-1::1
Simple Hit Counter
Skip to content

Products

Solutions

×
×
Sign In

TR

EN - EnglishCN - 简体中文DE - DeutschES - EspañolKR - 한국어IT - ItalianoFR - FrançaisPT - Português do BrasilPL - PolskiHE - עִבְרִיתRU - РусскийJA - 日本語TR - TürkçeAR - العربية
Sign In Start Free Trial

RESEARCH

JoVE Journal

Peer reviewed scientific video journal

Behavior
Biochemistry
Bioengineering
Biology
Cancer Research
Chemistry
Developmental Biology
View All
JoVE Encyclopedia of Experiments

Video encyclopedia of advanced research methods

Biological Techniques
Biology
Cancer Research
Immunology
Neuroscience
Microbiology
JoVE Visualize

Visualizing science through experiment videos

EDUCATION

JoVE Core

Video textbooks for undergraduate courses

Analytical Chemistry
Anatomy and Physiology
Biology
Cell Biology
Chemistry
Civil Engineering
Electrical Engineering
View All
JoVE Science Education

Visual demonstrations of key scientific experiments

Advanced Biology
Basic Biology
Chemistry
View All
JoVE Lab Manual

Videos of experiments for undergraduate lab courses

Biology
Chemistry

BUSINESS

JoVE Business

Video textbooks for business education

Accounting
Finance
Macroeconomics
Marketing
Microeconomics

OTHERS

JoVE Quiz

Interactive video based quizzes for formative assessments

Authors

Teaching Faculty

Librarians

K12 Schools

Products

RESEARCH

JoVE Journal

Peer reviewed scientific video journal

JoVE Encyclopedia of Experiments

Video encyclopedia of advanced research methods

JoVE Visualize

Visualizing science through experiment videos

EDUCATION

JoVE Core

Video textbooks for undergraduates

JoVE Science Education

Visual demonstrations of key scientific experiments

JoVE Lab Manual

Videos of experiments for undergraduate lab courses

BUSINESS

JoVE Business

Video textbooks for business education

OTHERS

JoVE Quiz

Interactive video based quizzes for formative assessments

Solutions

Authors
Teaching Faculty
Librarians
K12 Schools

Language

tr_TR

EN

English

CN

简体中文

DE

Deutsch

ES

Español

KR

한국어

IT

Italiano

FR

Français

PT

Português do Brasil

PL

Polski

HE

עִבְרִית

RU

Русский

JA

日本語

TR

Türkçe

AR

العربية

    Menu

    JoVE Journal

    Behavior

    Biochemistry

    Bioengineering

    Biology

    Cancer Research

    Chemistry

    Developmental Biology

    Engineering

    Environment

    Genetics

    Immunology and Infection

    Medicine

    Neuroscience

    Menu

    JoVE Encyclopedia of Experiments

    Biological Techniques

    Biology

    Cancer Research

    Immunology

    Neuroscience

    Microbiology

    Menu

    JoVE Core

    Analytical Chemistry

    Anatomy and Physiology

    Biology

    Cell Biology

    Chemistry

    Civil Engineering

    Electrical Engineering

    Introduction to Psychology

    Mechanical Engineering

    Medical-Surgical Nursing

    View All

    Menu

    JoVE Science Education

    Advanced Biology

    Basic Biology

    Chemistry

    Clinical Skills

    Engineering

    Environmental Sciences

    Physics

    Psychology

    View All

    Menu

    JoVE Lab Manual

    Biology

    Chemistry

    Menu

    JoVE Business

    Accounting

    Finance

    Macroeconomics

    Marketing

    Microeconomics

Start Free Trial
Loading...
Home
JoVE Journal
Neuroscience
Koklear Implant ameliyatı ve elektriksel olarak uyarılmış işitsel beyin sapı yanıt kayıtları C57B...

Research Article

Koklear Implant ameliyatı ve elektriksel olarak uyarılmış işitsel beyin sapı yanıt kayıtları C57BL/6 farelerde

DOI: 10.3791/58073

January 9, 2019

Charlotte Amalie Navntoft1,2, Jeremy Marozeau1, Tania Rinaldi Barkat2

1Hearing Systems Group, Department of Electrical Engineering,Technical University of Denmark, 2Brain and Sound Lab, Department of Biomedicine,Basel University

Cite Watch Download PDF Download Material list
AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

In This Article

Summary Abstract Introduction Protocol Representative Results Discussion Disclosures Acknowledgements Materials References Reprints and Permissions

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Retraction Notice

The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice

Summary

Koklear implant hayvan modelleri elektrik stimülasyonu ile kalıcı sensorinöral işitme kaybı tedavisinde teknolojik üsler bilgisine ilerletebilirsiniz. Bu çalışmada akut sağır edici ve fareler hem de işlevsel değerlendirme İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ile bir elektrot dizinin koklear implantasyon için cerrahi bir Protokolü sunar.

Abstract

Koklear implant (CIS) İşitme duygusu için sağır kişi sağlayabilir neuroprosthetic cihazlardır. Ancak, bir CI işitme tüm yönleriyle geri yükleyemezsiniz. CI kullanıcılar müzik algıladıkları ve rakip Konuşmacılar, yansımaları ve diğer sesleri ile bir sesi işitme gibi daha doğal ortamlarda gerçekleştirmek üzereyseniz implant teknolojisi geliştirilmesi gereklidir. Böyle geliştirme koklea içinde elektrik stimülasyon ve yanıtları tüm işitme sisteminin içinde mekanizmaları daha iyi anlamak için deneysel hayvan gerektirir. Fare birçok genetik model kullanılabilir nedeniyle giderek daha cazip bir modeldir. Ancak, sınırlı bu tür CI model olarak ağırlıklı olarak küçük elektrot dizilerin Reproduction zorluk nedeniyle kullanmaktır. Bu nedenle cerrahi işlem hakkında daha fazla bilgi vardır CI araştırma farelerde kullanımı genişletmek için büyük ilgi.

Bu raporda, akut sağır edici ve C57BL/6 fare zorlanma bir elektrot dizide Koklear implantasyonu için protokolü biz ayrıntılı olarak tarif. Biz bu yordamı elektriksel olarak uyarılmış İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (eABR) ile fonksiyonel etkinliğini göstermek için ve yüz sinir stimülasyonu örnekleri gösterir. Son olarak, biz de normalde işitme kullanırken sağır edici bir yordam da dahil olmak üzere önemini tartışmak hayvan. Bu fare modeli CI kullanıcılar için konu ile ilgili olurdu genetik ve nörobiyolojik mekanizmaları incelemek için güçlü bir fırsat sağlar.

Introduction

Koklear implant (CIS) İşitme duygusu ağır ve derin işitme kaybı kişilere sağlayabilir elektronik aygıtlardır. Bu doğrudan işitme uyarmak için cerrahi olarak iç kulak koklea içinde implante elektrotlar kullanılır. Bugüne kadar CI en başarılı duyusal protez ve fazla 600.000 kişi dünya çapında1yardımcı oldu. Ancak, cihaz eksiklikleri vardır. İlk olarak, aygıt tarafından sağlanan yararları büyük ölçüde alıcılar arasında değişir. İkinci olarak, gürültülü ortamlarda ve müzik konuşma hala kötü algılanan çoğu CI Kullanıcı tarafından.

Uzun yıllar boyunca, hayvan modelleri CI araştırma bu konuları daha iyi anlamak için ve güvenlik ve cihazların etkinliğini sürekli iyileştirmek için kullanılmıştır. Modelleri çeşitli olaylar, CI implantasyon2, aşağıdaki yer alan beyin plastik değişiklikler gibi değerli fikir verdik kalan işitme3ve biyofiziksel özellikleri korumak için gen tedavisi uygulayarak etkisini elektrikle siniri4, birçok diğer örnekler arasında teşvik.

Fareler güçlü model organizma sağırlık genetik modellerini büyük durumu nedeniyle değildir. Diğer avantajı yeteneği fare genom işlemek için içerir (örneğin, CRISPR-Cas sistemi üzerinden), kullanmak için fırsat mekanizmaları, özellikle de beyin, yüksek üreme hızı, hızlı bir gelişim eğitim teknikleri Imaging gelişmiş ve kolay yetiştirme ve işleme. CI ameliyatları farelerde performans ana teknik sorunları koklea küçük boyutu ve büyük stapedial arter (SA) varlığı vardır. SA genellikle insanlarda embriyonik gelişim sırasında kaldırılır, ancak hayatı, kemirgenler, fare, sıçan ve gerbils dahil olmak üzere bir dizi boyunca devam ederse. SA koklea erişim için sadelik ve cerrahi riski artırır yuvarlak pencere niş altında çalışır.

Önceki çalışmalar fareler5,6,7' CI implantasyon fizibilite göstermiştir. Irving vd. kronik intracochlear elektriksel stimülasyon en fazla bir ay için elde edilebilir gösterdi. Akut uyarılması da gerçekleştirildi ancak kayıtları değil sunuldu. Onlar stapedial arter doldurarak işitme eşiği veya sarmal ganglion nöronların sayısı üzerinde önemli bir etkisi vardı ve aminoglikosite paromisin, bir ototoksik ilaç topikal uygulama etkili bir sağır edici işlemi olduğunu gösterdi Fareler5. Soken vd. fare koklea yuvarlak pencereden daha iyi işitme durumu6korumak için değiştirilmiş bir dorsal yaklaşım nitelendirdi. Ekleme bir platin-iridyum tel önemli kalıntı işitme 28 dB (ABR) eşiğinde bir artan İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ile gözlenmiştir. Otoacoustic emisyon (OAE) büyük ABR eşik vardiya6ile hayvanlarda kaybedildi. Mistry vd., elektrik stimülasyon7yokluğunda implantasyon işlevsel ve histopatolojik etkileri test. Rağmen işitme farelerde 3 ve 6 ay-eski implante düşük frekanslarda korundu, implantasyon fibrozis gibi doku implant etrafında ve çevresinde bullostomy7osteoneogenesis sonuçlandı.

Kısacası, farelerde dışında üç çalışmalar BDT Tarih, tek CI uyarım fonksiyonel kaydını gösterir. Irving ve arkadaşları hem akut ve kronik eABR kayıtları yapılır ama yalnızca veri kronik CI uyarım5gösterdi. Ancak, kronik modeli Irving vd tarafından geliştirilen tam implante edilebilir bir aygıt ile teknik olarak zordur. Akut CI uyarım, hem daha az zor ve daha hızlı, benzer sonuçlar elde edebilirsiniz Eğer henüz bilinmemektedir.

CIS artık işitme cihazları yarar ciddi ve derin işitme kaybı olan kişiler tarafından kullanılır. CI kullanıcılar için hayvan modelleri bu nedenle zaman normalde hayvanlar kullanılan işitme sağır edici bir yordam içermelidir. İşitme hayvanlar gerekirse mi çarpışacağız bir başka bir sağır veya işitme koklea elektriksel stimülasyon farklı sinirsel tepkiler4,8,9,10,11, üreten nedendir 12. bir sağır koklea elektriksel stimülasyon doğrudan işitsel sinir lifleri etkinleştirir ve bir electroneural yanıt (α) oluşturur. Kısa gecikme süresi ve küçük bir dinamik alan çevre8,10ile karakterizedir. Öte yandan, elektrik stimülasyon işitme koklea saç hücreleri uzun gecikmeleri ve daha geniş dinamik alan4,11ile karakterize bir electrophonic tepki (β) heyecanlandırıyor. Electrophonic yanıt sinir lifleri normal uyarma için iç saç hücreleri, dış saç hücrelerinin elektriksel olarak bağlı kasılma ve seyahat eden bir dalga4nesil tarafından atfedilir. Electroneural ve electrophonic yanıt da merkezi sinir sistemi9iki farklı etkinlik şekillerindeki neden. Sato ve ark. orta nöronlar implante CI eskiden şiling şimdi domuz bir önce ve sonra electrophonic katkı ortadan kaldırır paromisin ile kulakları sağır kaydetti. Onlar oranı düzeyinde işlev eğimini dik ve yüksek deafened durumda işitme durumu9' a göre oranları ateş gösterdi. Bu nedenle, belirtilen araştırma soru bağlı olarak, ayrı electrophonic ve electroneural yanıt işitme elektrik stimülasyon üzerine sağır edici dahil etmeyi düşünün önemlidir.

Burada, bir fare bir elektrot dizide koklear implantasyon yanı sıra elektrikle uyarılmış İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (eABR) ile intracochlear elektrik stimülasyon ve fonksiyonel kayıt ve akut sağır edici yordamı açıklar.

Protocol

Tüm yordamları, İsviçre Basel Üniversitesi, hayvan bakımı ve yönergelere göre yapılmıştır. Kanton Basel, İsviçre'nin veterinerlik ofisi tarafından lisanslı.

Not: 8-12 hafta (ağırlığı 20-30 g), yaşlı C57BL/6 yetişkin fareler bu çalışmada kullanılmıştır.
Sol kulak deneysel kulak kullanılır. Sağ kulak içi hayvan bir denetimi olarak hizmet vermektedir ve cerrahi olarak değiştirilmiş değil.

1. ameliyat öncesi yordamları

  1. Ketamin/xylazine (80 mg/kg ketamin, 16 mg/kg xylazine, IP, 10 μL/g vücut ağırlığı enjekte ses) intra periton (IP) enjeksiyon yolu ile ameliyat öncesi hayvan 30 dk uyuşturan.
    1. Anestezi gerekli, bir pozitif pedal ve palpebral (ayak-tutam) refleks ve bıyık, hareketin ketamin (45 mg/kg, 10 μL/g vücut ağırlığı enjekte ı.p.) daha düşük bir doz tarafından karar gibi ilave. Ajanlar ve doz rejimler kurumsal yönergeleri yerine.
      Notlar: genel olarak, bu ajan ve doz rejimi ile her 45-60 dk bir enjeksiyon hayvan gerekir. Kapatma implante elektrot dizi çevresinde ilk kesi ortalama süre genellikle 1-1,5 saat var.
  2. Normal solunum hızı ve ayak-çimdik refleksleri eksikliği ile işaretlenmiş hayvan tam sedasyon için kontrol edin. Anestezi tutması.
  3. Kapalı çevrim ısıtma yastığı ile 36.6 ° C'de hayvanın vücut ısısını korumak. Korneanın kurutma önlemek için göz merhem uygulamak. Bu aynı zamanda gürültü recoding için ekleyebilirsiniz hayvanın göz kırpma refleksi bastırır.
  4. Subkutan Enjeksiyon (SC) bupivacaine/lidokain ile yerel analjezik yönetmek (0.1 mg/mL bupivacaine ve 0.4 mg/mL lidokain, 0.1 mL s.c. yönetilen) cerrahi herhangi bir rahatsızlık en aza indirmek için amaçlanan kesi hattı boyunca. Ajanlar ve doz rejimler kurumsal yönergeleri yerine.
  5. Muscarinic antagonisti atropin yönetmek (atropinesulfate amino, 0.1 mg/mL, 20 μL yönetilen s.c., PBS içinde çözünmüş) ve boyun ve mukus salgısı azaltmak için nefes kolaylaştırmak için. Ajanlar ve doz rejimler kurumsal yönergeleri yerine.

2. önceden sağır edici akustik İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (aABR)

Not: aABR işitme önce ve sonra sağır edici durumunu ölçmek için kullanılır. Test sol kulak ve ses yalıtımlı bir elektriksel olarak korumalı kulübesinde gerçekleştirilir. Test etmek ve daha sonra sağ elini kullanan biri için sol kulak implant öneririz. 13,14' te farelerde ABR hakkında daha fazla bilgi bulunabilir. Tucker Davis teknolojileri (TDT) donanım ve yazılım (BioSig) ABR kaydetmek için kullanılır ancak diğer sistemleri kullanılabilir.

  1. Ipsilateral (sol) kulak ABR yanıtından yalıtmak için akustik köpük ile kontralateral (sağ) kulak engelleyin. 1 mL şırıngada köpük koymak ve köpük ile tüm belgili tanımlık kulak kanal karşılamak için fare sağ kulak kanalı içine enjekte etmek (0,1-0,2 mL köpük). Böylece köpük ta kulak kanalı içine alır şırınga mühürler yakından kulak için emin olun.
  2. Sol kulak 10 cm hoparlör yerleştirin.
    Not: Bu kurulum için hoparlör refefence15dakika içinde açıklandığı gibi bir PCB mikrofon kullanılarak kalibre.
  3. ABR elektrotlar % 70 etanol çözüm ile temizleyin. Derinin altında elektrotlar yer: aktif izdüşümü, (Ch1) başvuru (-) Ipsilateral kulak pinna ve zemin arka bacak (Şekil 1).
  4. Kafa-sahne ve ön amfi işitsel işlemci optik fiber bağlantı noktası üzerinden bağlayın.
  5. Empedans aktif ve referans elektrot kontrol edin.
    1. Empedans 3 Ohm ise, onları yeniden düzenlemek ve yeniden ölçüm çekmek. Elektrotlar aynı empedans olduğunda en iyi kayıtları elde edilir. Ses geçirmez kabin kapatın.
  6. Tıklayın stimülasyon sunmak ve ABR ile karmaşık işitsel oluşum ve yazılım ücretsiz alan koşuldaki kaydedin. Yazılım tıklayın uyarıcı standartlaştırmak: 0.1 ms tek kanallı monophasic tıklama 21 Hz'de; sunulmaktadır Düzey 90 dB SPL 10 dB SPL 10 dB adımda azalır tıklatın; 10 ms pencere kayıt. 512 yanıt her dB düzeyinde toplam ortalama.
  7. 2.000 Hz kurar filtre ve 300 Hz yüksek geçiren filtrenin çevrimdışı bir ısmarlama Matlab komut dosyası kullanarak kayıt gürültüyü azaltmak için geçerlidir.
  8. ABR eşik en düşük dB düzeyi ile tanınabilir ABR dalga yanıt (Şekil 2, Şekil 3) olarak belirleyin.

3. cerrahi

Not: Kullanılan tipik aletler makas, neşter, düz veya eğimli ipuçları, bir doku Retraktörü araç, birkaç emme takozlar ve absorbe kağıt puan metalik forseps çifti içerir. Ameliyat sol kulaðýnýzda gerçekleştirilir.

  1. Fare sağ yan koymak. Servikal vertebra üzerinde aşırı yüksek stres kaçının. Vücuttaki solunum yolları açık tutmak için düz tutmak için emin olun.
  2. Kürk bir makas ile sol kulağının arkasında kes (veya tıraş makinesi ile tıraş) cilt ortaya çıkarmak için. Cilt % 70 etanol çözüm ve betadin (povidone/iyot) ile sterilize.
  3. (16 x) mikroskobik büyütme altında neşteri ile 1-1,5 cm sonrası kulak çevresi kesi yapmak.
  4. Daha yüksek mikroskobik büyütme (25 x) geçin.
  5. Değişken kalınlığı olabilir, subkutan yağ katmanı yoluyla künt diseksiyon forseps ile gerçekleştirin.
    Not: Dış juguler ven bu alanı olarak dissekan dikkatli olun. Bu yapı aşırı kanama zarar verebilir.
  6. Tympanic bulla kapaklarini ortaya çıkarmak için boyun kas geri çek. Yüz sinir işitsel bulla tanımlaması yardım etmek için bir anahtar anatomik dönüm noktası kullanın. Yüz sinir boyun kas arka/dorsal kenarında tamamladı ve rostrally kulak kanalı pinna doğru çalışır. Yavaşça kendi kendine istinat Retraktörü aracı bulla (Şekil 4) erişimi kolaylaştırmak için belgili tanımlık kesme yerleştirin.
  7. Ridge bulla ve mastoid proses arasında açık görselleştirme izin vermek için bulla medio dorsal alan örten doku kaldırın.
  8. Bulla işlemek ve ridge (kemik bu tarafta daha ince) arka-çift tarafında bir delik (bullostomy) açmak için 30 G iğne yavaşça döndürün. Alternatif olarak, bir diş cerrahi matkap kullanmak.
    Not: Bu ve aşağıdaki adımları daha yüksek mikroskobik büyütme (40 x) ile tercih Eğer yapılabilir. Ayrıca, gerekirse mikroskop konumunu değiştirin. Orta kulak boşluğu cerrahi görünümünü en üst düzeye çıkarmak önemlidir.
  9. Bullostomy küçük kemik parçaları orta kulak boşluğu ortaya çıkarmak için ince uçlu forseps kullanarak pinching tarafından genişletmek. Yuvarlak pencere niş kemik örten temizlenene kadar bullostomy dorsally mastoid süreci doğru genişletir. Stapedial arter, şahdamarını dalı yuvarlak pencere niş ventral çalışır.
    1. Aşırı kanama ölümcül olabilir gibi gemi zarar vermemeye dikkat et. Küçük Kenar taşmaları spongostan iç kulak boşluğunda küçük bir parça basarak durdurulabilir.
    2. Bullostomy üzengi, oval pencereye bağlı orta kulak kemik görselleştirmek için ön çift yöne doğru genişletir.
  10. Üzengi forseps ile oval pencere ortaya çıkarmak için kaldırın.

4. yuvarlak pencere uygulaması ototoksik Aracısı

  1. Yavaşça körelmenin 30 G iğne kullanarak yuvarlak pencere ve oval pencere membran sorgulamaktı. O perilymph ishal dışarı kontrol edin.
  2. Yavaş yavaş % 0.05 ağırlık/hacim paromisin oval pencereden PBS (pH 7.4 düzeltilmiş) içinde çözünmüş sıvı. Sıvı yuvarlak pencereden dışarı floş. Yuvarlak pencere üzerinde aynı işlemi tekrarlayın. Pencere kemik yapıları sıvı için kullanılan iğne ile zarar vermemeye dikkat et.
  3. Küçük bir parça (1 mm2) paromisin yuvarlak pencere ve oval pencere niş içinde batırılmış spongostan yerleştirin.
  4. Retraktörü aracı kaldırmak belgili tanımlık kesme kapatın ve 30 dk bekleyin.

5. sonrası sağır edici akustik ABR

  1. Kayıt aABR benzer bir şekilde (adım 2.2-2.8) sağır edici gibi önce (Şekil 2b, Şekil 3).

6. CI elektrot dizi ekleme

Not: İntracochlear elektrot dizi dört platin bantları (Ø0.2 mm) bir silikon tüp (Şekil 5) korumalı platin/iridum parilen izole edilmiş tel ile oluşur.

  1. Retraktörü aracın bulla yeniden erişmek için belgili tanımlık kesme getirin.
  2. 4th platin yüzük sadece yuvarlak pencere içinde bulunduğu yuvarlak pencere (scala tympani) bir derinlikte elektrot dizi takın. Bu ~ 2 mm, ~ 30 kHz16yaşında bir intracochlear konumuna karşılık gelen bir ekleme derinlik verir.
  3. Bulla içinde kurşun tel bobin ve tel bulla yukarıda doku yapıştırıcı. Tel sarma deneyi boyunca yerde dizi tutmaya yardımcı olur.
  4. Dikkatle Retraktörü kaldırma ve ekleme doku yapıştırıcı ile kapatın.
  5. Küçük bir insizyon attım (0.5 mm) boynundan nerede arasındaki çizgi dik olun etkin ve başvuru ABR elektrotlar doku makas kullanarak. Subkutan cebinde platin yerden giden topu yerleştirin ve küçük kesi ile doku yapıştırıcı (Şekil 6) kapatın.
  6. Elektrot dizi kurulu hayvan Stimülatörü platforma bağlayın.

7. elektrik İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (eABR)

Not: Bir hayvan Stimülatörü platformu (ASP) elektrikle elektrot dizi uyarmak için kullanılır. Diğer akım kaynakları ve yazılım sistemleri kullanılabilir.

  1. ABR elektrotlar olarak (adım 2.3-2.5) önce (Şekil 6) yer.
  2. ASP yazılımını açın ve elektrik darbe stimülasyon paradigma tanımlayın. 50 μs/faz ile şarj dengeli bifazik bakliyat kullandığımız ve 10 μs 23.3 Hz (pps) sunulan boşluğu Interphase. Elektrik stimülasyon monopolar elektrot yapılandırmasındaki mevcut seviyeleri artan ile teslim edilir. Toplam 400 tepkilerin geçerli her düzeyde ortalama.
  3. Elektrik darbe trenler sunmak ve kayıt çatışmaya eABR yanıt TDT headstage üzerinden sürekli olarak, ön amfi ve işitsel işlemci.
  4. Arsa ve ısmarlama matlab komut dosyası (Şekil 7) ile eABR veri analiz. Komut dosyası ve bir kayıt örneği ek temin edilmektedir.

8. deney sonu

  1. Deney sonunda, kurumsal esaslarına göre Hayvan ötenazi.
  2. Dikkatli bir şekilde açmak belgili tanımlık kesme ve implant kaldırın.
  3. Ultra-distile su doku enkaz kaldırmak 10 min için elektrot dizide solüsyon içeren temizleyicide.
    Not: İmplant birkaç kez silinse, sağlam ve düzgün yürütülmesi elektrotlar. Bunu denetlemek için dizi kuru olduğunda bir multimetre ile elektrot empedans ölçmek.
  4. Elektrot dizi kuru bir yerde muhafaza ediniz.

Representative Results

Bu çalışmada akut CI uyarım deafened Mouse için güvenilir bir model tanımlamak için yapıldı. Öncesi ve ameliyat sonrası işitme eşikleri sağır edici yordamı işlevsel bir okuma görev yaptı. Topikal uygulama % 0.05 paromisin oval ve yuvarlak penceresinde anlamlı bir tıklama uyarılmış işitme eşikleri 46 dB ± 6 artış (öncesi vs sonrası paromisin: 30,0 dB ± 3.8 vs 75,7 dB ± 3.7, p = 0,0003, eşleştirilmiş t-testi, n = 7) (Şekil 3). Fare büyüklüğünde elektrot dizi bundan sonra yuvarlak pencere (4 rakam, Şekil 5) eklenir. Elektrikli bir intracochlear elektrot simülasyonu güvenilir eABR aktivite oluşturabilir. (Şekil 7). Bazı durumlarda, CI uyarım yüz sinir aktif ve ya kısa ya da uzun gecikme süresi ile yüksek genlik dalgası (Şekil 8A ve resim 8B, sırasıyla). Kısa gecikme süresi yanıt hızlı amplifikasyon dalga IV yaklaşık 3 ms tarafından karakterize edildi ve yüz sinir doğrudan bir yanıt olması muhtemeldir. Uzun gecikme süresi yanıt yaklaşık 5-6 ms ortaya çıktı ve dolaylı olarak yüz sinir tarafından uyarılmış işitsel kas (myogenic) yanıt olması muhtemeldir. Yüz sinir yanıt-e doğru hayvan çalışmaları edebiyat nadiren ihbar ama insan CI kullanıcılar17,18,19' iyi bilinen bir komplikasyondur. İçinde Şekil 8, yüz sinir stimülasyonu çıktı geçerli görece orta düzeyde (150-200 μA) ve iki farklı hayvanlarda. Diğer durumlarda, her iki yanıt (gösterilmez) çok yüksek geçerli düzeyde aynı hayvan ortaya çıkabilir. Biz yüz sinir stimülasyonu görünümünü altındaki düzeyler geçerli düzeye sınırlama öneririz.

Figure 1
Şekil 1: işitsel beyin sapı yanıt (ABR) Kur. Deri altı elektrotlar köşe (aktif/Kanal 1 [Ch1]), Ipsilateral (başvuru [Ref]) kulak arkasında ve imzalat fare arka bacak (zemin [Gnd]) yerleştirilir. Elektrot sinyalleri güçlendirilmiş ve bir TDT sistemi tarafından kaydedildi. Akustik ve elektrik stimülasyon sunulmaktadır bir mikrofon ve bir hayvan Stimülatörü platformu ile anılan sıraya göre. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Şekil 2: temsilcisi aABR dalgalar önce ve sonra % 0.05 paromisin ile sağır edici stimülasyon vahşi tipi fareden tıklatmaya. (A) normal işitme aABR desen-V ve düşük işitme eşiği, burada 30 dB SPL (ok) etiketli dalgaları ile karakterizedir. (B) deafened aABR desen bir artan işitme eşiği, burada 70 dB SPL (ok) gösterir. Dalgalar daha uzun bir gecikme süresi ve daha fazla Zamansal değişimi var. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3: aABR eşik önce ve sağır edici sonra. Paromisin uygulanması önemli ölçüde aABR eşikleri arttı 46 dB ± 6. Öncesi vs sonrası paromisin: 30,0 dB ± 3.8 vs 75,7 dB ± 3.7, p = 0,0003, eşleştirilmiş t-testi, n = 7. Standart hata anlamına gelir hatalardır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4: ameliyat. İşitsel bulla(a)maruz kalma. Bullostomy olduğunu tympanic bulla (Siyah noktalı çizgi) üzerinde sırt boyunca (beyaz noktalı çember) gerçekleştirilen. (B) bullostomy yuvarlak pencere, stapedial arter ve oval pencere görselleştirme sağlar. Paromisin olduğunu nazikçe oval pencere, sonra yuvarlak pencere ilk yoluyla temizlendi. (C) elektrot dizisi 4th elektrot sadece yuvarlak pencere niş içinde yer alan kadar eklenir. Elektrot tel bulla içinde belgili tanımlık kesme kapatılmadan önce dizinin tutmak için bağlamışsın. CN VII kranial sinir VII (yüz sinir), OW = = oval pencere, RW pencere, SA = stapedial arter, SCM = boyun kas, TB = tympanic bulla =. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5: fare koklear implant. (A) intracochlear elektrot dizi oluşur bir çapı d0.4 mm aralıklarla aralıklı dört platin Grup: 0 [İpucu] (d 0.21 =), 1 (d 0,23 =), 2 (d = 0,25), 3 (d = 0,27). Elektroda 0.2 mm genişliğidir. Dört platin/iridyum (90/10) parilen İzoleli teller bir silikon tüp içinde korunuyor. (B) büyütme elektrot dizi uç (kırmızı noktalı kare). Elektrot dizi ve platin başvuru topu bir baskı kartına bağlanır. Ölçek çubuğu 1 mm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6: elektriksel olarak uyarılmış ABR (eABR) Kur. CI platin yerden giden topu (Gnd, kırmızı) ve boyun fare subkutan bir cebinde yerleştirilir. Etkin (izdüşümü, Ch1(+)) ve Referans (Ref (-) Ipsilateral kulakta) ABR elektrotlar arasında en iyi eABR yanıt elde etmek için elektrot dizi ve zemin arasındaki çizgi dikey çizgidir. EABR zemin elektrot (Gnd, siyah) arka bacağından yerleştirilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7: temsilcisi eABR dalgalar CI uyarım deafened Mouse için. Bifazik darbe tren elektrot #1 23.3 Hz (pps) 400 yineleyerek, monopolar yapılandırma için sunulmuştur. Bir çekim gücü düzeyi 0-175 μA 25 μA adım (bkz. Adım 7.2 ayrıntılarda stimülasyon) gösterilir. Romen rakamları eABR dalga numarasını gösterir. Dalga genlikleri ve gecikme süresi artırmak ve azaltmak, sırasıyla, giderek artan bir geçerli düzeyi. Bu örnekte, wave II ortaya çıktı yaklaşık 1 ms, dalga III yaklaşık 2 ms, dalga IV çevresinde 3 ms, dalga V yaklaşık 4 ms. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 8
Şekil 8: yüz sinir stimülasyonu örneği. Bazı durumlarda, CI uyarım yüz sinir etkinleştirmek ve bir kısa gecikme süresi (A) (ok) ile doğrudan yanıt ya da daha uzun gecikme süresi (B) (ok) ile dolaylı yanıt çağrıştırıyor. Gösterilen örnekleri iki CI implante hayvanlardan olan 0-300 kullanarak bifazik darbe tren ile uyarılan μA 50 μA içinde (bkz. Adım 7.2 ayrıntılarda stimülasyon) adımlar. Romen rakamları eABR dalga numaralarını gösterir. * kırpma amplifikatör doygunluk nedeniyle eABR dalgasının gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Discussion

Hiçbir rakip mali çıkarlarının. Yazarlar ifşa gerek yok.

Disclosures

Koklear implant hayvan modelleri elektrik stimülasyonu ile kalıcı sensorinöral işitme kaybı tedavisinde teknolojik üsler bilgisine ilerletebilirsiniz. Bu çalışmada akut sağır edici ve fareler hem de işlevsel değerlendirme İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ile bir elektrot dizinin koklear implantasyon için cerrahi bir Protokolü sunar.

Acknowledgements

Yazarlar Pierre Stahl, Oticon tıp, Nice, Fransa, belgili tanımlık hayvan stimülasyon Platform ve tavsiye stimülasyon paradigmalar ve James B. Fallon ve Andrew K. akıllı biyonik Enstitüsü'nden, Melbourne, Avustralya, cerrahi tavsiye için verdiğiniz için teşekkür ederiz istiyorum . Bu eser İsviçre Ulusal Bilim Vakfı (ERC transfer grant T.R.B. için) bir hibe tarafından desteklenmiştir.

Materials

< güçlü > Donanım< / güçlü >
Ses geçirmez kabinIAC Akustik, Winchester, İngiltereMac-2 Muhafaza RF Korumalı Kutu 2A
MF1 HoparlörTucker Davis Technologies (TDT), FL, ABD
PCB mikrofonPCB Piezotronics, Inc, NY, ABDModel 378C01
Düşük empedanslı sahneTDT, FL, ABDRA4LI
Medusa ön amplifikatörTDT, FL, ABDRA4PA
RZ6 işitsel işlemciTDT, FL, ABD
Hayvan Stimülatör PlatformuASP, Oticon Medikal, Nice, Fransa
MultimetreFluks # 115
< güçlü > Cerrahi ekipman< / güçlü>
Kapalı döngü ısıtma yastığıFHC, Inc. ME, ABD
Göz merhemiAlcon, CHLacrinorm Augengel
Akustik köpükOtoform Ak, Dreve Otoplastik GmbH # 464
Tek kullanımlık subdermal iğne elektrotlarıHorizon, Rochester Electro-Medical Inc.S83018-R9, 27G
Kendinden tutucu ekartör aleti (Mini Collibri Ekartör)Güzel Bilim Araçları#17000-01
Emme takozlarıAgnthos, SE#42-886-460
Emilebilir kağıt ucu (Orta)WPI, FL, ABD#504182
İntrakoklear elektrot dizisiBiyonik Enstitüsü, Melbourne, Avustralya4 kanallı
Spongostan StandartFerrosan Tıbbi Cihazlar#MS0002
Doku tutkalı. Loctite 4161 SuperbondHenkelParça No 19743
Hayvan Stimülatörü Platformu (ASP)Oticon Medical, Nice, Fransa
İlaçlar/kimyasallar
Ketamin (Narketan)Provet AG, CH100mg/mL, #VQ_320265
Ksilazin (Rompun)Provet AG, CHInj Diss %2, # 1315
BupivakainÖzeti, CHBupivacain Sintetica inj Diss% 0.5
Atropin (Atropinsülfat Amino) Amino AG, CH1 mg / mL
Betadin (Povidon / iyot) Provedik, CH
Neomisin (Neomisin trisülfat tuzu) SigmaN1876-25G, Lot # WXBB7516V
< güçlü > Yazılım< / güçlü>
BioSigRZTDT, FL, ABD
MatlabMathWorks, MA, ABD
ASP yazılımıOticon Medikal, Nice, Fransa

References

  1. The-Ear-Foundation. . Cochlear Implants Update. , (2018).
  2. Fallon, J. B., Irvine, D. R. F., Shepherd, R. K. Cochlear Implants and Brain Plasticity. Hearing Research. 238 (1-2), 110-111 (2008).
  3. Pfingst, B. E., et al. Neurotrophin Gene Therapy in Deafened Ears with Cochlear Implants: Long-term Effects on Nerve Survival and Functional Measures. Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 18 (6), 731-750 (2017).
  4. Miller, C. A., et al. Electrical excitation of the acoustically sensitive auditory nerve: single-fiber responses to electric pulse trains. Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 7 (3), 195-210 (2006).
  5. Irving, S., et al. Cochlear implantation for chronic electrical stimulation in the mouse. Hearing Research. 306, 37-45 (2013).
  6. Soken, H., et al. Mouse cochleostomy: a minimally invasive dorsal approach for modeling cochlear implantation. Laryngoscope. 123 (12), E109-E115 (2013).
  7. Mistry, N., Nolan, L. S., Saeed, S. R., Forge, A., Taylor, R. R. Cochlear implantation in the mouse via the round window: effects of array insertion. Hearing Research. 312, 81-90 (2014).
  8. Hartmann, R., Topp, G., Klinke, R. Discharge patterns of cat primary auditory fibers with electrical stimulation of the cochlea. Hearing Research. 13 (1), 47-62 (1984).
  9. Sato, M., Baumhoff, P., Kral, A. Cochlear Implant Stimulation of a Hearing Ear Generates Separate Electrophonic and Electroneural Responses. The Journal of Neuroscience. 36 (1), 54-64 (2016).
  10. Pfingst, B. E., Spelman, F. A., Sutton, D. Operating ranges for cochlear implants. Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 89 (2), (1980).
  11. Miller, C. A., Hu, N., Zhang, F., Robinson, B. K., Abbas, P. J. Changes across time in the temporal responses of auditory nerve fibers stimulated by electric pulse trains. Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 9 (1), 122-137 (2008).
  12. Shepherd, R. K., Javel, E. Electrical stimulation of the auditory nerve. I. Correlation of physiological responses with cochlear status. Hearing Research. 108 (1-2), 112-144 (1997).
  13. Akil, O., Oursler, A. E., Fan, K., Lustig, L. R. Mouse Auditory Brainstem Response Testing. Bio Protocol. 6 (6), (2016).
  14. Willott, J. F. Measurement of the auditory brainstem response (ABR) to study auditory sensitivity in mice. Current Protocols in Neuroscience. Chapter 8 (Unit 8.21B. , (2006).
  15. TDT. . ABR User Guide: A Guide to ABR Testing with the System 3 RZ6. , (2017).
  16. Muller, M., von Hunerbein, K., Hoidis, S., Smolders, J. W. A physiological place-frequency map of the cochlea in the CBA/J mouse. Hearing Research. 202 (1-2), 63-73 (2005).
  17. Cushing, S. L., Papsin, B. C., Gordon, K. A. Incidence and characteristics of facial nerve stimulation in children with cochlear implants. Laryngoscope. 116 (10), 1787-1791 (2006).
  18. Berrettini, S., Vito, D. A., Bruschini, L., Passetti, S., Forli, F. Facial nerve stimulation after cochlear implantation: our experience. Acta Otorhinolaryngologica Italica. 31 (1), 11-16 (2011).
  19. Hu, H., Kollmeier, B., Dietz, M. Reduction of stimulation coherent artifacts in electrically evoked auditory brainstem responses. Biomedical Signal Processing and Control. 21, 74-81 (2015).
  20. Wiegner, A., Wright, C. G., Vollmer, M. Multichannel cochlear implant for selective neuronal activation and chronic use in the free-moving Mongolian gerbil. Journal of Neuroscience Methods. 273, 40-54 (2016).
  21. Hessel, H., et al. Meriones unguiculatus (Gerbil) as an animal model for the ontogenetic cochlear implant research. American Journal of Otolaryngology. 18 (S21), (1997).
  22. Pinilla, M., Ramirez-Camacho, R., Jorge, E., Trinidad, A., Vergara, J. Ventral approach to the rat middle ear for otologic research. Otolaryngology Head Neck Surgery. 124 (5), 515-517 (2001).
  23. King, J., Shehu, I., Roland, J. T., Svirsky, M. A., Froemke, R. C. A physiological and behavioral system for hearing restoration with cochlear implants. Journal of Neurophysiology. 116 (2), 844-858 (2016).
  24. Lu, W., Xu, J., Shepherd, R. K. Cochlear implantation in rats: a new surgical approach. Hearing Research. 205 (1-2), 115-122 (2005).
  25. Poirrier, A. L., et al. Ototoxic drugs: difference in sensitivity between mice and guinea pigs. Toxicology Letters. 193 (1), 41-49 (2010).
  26. Wu, W. J., et al. Aminoglycoside ototoxicity in adult CBA, C57BL and BALB mice and the Sprague-Dawley rat. Hearing Research. 158 (1-2), 165-178 (2001).
  27. Taylor, R. R., Nevill, G., Forge, A. Rapid hair cell loss: a mouse model for cochlear lesions. Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 9 (1), 44-64 (2008).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission

Play Video

Koklear Implant ameliyatı ve elektriksel olarak uyarılmış işitsel beyin sapı yanıt kayıtları C57BL/6 farelerde
JoVE logo
Contact Us Recommend to Library
Research
  • JoVE Journal
  • JoVE Encyclopedia of Experiments
  • JoVE Visualize
Business
  • JoVE Business
Education
  • JoVE Core
  • JoVE Science Education
  • JoVE Lab Manual
  • JoVE Quizzes
Solutions
  • Authors
  • Teaching Faculty
  • Librarians
  • K12 Schools
About JoVE
  • Overview
  • Leadership
Others
  • JoVE Newsletters
  • JoVE Help Center
  • Blogs
  • Site Maps
Contact Us Recommend to Library
JoVE logo

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved

Privacy Terms of Use Policies
WeChat QR code