Burada, Medulla Spinalis Yaralanmalarında (SCI) bir fare modelinde klinik cilt basınç ülserleri (irin) ikna etmek için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Bu model ekran için önceden klinik çalışmalarda farklı therapeutics SCI hastaların şifa irin için kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Medulla Spinalis Yaralanmalarında sonra yatak yarası fare modeli
Bu makalede
Özet
Özet
Basınç ülserleri (irin) travmatik spinal kord yaralanması (SCI) komplikasyonlar zayıflatıcı yaygındır ve kemik çikintilari çevresinde Yumuşak dokularda meydana eğilimindedir. Orada ancak, az kontrollü deneysel ayarları hayvan modellerinde bağlamında Cilt yara iyileşmesi SCI etkisi hakkında bilinmektedir. Bu çalışmada, irin tam SCI bağlamında bir basit, non-invaziv, tekrarlanabilir ve klinik fare modeli sunulur. Yetişkin erkek fareler (Balb/c, 10 haftalık) depilated ve traş. Sonrası epilasyon (24 saat), fareler tabi laminektomi tam omurilik transeksiyon (T9-T10 omurga) tarafından takip için. Hemen sonra bir cilt kapağı fareler arkasında kaldırdı ve sonraki 12 h, böylece bir PU aşağıdaki gün içinde geliştirilen iskemik bir alan yaratmak için yerinde düzenlenen iki adet manyetik diskler arasında gözükeceksin. Yaralı alanları doku ödemi ve epidermal kaybolması 3 gün sonrası mıknatıs uygulama tarafından gösterdi. İrin kendiliğinden gelişmiş ve iyileşti. Şifa olduğunu, ancak, SCI farelerde daha yavaş karşılaştırıldığında yara bilm tersine, seviyenin oluşturulduğu sırada SCI fare denetlemek için şifa fark yara bilm seviyesinden oluşturulduğu sırada bilim ve denetim SCI fareler arasında görüldü Bu model deri PU geliştirme ve bu yaraların sarılmasına yardımcı olabilir tedavi yaklaşımları test olarak SCI sonra de şifa dinamiklerini incelemek için potansiyel olarak yararlı bir araçtır.
Giriş
Basınç ülserleri (irin) travmatik SCI1büyük ikincil komplikasyonlar vardır. İrin cilt ve/veya genellikle kemik çikintilari üzerinde iken hasta oturuyor veya1yatarken vücut ağırlığı konsantre nerede oluşur temel alınan dokular için yerelleştirilmiş yaralanmalar vardır. Cilt, yağ ve kas yerelleştirilmiş iskemi, doku iltihabı, mekanik hasar ve nekroz2,3gelişimine yol açar bu sabit basınç maruz kalır.
İrin gelişimi basınç ve kayma, yükleme süresi, cilt nem ve sıcaklık, yaralanma uzun ömürlü ve genel cilt hijyen büyüklüğü de dahil olmak üzere çeşitli yerel faktörlerden etkilenir. Genel fiziksel durumu, kemik ve kas dokusu morfoloji ve gücü4, hastanın yaşı, hematolojik önlemler, cinsiyet ve medeni durum, eğitim de dahil olmak üzere bile sosyo-ekonomik faktörler gibi bir rol sistemik etken de vardır, ve gelir4,5.
Önleme ve tedavi irin birikimi SCI hastalarda önemli sorunlar kalır. SCI hastaların irin vakaların, ~ 30-%40 60-%85, büyük olasılıkla zayıf skar dokusu ve koruyucu hissi1eksikliği nedeniyle re-oluşumu oranında ile geliştirmek. Böylece, irin genellikle SCI hastalar yeniden yatış için açar ve genel olarak sağlık sistemi5,6,7,8,9 önemli mali yük (%80 daha fazla SCI vs sadece) poz , 10.
Bizim bilgi en iyi şekilde, orada hiçbir çalışma yapılmıştır uygun hayvan modellerin eksikliği nedeniyle SCI PU iyileşme süreci üzerindeki etkisini araştırmak için kontrollü deneysel ayarlarında. Burada, PU deri bir tekrarlanabilir ve klinik fare modeli kullanılmıştır. Bu model PU başlangıçlı ve sonraki şifa dinamiklerini incelemek için aynı zamanda PU önlemek veya PU bilm bağlamında şifa geliştirmek için potansiyel tedavi yaklaşımları test etmek için kullanılabilir
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Rutgers Üniversitesi Kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir protokol uyarınca tüm işleme hayvan ve cerrahi girişimler yapıldı. Fareler standart diyet ve su ad libitum beslenen edildi.
1. cerrahi ve cerrahi olmayan aletler hazırlanması
- Bir otoklav içinde cerrahi ve cerrahi olmayan aletleri sterilize.
- Cerrahi ameliyat masasına % 70 etanol ile temiz ve sıcak bir Isıtma yastığı ile 37 ° c
- Isıtma yastığını ameliyat masasında yer ve steril cerrahi perdeler ile kapağı.
Not: Tüm yaşam yordamlar, "No Touch" teknik burada kısırlık korumak için kullanılır.
2. hayvan ve T9-T10 Spinal laminektomi gerçekleştirme hazırlanması
- Yetişkin (Balb/c) 10-hafta-yaşlı erkek fareler temin etmek. Anestezi %5 isoflurane ile başlayan bir oksijen tüpü kullanarak her hayvan teşvik ve yordamları kalanı için sedasyon korumak için 2-%3 azaltın.
- Tam anestezi bir kuyruk/pençe indüklenen çimdik duyusuna stimülasyon yanıt alabilme tarafından onaylayın.
- Saç patolojisi (kafa kuyruk) bir elektrik kesme makinesi ile tıraş ve geri kalan saç kaldırmak için depilatory krem (3 dk) uygulayın. Son olarak, su/ıslak fırçalayın çalışan patolojisi yıkama ve hayvanlar için onların kafes dönmek.
Not: Bu cilt ve cilt yaralama esnasında kimyasal kirlenme ek tahrişi önlemek gereklidir - Ertesi gün, cerrahi işlem sırasında kurumasını gözleri korumak ve sonra Cilt 3 alternatif hazırlıklar betadin fırçalayın ve % 70 etanol ile fırçalayın kornealar oftalmik merhem uygulamak.
- Neşterle, arkadaki T8-T12 vertebra düzeyinde orta çizgi boyunca bir cilt kesi (~1.0-1.5 cm) gerçekleştirin.
Not: Vertebra düzeyi T13 omur11,12' ye karşılık yüzen kaburga konumunu kullanarak omur T13 üzerinden geri sayım tarafından tanımlanır. - Cilt altı yağ dokusu paraspinal kas erişin ve sonra onları yavaş yavaş spinöz süreçleri ve lamina her iki tarafta ortaya çıkarmak için incelemek için temizleyin.
Not: Bu yordam çok dikkatli bir şekilde aşırı kanama veya spinal kord, bu noktada herhangi bir yaralanma önlemek için ne. - Bir laminektomi omurilik (T9-T10 omurga) hafifçe spinal lamina microdissecting forseps kullanarak soyulması tarafından ortaya çıkarmak için gerçekleştirin.
Not: Böylece aşırı omurilik yaralanma oluşturulmasını kolaylaştırmak için maruz laminektomi gerçekleştirin. Kontrol grubunda sadece laminektomi gerçekleştirilir.
3. performans T9-T10 tam Medulla Spinalis Yaralanmalarında
- Forseps kullanarak, omurga T8 ve Asansör yukarı omurilik eğriliği abartmayı güvenli.
- İyi makas kullanırken, omurilik sonuna kadar tam transeksiyon sağlamak için vertebral kanalın yere T9 ve T10 omur arasında bölüm.
- Cerrahi mikroskop altında tam transeksiyon gözlemleyerek sonra Subkutan yag bir parça omurilik cerrahi site kapatma önce ek koruma sağlamak üzere laminektomi site üzerinden uygulanır.
- Son olarak, yarayı kapatın ve dikiş paravertebral kaslar, yüzeysel fasya, sürekli dikiş kullanarak ve deri dikiş klipleri12kullanarak kapatın.
- Post-SCI, bağırsak hareketi izlemek ertesi gün; Ancak, idrar kesesi tarafından el ile mesane tahliye yönetin.
Not: Basso fare ölçek (BMS) gün 2 hindlimb fonksiyonel iyileşme sonrası-SCI ilerlemesini izlemek için kullanılan ve sonra haftalık, bkz: ek resim 111,12,13.
4. cilt basınç Ülseri tam SCI sonra indüksiyon
- SCI ameliyattan hemen sonra arkadaki Hayvan betadin ve % 70 alkol ile fırçalayın.
- Sakrum, çok küçük bir hacim (10 µL) eşit uzaklıkta yer ~0.5-1.0 cm apart, mıknatıs uygulama sitesi etrafında elips 25 G iğne kullanarak %0.125 bupivacaine çözüm yakınındaki dorsal cilt SCI sitenin altındaki bir PU için enjekte.
Not: SCI site yukarıda bir PU için servikal bölgenin yakınındaki dorsal cilt enjekte. - Yavaşça fare arkasındaki deri kat Asansör ve 2 manyetik disk arası (5 × 12 mm çap, 2.4 g, 3800 G Manyetik kuvvet) sandviç (şekil 1). 11 , 12
- Sonra hemen yerleştirildiği mıknatıs uygulaması, tek kafesleri için dönüş hayvanlar üzerine tam bilinç olana bir Isıtma yastığı (şekil 1) ele geçirdi.
- 12 h mıknatıs uygulamasının sonra hafifçe isoflurane hayvanla anestezi ve mıknatıslar kaldırın. PU ilk görünümünü kaydetmek için yara siteleri, bir fotoğraf çekmek (gün 0 saat üzerine gelin). Kurutma veya kontaminasyonu önlemek için şeffaf soyunma film (3 M) yarayla kapsar.
5. ameliyat sonrası hayvan bakımı, ötenazi ve Histoloji dokusu toplamalarında
- Ameliyattan hemen sonra 1 mL % 0,9 serum subkutan hidrasyon için hayvan enjekte.
- Subkutan buprenorfin-SR (1 mg/kg) hemen analjezi için enjekte et.
- Subkutan hayvan günlük Meloksikam (1 mg/kg) ve sülfadiyazin (3-7 gün için 50 mg/kg) ve iki kez günlük el ile mesane tahliye enjekte et.
- Tek kafeslerde hayvanlar koyun ve erişilebilir gıda sağlamak ve ad libitumsu. Fare tam SCI ile onların ön ayakları kullanılarak yürüyün ve gıda ve su herhangi bir sorun olmadan bir yaklaşım.
- Cerrahi klipleri SCI ameliyat sonrası 7 gün kaldırın.
- Bilim ve cilt yaralı sonra istediğiniz zaman noktalarda, hayvanlar ötenazi14travma yönergeler doğrultusunda CO2 inhalasyon (3-5 dk), tarafından ötenazi.
- Yaralı deri örnekleri toplamak, 24 h için % 10 formalin düzeltin ve sonra 4 ° C'de % 70 etanol kesit kadar saklayın.
- Doku işlemek için parafin içinde katıştırmak ve ince bir microtome bölümlerde (5 mikron) oluşturur. Hematoksilen ve Eozin (H & E) doku Morfoloji (şekil 3) görselleştirmek için leke. İmmünhistokimya çalışmaları (şekil 4) için uygun antikorlar Ki67 için kullanma bölümlerine leke (yayılması), CD31 (angiogenez) ve alfa-düz kas aktin (α-SMA) Kumar vd.12 ' açıklandığı gibi
Not: Görüntü analiz yazılımı görüntü özellikleri12ölçmek için kullanılabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu iletişim kuralı bir PU ayarı tam bilm kısa bir süre içinde oluşturur ( şekil 1' de gösterildiği gibi), tüm fare ile veya olmadan tam SCI mıknatıslar çok iyi, hangi orijinal konumlarını tam 12 h (rakamlar 1 c, 1 d, 1f, 1 h için kaldı tolere ). Bütün fareler normal doku (şekil 1e, 1 g, 1I) bir köprü ile ayrılmış iki dairesel yarası geliştirdi. İlk yaralama yanıt farelerde SCI (şekil 1e
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışmada protokolünü irin yara iyileşmesi üzerinde SCI etkisini değerlendirmek için bir roman deneysel modeli açıklar. Cilt irin iki 12 mm çapında disk mıknatıs SCI sayfanın altında veya üstünde ikisinden biri koymak bir dorsal cilt kat 12 h uygulanması ile indüklenen. Veriler SCI Cilt yara farelerde iyileşmesi aşağı yavaşlatır göstermektedir. Önemlisi, bu gözlemler özellikle cilt yaraları SCI innervasyon seviyesinin altında SCI seviyesinden yapılan yaralar olarak yapılmış ve böylece bu innervated kaldı, büyük ölçüde...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser kısmen Omurilik Araştırma (CSCR15IRG010), ABD Savunma Bakanlığı (SC160029) ve Yale bölümü, ameliyat Ohse araştırma hibe programı New Jersey Komisyonu tarafından desteklenmiştir. Sean o'Leary incelemelerinden Keck Merkezi işbirlikçi Neuroscience, Rutgers teknik destek için teşekkür ediyoruz.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Mıknatıslar | Master Magnetcs, Inc., Castle Rock, CO | CD14C | 3800 G Manyetik kuvvet Fareler |
| standart diyet | PMI Nutrition International, Brentwood, MO | Standart Gıda | |
| Pelet İzofluran | HENRY SCHEIN Hayvan Sağlığı | SKU 029405 | |
| ImageJ | NIH, Bethesda, MD | Görüntü Analiz Yazılımı | |
| BETADINE Cerrahi Ovma | HENRY SCHEIN Hayvan Sağlığı | ||
| Oftalmik Merhem | HENRY SCHEIN Hayvan Sağlığı | SKU 008897 | |
| NAIR-Saç Çıkarıcı Losyon | Kilise & Dwight Co., Inc. Princeton, NJ | ||
| ELOXIJECT (meloksikam) Enjeksiyonu | HENRY SCHEIN Hayvan Sağlığı | Stok kodu: 049755 | 5 mg/mL, 10 mL |
| Sefazolin Sodyum | HENRY SCHEIN Hayvan Sağlığı | Stok kodu 054846 | 1 g, 10 mL şişe |
| Buprenorfin-SR | ZooPharm, Windsor, CO | - | % |
| 0.9 Sodyum Klorür Enjeksiyonu USP | BRAUN, Irvine, CA | S8004-5384 | |
| 10 Nötr Tamponlu Formalin | VWR, Radnor, PA | 16004-130 | |
| BALB/C Erkek Fare | Charles River Lab., Wilmington, MA | 28 | |
| Steril Pamuk Uçlu Aplikatör | Püriten, Guilford, ME | SKU #: 25-806 | |
| Michel Sütür Klipsleri | Güzel Bilim Araçları (ABD) Inc., Foster City, CA | 12040-01 | |
| Cerrahi Sütür, ABD | Henry Schein Hayvan Sağlığı | 101-2636 |
Kaynaklar
- Rappl, L. M. Physiological changes in tissues denervated by spinal cord injury tissues and possible effects on wound healing. International Wound Journal. 5 (3), 435-444 (2008).
- Salcido, R., Popescu, A., Ahn, C. Animal models in pressure ulcer research. The Journal of Spinal Cord Medicine. 30 (2), 107-116 (2007).
- Mak, A. F., Zhang, M., Tam, E. W. Biomechanics of pressure ulcer in body tissues interacting with external forces during locomotion. Annual Review of Biomedical Engineering. 12, 29-53 (2010).
- National Pressure Ulcer Advisory Panel. Prevention and Treatment of Pressure Ulcers: Clinical Practice Guideline. , Cambridge Media. Osborne Park, Western Australia. (2014).
- Marin, J., Nixon, J., Gorecki, C. A systematic review of risk factors for the development and recurrence of pressure ulcers in people with spinal cord injuries. Spinal Cord. 51 (7), 522-527 (2013).
- Krause, J. S. Skin sores after spinal cord injury: relationship to life adjustment. Spinal Cord. 36 (1), 51-56 (1998).
- Redelings, M. D., Lee, N. E., Sorvillo, F. Pressure ulcers: more lethal than we thought? Advances in Skin & Wound. 18 (7), 367-372 (2005).
- Kruger, E. A., Pires, M., Ngann, Y., Sterling, M., Rubayi, S. Comprehensive management of pressure ulcers in spinal cord injury: current concept and future trends. The Journal of Spinal Cord Medicine. 36 (6), 572-585 (2013).
- Lala, D., Dumont, F. S., Leblond, J., Houghton, P. E., Noreau, L. Impact of pressure ulcers on individuals living with a spinal cord injury. Archives of Physical Medicine and Rehabilitation. 95 (15), 2312-2319 (2014).
- Li, C., DiPiro, N. D., Krause, J. A latent structural equation model of risk behaviors and pressure ulcer outcomes among people with spinal cord injury. Spinal Cord. 55 (6), 553-558 (2017).
- Kumar, S., Yarmush, M. L., Berthiaume, F. Impact of complete spinal cord injury on neovascularization and tissue granulation in mouse model of skin pressure ulcers. Journal of Neurotrauma. 34 (13), A72-A73 (2017).
- Kumar, S., Yarmush, M. L., Dash, B. C., Hsia, H. C., Berthiaume, F. Impact of complete spinal cord injury on healing of skin ulcers in mouse models. Journal of Neurotrauma. 35 (6), 815-824 (2018).
- Basso, D. M., Fisher, L. C., Anderson, A. J., Jakeman, L. B., McTigue, D. M., Popovich, P. G. Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains. Journal of Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).
- Leary, S., et al. AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, Illinois, USA. (2013).
- Stadler, I., Zhang, R. Y., Oskoui, P., Whittaker, M. S., Lanzafame, R. J. Development of a simple, noninvasive, clinically relevant model of pressure ulcers in the mouse. Journal of Investigative Surgery. 17 (4), 221-227 (2004).
- Peirce, S. M., Skalak, T. C., Rodeheaver, G. T. Ischemia-reperfusion injury in chronic pressure ulcer formation: a skin model in the rat. Wound Repair and Regeneration. 8 (1), 68-76 (2000).
- Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Surgical approaches to create murine models of human wound healing. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 969618-969625 (2011).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
