Kynurenine yolu (KP) neuroactive metabolitleri değişiklikler psikiyatrik hastalıklarda karıştığı. Bir değişmiş kynurenine yolu metabolizma vivo içinde Rodents fonksiyonel sonuçları araştıran yeni tedavi yaklaşımları aydınlatmak yardımcı olabilir. Geçerli protokol fareler bir akut kynurenine mücadelesine etkisini araştırmak için biyokimyasal ve davranışsal yaklaşımlar birleştirir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kynurenine ve Kynurenic asit yüksek performanslı sıvı kromatografi ölçüsü: Biyokimya biliş ve uyku sıçanlarda ilişkin
Bu makalede
Özet
Özet
Triptofan bozulma kynurenine yolu (KP) psikiyatrik bozukluklar karıştığı olmuştur. Özellikle, astrocyte elde edilen metaboliti kynurenic asit (KYNA), bir antagonisti her iki N-metil-d-aspartat (NMDA) ve α7 (α7nACh) nikotinik asetilkolin reseptörü, sağlık ve hastalığında bilişsel süreçlerde karıştığı olmuştur. Şizofreni hastalarının beynindeki KYNA düzeyleri yüksek olarak, bir arıza glutamatergic ve kolinerjik reseptörler nedensel bilişsel işlev bozukluğu için hastalığın psikopatoloji bir çekirdek etki alanı ile ilgili olabilir inanılıyor. KYNA şizofreni ile bireylerde pathophysiologically önemli bir rol oynayabilir. Kemirgen beyinde endojen KYNA doğrudan bioprecursor kynurenine hayvanlarla davranarak yükseltmek mümkündür ve preklinik çalışmalar sıçanlarda akut yükselmeler KYNA öğrenme ve bellek süreçlerinin etkisi olabilir göstermiştir. Geçerli protokol bu deneysel yaklaşım ayrıntılı olarak açıklar ve kan kynurenine düzeyleri ve beyin KYNA oluşumu, (yüksek performanslı sıvı kromatografi kullanarak) bir) bir biyokimyasal analiz birleştirir b) davranışsal soruşturma için test hipokampal bağımlı bağlamsal bellek (pasif kaçınma paradigma) ve c) bir değerlendirme uyku-uyanıklık davranış [telemetric kayıtları birleştirerek electroencephalogram (EEG) ve electromyogram (EMG) sinyalleri] sıçanlarda. Birlikte ele alındığında, yüksek KYNA, uyku ve biliş arasında bir ilişki okudu ve bu protokol ayrıntılı olarak kynurenine yükselme ve KYNA oluşumu içinde vivo sıçanlarda işlevi sonuçlarını anlamak için deneysel bir yaklaşım açıklar. Bu iletişim kuralı değişimleri gözden geçirmek elde edilen sonuçlar KP ve KYNA uyku ve biliş sağlık ve hastalık Birleşik Devletleri oransal önemli roller hizmet hipotez test edecek.
Giriş
KP esansiyel amino asit triptofan1yaklaşık % 95'i aşağılayıcı için sorumludur. Memeli beyninde astrocytes alınan kynurenine neuroactive küçük molekül KYNA öncelikle enzim kynurenine aminotransferaz (KAT) II2tarafından metabolize. KYNA bir antagonisti NMDA ve α7nACh reseptörleri beyin2,3,4, görür ve ayrıca aril hidrokarbon reseptör (AHR) ve G-protein de dahil olmak üzere reseptörlerinin sinyal hedefleri reseptör 35 (GPR35) birleştiğinde5 ,6. Deneysel hayvan yükselmeler K....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Deneysel Protokolümüze Maryland Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı Komitesi tarafından onaylanmış ve bakım ve kullanım Laboratuvar hayvanları için Ulusal Sağlık Enstitüleri'nın kılavuzu izledi.
Not: Yetişkin erkek Wistar rats (250-350 g) tüm deneylerde kullanılıyordu. Hayvanların ayrı tabur biyokimyasal analiz, Davranışsal deney ve uyku-uyanıklık kayıtları için kullanılmıştır. Hayvanlar bir ısı kontrollü tesis Maryland Psikiyatri Araştırma Merkezi'nde yer alan. Onlar ışıkları ile 12/12 h koyu döngüsü üzerinde zeitgeber zaman (ZT) 0 ZT 12 ışıkları tutuldu ve. Hayvanlar yiyecek ve su ad libitum erişim deneyler sırasında aldı. Te....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bir mayi kynurenine enjeksiyon beyin KYNA yükseltmek için bir yöntem olarak kullanımını doğrulamak için doku HPLC analiz gerçekleştirildi. Standart eğrileri (Şekil 1) ilişkili yazılım kullanarak ve doku örnekleri miktar için izin inşa edildi. Temsilcisi chromatograms kynurenine ve KYNA için Şekil 2' de sunulmuştur. Kynurenine 6 dk saklama teker gözlendi ve KYNA 11 dk bir tutma zaman vardı. KP dynamics gözlemlemek için 100 mg/kg k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bir güvenilir değerlendirilmesi KYNA beyin için bir periferik kynurenine yönetim sonra birleştirmek ve biyokimyasal ve fonksiyonel deneyler yorumlamak çok önemlidir. Burada, yeni kullanıcıların, plazma kynurenine ve beyin KYNA sıçan ölçmek için etkili yöntemler kurmak için izin verir ayrıntılı bir iletişim kuralı mevcut. Kynurenine plazma ölçüm doğru enjeksiyon doğruladı ve beyin de novo sentezinde metaboliti KYNA ölçümü onaylar. Shibata18, huzurunda tam olarak beyin nanomolar aralığındak.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu da çalışmanın kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01 NS102209) ve bir bağış Clare E. Forbes Trust tarafından finanse edildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Wistar sıçanları | Charles River Laboratories | yetişkin erkek, 250-350 g | |
| L-kinürenin sülfat | Sai Advantium | ||
| ReproSil-Pur C18 sütunu (4 mm x 150 mm) | Dr. Maisch GmbH | ||
| EZ Clips | Stoelting Co. | 59022 | |
| Montaj malzemeleri vidalar | PlasticsOne | 00-96 X 1/16 | |
| Emilmeyen | Sütürler MedRep Express | 699B | CP Tıbbi Monomid Siyah Naylon Sütürler, 4-0, P-3, 18", 12 |
| Emilebilir Sütür | KUTUSU Ethicon | J310H | 4-0 Kaplamalı Vicryl Violet 1X27 '' SH-1 |
| Diş Çimentosu | Çalma A.Ş. | 51458 | |
| Matkap Ucu | Çalma A.Ş. | 514551 | 0,45 mm |
| < güçlü > İsim< / güçlü > | < güçlü > Şirket< > < | güçlü > Katalog Numarası< / güçlü > | < güçlü > Yorumlar< / güçlü > |
| < güçlü >İttifak HPLC sistemi< / güçlü > | |||
| E2695 ayırma modülü | Sular | 176269503 | |
| 2475 floresan dedektörü | Sular | ||
| Sütun sonrası reaktif yöneticisi | Waters | 725000556 | |
| Lenovo bilgisayar | Waters | 668000249 | |
| Empower yazılımı | Waters | 176706100 | |
| Name< | strong>Company | strong> | Yorumlar |
| sıçan< / güçlü için pasif kaçınma kutusu > | |||
| Ekstra uzun MDF ses azaltma | kabini MedAssociates | ENV-018MD | İç: 22" (G) x 22" (Y) x 16" (D) |
| Merkez kanal modülatör mekik kutusu odası | MedAssociates | ENV-010MC | |
| Sıçan için paslanmaz çelik ızgara zemin | MedAssociates | ENV-010MB-GF | |
| Otomatik giyotin kapı | MedAssociates | ENV-010B-S | |
| Sıçan için hızlı bağlantı kesme mekiği ızgarası zemin demeti | MedAssociates | ENV-010MB-QD | |
| Uyaran ışığı, 1" beyaz lens, modüler panel üzerine monte edilmiş | MedAssociates | ENV-221M | |
| Sıçan odası için ses kontrollü Sonalert modülü | MedAssociates | ENV-223AM | |
| SmartCtrl 8 giriş/16 çıkış paketi | MedAssociates | DIG-716P2 | |
| Mekik kutuları için 8 Kanallı IR kontrolü | MedAssociates | ENV-253C | |
| Kızılötesi kaynak ve dedektör dizi şeritleri | MedAssociates | ENV-256 | |
| Masaüstü arayüz kabini, 120 V 60 Hz | MedAssociates | SG-6080C | |
| Çift aralıklı sabit akım caydırıcı stimülasyon modülü | MedAssociates | ENV-410B | |
| Katı hal ızgara zemin karıştırıcı modülü | MedAssociates | ENV-412 | |
| Çift A/B şok kontrol modülü | MedAssociates | ENV-415 | |
| 2' 3-Pin mini-molex uzatma | MedAssociates | SG-216A-2 | |
| 10' Şok çıkış kablosu, DB-9 M/F | MedAssociates | SG-219G-10 | |
| Mekik şok kontrol kablosu 15', 6 | MedAssociates | SG-219SA | |
| Küçük masa üstü dolap ve güç kaynağı, 120 V 60 Hz | MedAssociates | SG-6080D | |
| PCI arayüz paketi | MedAssociates | DIG-700P2-R2 | |
| Mekik kutusundan kaçınma yardımcı programı paketi | MedAssociates | SOF-700RA-7 | |
| Name | < güçlü > Şirket< / güçlü > | < güçlü > Katalog Numarası< / güçlü > | < güçlü > Yorumlar< / güçlü > |
| < güçlü > Uyku Uyanık İzleme Ekipmanları < / güçlü > | |||
| Ponehmah yazılımı | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | PNP-P3P-610 | |
| MX2 8 Kaynak Edinme arayüzü | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | PNM-P3P-MX204 | |
| Dell bilgisayar, Optiplex 7020, Windows 7, 64 bit | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | 271-0112-013 | |
| Dell 19" bilgisayar monitörü | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | 271-0113-001 | |
| Plastik kafesler için alıcılar, 8x | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | 272-6001-001 | |
| Cisco RV130 VPN yönlendirici | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | RV130 | |
| Matrix 2.0 | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | 271-0119-001 | |
| Ağ anahtarı | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | SG200-08P | |
| Neuroscore yazılımı | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | 271-0171-CFG | |
| İki biyopotansiyel kanallı verici, model TL11M2-F40-EET | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI) | 270-0134-001 |
Kaynaklar
- Leklem, J. E. Quantitative aspects of tryptophan metabolism in humans and other species: a review. The American Journal of Clinical Nutrition. 24 (6), 659-672 (1971).
- Pocivavsek, A., Notarangelo, F. M., Wu, H. Q., Bruno, J. P., Schwarcz, R. Astrocytes as Pharmacological Targets in the Treatment of Schizophrenia: Focus on Kynurenic Acid.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
