis. Journal of Visualized Experiments. (105), e53424(2015).
  22. Boutagy, N. E., et al. Using isolated mitochondria from minimal quantities of mouse skeletal muscle for high throughput microplate respiratory measurements. Journal of Visualized Experiments. (104), e53216(2015).
  23. Yellen, S. B., Cella, D. F., Webster, K., Blendowski, C., Kaplan, E. Measuring fatigue and other anemia-related symptoms with the Functional Assessment of Cancer Therapy (FACT) measurement system. Journal of Pain and Symptom Management. 13 (2), 63-74 (1997).
  24. Yost, K. J., Eton, D. T., Garcia, S. F., Cella, D. Minimally important differences were estimated for six Patient-Reported Outcomes Measurement Information System-Cancer scales in advanced-stage cancer patients. Journal of Clinical Epidemiology. 64 (5), 507-516 (2011).
  25. Kang, J. -G., Wang, P. -y, Hwang, P. M. Methods in Enzymology. Galluzzi, L., Kroemer, G. 542, Academic Press. 209-221 (2014).
  26. Chacko, B. K., et al. Methods for defining distinct bioenergetic profiles in platelets, lymphocytes, monocytes, and neutrophils, and the oxidative burst from human blood. Laboratory Investigation. 93 (6), 690-700 (2013).
  27. Jones, L. J., Gray, M., Yue, S. T., Haugland, R. P., Singer, V. L. Sensitive determination of cell number using the CyQUANT® cell proliferation assay. Journal of Immunological Methods. 254 (1), 85-98 (2001).
  28. Hartman, M. -L., et al. Relation of mitochondrial oxygen consumption in peripheral blood mononuclear cells to vascular function in type 2 diabetes mellitus. Vascular Medicine. 19 (1), London, England. 67-74 (2014).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mitochondrial FunctionCancer FatiguePBMC IsolationExtracellular FluxMito Stress TestSpare Respiratory CapacityBasal RespirationOligomycin FCCPAntimycin RotenoneCell Proliferation Assay

Related Articles