Yöntem makalesi

Salmonella spp. testi ile taranması için yüksek üretilen iş platformu /Shigella spp.

DOI:

10.3791/58200

⸱

7 Kasım 2018

 ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Diarrhea Disease Detection, Zhuhai International Travel Healthcare Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Salmonella spp. /Shigella spp. ortak patojenler için ishal atfedilen. Burada, biz yüksek üretilen iş platformu Salmonella spp. testi ile taranması için tarif / gerçek zamanlı PCR kullanarakShigella spp. rehberli kültürü ile kombine.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Akut gastroenterit fekal-oral iletim zaman zaman, özellikle gıda ve su ele insanlar Salmonella spp./Shigella spp. tarafından enfekte oluşur Salmonella spp./Shigella spp. tespiti için altın standart yöntem doğrudan kültür ama bu emek yoğun ve zaman alıcı. Burada, tarama, gerçek zamanlı polimeraz zincir tepkimesi (PCR) destekli kültürü ile kombine kullanarak Salmonella spp./Shigella spp. için bir yüksek-den geçerek platform açıklayın. İki büyük aşama vardır: gerçek zamanlı PCR ve Rehberli kültür. İlk aşama (gerçek zamanlı PCR), biz her adım yöntemi açıklamak: örnek toplama, ön zenginleştirme, DNA ekstraksiyon ve gerçek zamanlı PCR. Gerçek zamanlı PCR sonucu olumlu ise, o zaman ikinci aşama (Rehberli kültür) gerçekleştirilir: seçici kültür, biyokimyasal tanımı ve serolojik karakterizasyonu. Biz de bundan oluşturulan temsilcisi sonuçları göstermektedir. Burada açıklanan protokol Salmonella spp. hızlı, belirli, hassas ve yüksek işlem hacmi ile taranması için değerli bir platform olur /Shigella spp.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İshal hala yaygın bir sağlık sorunu ile yüksek görülme oranı genel olarak1,2olduğunu. Ölüm oranı nispeten düşük olsa da, bazı hastalarda hafta (örneğin, gevşek ve sulu dışkılama, tuvalete gitmek için bir aciliyet), çeşitli belirtileri göstermek hangi sosyo-ekonomik etkisi çok yüksek3,4yapmak. Daha ciddi, bazı hastalar bile irritabl barsak sendromu tedavi edilmezse5yaptı geliştirmek. Bakteri, virüs ve parazitler ishal6neden olabilir çeşitli türleri vardır. Salmonella spp. /Shigella spp. Akut gastroenterit7,8,9,10,11iletimi için en yaygın bakteriler arasında yer alıyor. Bu nedenle, birçok ilinden yasalar veya yönetmelikler düzenli Salmonella spp. için verilen /Shigella spp. eleme yiyecek ve su ele alabileceğinizi insanlar arasında. Örneğin, Çin hükümeti yasalar zorunlu Salmonella spp. için yayınladık /Shigella spp. eleme yılda bir kez.

Salmonella spp. için altın standart yöntem /Shigella spp. algılama bakteri kültürü. Bakteri kültürü ve art arda gelen biyokimyasal kimlik ve serolojik karakterizasyonu, bakteriler, hastalık salgını yönetimi ve antimikrobiyal hastaların tedavisi yardım için profil oluşturma kolaylaştırabilir tür belirlemek için 12. aynı zamanda Salmonella spp. sırasında enfeksiyon kaynağı iz yardımcı /Shigella spp. salgını13. Ancak, bu yöntem emek yoğun (gerektiren el ile işlem) ve zaman alıcı (birkaç gün) daha az çekici, özellikle örnekleri7çok sayıda test etmek içindir. Ayrıca, culturable (VBNC) Salmonella spp. ama /Shigella spp.14bazı dışkı örnekleri var olabilir. İçinde görüş-in bu sakıncaları,-si olmak güvenilir birçok laboratuar Salmonella spp. algılanması için yeni teknikler geliştirmek /Shigella spp.15,16,17,18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25. aralarında polimeraz zincir tepkimesi (PCR) en yaygın olan nükleer asit amplifikasyon testi (NAAT), tüm bu yöntemleri kullanın. Bir büyük NAAT dayalı yöntemlerin ölü bakteriler, hatta bakteriyel enkaz içeren eksik genomik DNA, olumlu sonuçlar26doğru tanı hastalığın büyük ölçüde etkileyebilir, gösterebilirim kısıtlamasıdır. Blanco ve ark. Bu moleküler tahlil son derece hassas, sadece uygun Salmonella kültürlerde, aynı zamanda kısmi genleri ve son enfeksiyonlar ya da kirlenme26ölü ya da kamunun bakteri olduğunu gösterdi. Bu nedenle, yeni teknoloji geliştirilmelidir.

Burada, birleştirir NAAT yönteme ve kültür göre bir roman yöntemi açıklanmıştır. Şekil 1' de gösterildiği gibi bu yeni yöntem gerçek zamanlı PCR ilk eleme uygular ve sonra olumlu örnekler bakteri kültür ve kimlik için gönderilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokol Zhuhai Uluslararası seyahat sağlık merkezi insan Araştırma Etik Komitesi tarafından kuralları izler. Lütfen deneme sırasında standart steril işlemini kullanın.

1. Kültür medya kompozisyon ve hazırlık

  1. Besin et suyu hazırlayın: Erimesi %1 pepton, % 0.3 sığır eti özü, % 0.5 sodyum klorür, % 0,1 glikoz H2O, pH 7.5 ve basınçlı kap ayarlamak 121 ° C 15 dakika içinde.
  2. Selenit sistin orta hazırlamak: % 0.5 pepton, %0,4 laktoz, % 1'na2HCO3, %0,4 sodyum hidrojen selenit, % 0.001 dağıtılması L-sistin H2O ve pH 7.0 ayarlamak için 5 dakika kaynatın.
  3. Ksiloz hazırlamak lizin, Deoxycholate agar (XLD) plaka: erime % 0,3 maya ekstresi, %0,5 L-lizin, %0.375 ksiloz, % 0.75 laktoz, % 0.75 sükroz, % 0.5 sodyum klorür, %0.008 fenol red, %0,68 sodyum thiosulfate, %0,08 amonyum ferrik nitrat, % 0.25 sodyum deoxycholate, H2O, %1,5 agar ve pH 7.4 için ayarlayın. Sonra 5 dakika kaynatın ve 90 mm tabak dökün.
  4. Salmonella chromogenic agar plaka hazırlamak: Dissolve %1,5 agar, % 0,7 pepton ve maya ekstresi, %1.29 seçici reaktif H2O. Sonra 5 dakika kaynatın ve 90 mm tabak dökün.
  5. Besin agar plaka hazırlamak: % 1 pepton, % 0.3 sığır eti özü, % 0.5 sodyum klorür, % 1.5 agar H2O içinde dağıtılması ve pH 7,3 için ayarlayın. O zaman basınçlı kap 15dk için 121 ° C içinde ve 90 mm kalıplara dökmek.
  6. MacConkey agar (MAC) plaka hazırlamak: % 2 pepton, % 1 laktoz, % 0.5 sodyum klorür, % 0.5 dağıtılması öküz safra tuzu, %0.0025 tarafsız kırmızı, %1,5 agar, %0,0001 kristal violet H2O ve pH 7.2 için ayarlayın. O zaman Otoklav içinde 20 dk için 115 ° C ve 90 mm kalıplara dökmek.

2. gerçek zamanlı PCR

  1. Örnek koleksiyonu
    1. Anal bir çubukla hastanın anüs Ekle 3-5 cm derinliğinde ve etrafında 360 ° döndürün.
    2. Anal çubukla steril toplama tüp içine koymak. Mark örnek kimliği
    3. Örnek en kısa zamanda laboratuvara gönderin.
      Not: Örnekleri için en fazla 24 h 4 ° C'de saklanan olabilir.
  2. Ön zenginleştirme
    1. Besin et suyu 3 mL içine her örnek koleksiyon tüpte ekleyin.
    2. 36 ° c 6 h bir kuluçka için kuluçkaya.
  3. Örnek (isteğe bağlı) karıştırma
    1. Her ön zenginleştirme Kültür 100 µL toplamak ve 10'dan fazla örnekleri varsa 1 numune örnekleri 8-10 1,5 mL tüp içine karıştırın.
    2. Düzgün işaretleyin.
  4. DNA ekstraksiyon
    1. Ön zenginleştirme kültür vasıl 800 x g büyük parçacıklar yerleşmek izin vermek 2 dk santrifüj kapasitesi ve yeni tüp ve 5 dakika süreyle 12.000 x g, santrifüj süpernatant transfer aspirasyon tarafından süpernatant atın.
    2. DNA ekstraksiyon çözeltinin 100 µL ekleyin (0.01 M pH 8.0 Tris-EDTA, %0.01 Nonidet P 40 (NP40)) için Pelet. 1 dk. için şiddetle girdap.
    3. Kuru banyo üzerinde 5 min için 100 ° C'de kaynatın.
    4. 5 dakika süreyle 12.000 x g, santrifüj şablonu izleyen gerçek zamanlı PCR analizi için yeni bir tüp kullanarak süpernatant toplamak.
  5. Gerçek zamanlı PCR
    1. Reaksiyon karışımı olarak Kurulum izleyin: her örnek için 2 x reaksiyon karışımı, her astar 0.4 µM, 0.2 µM her sonda ( Tablo 1' deki dizileri)27, 5 µL 2.4.4 adımda hazırlanan şablonun 12.5 µL ekleyip 25 µL toplam eklemek için GKD2O kullanabilirsiniz birim.
    2. Kur Bisiklete binme programı aynı derecede izlemek: 95 ° C 3 dk, ardından 40 devredir 15 95 ° c s, 30 55 ° C s, 34 s. toplamak floresan sinyallerini 6-carboxy-floresein (FAM) ve Hexachlorofluorescein (onaltılık) kanalları uzama adımda (72 ° C) için 72 ° C otomatik olarak floresan gerçek zamanlı PCR makine tarafından.
    3. Gerçek zamanlı PCR floresan gerçek zamanlı PCR üstünde a makine, alet yönergelerine göre gerçekleştirin.
    4. Adım 4'e doğrudan gidin ve yayın olumsuz raporlar negatif sonuç örnekleri Salmonella spp. için olumsuz olduğu anlamına gelir FAM/HEX kanallarda oluşursa /Shigella spp.
    5. 3.1 ve/veya 3.2 adıma olumlu sonuçlar HEX ve/veya FAM kanallarda örnek sırasıyla Salmonella spp. ve/veya Shigella spp., olumlu olabilir anlamına gelir ortaya gidin.
      Not: örnek karıştırma 2.3 adımda gerçekleştirilen Eğer, o zaman pozitif olan yapılan bireysel örnekleri üzerinde gerçek zamanlı PCR çok olumlu örnek ekran için yapılmalıdır.

3. güdümlü kültür

  1. Salmonella spp. PCR olumlu örnek
    1. Seçmeli Orta kültüründe
      1. Ön zenginleştirme Kültür 100 µL 5 mL tüp bebek ortamda selenit sistin de içine ekleyin. 18-24 h bir kuluçka için 36 ° C'de kuluçkaya.
    2. Kültür plaka üzerinde ayıran
      1. Bir mikro-döngü ile kültürünün bir döngü toplamak ve bir XLD plaka veya Salmonella chromogenic agar levha yayıldı. 18-24 h bir kuluçka için 36 ° C'de kuluçkaya.
    3. Biyokimyasal tanımlama
      1. XLD plaka (pembe koloni karanlık kalp olmadan/ile; koyu koloni; sarı koloni ile/karanlık kalp olmadan) veya Salmonella chromogenic agar plaka üzerinde select şüpheli kolonisi (mor veya prunosus koloni, düzgün ve yuvarlak) (Şekil 2).
      2. Konu şüpheli colony enstrümanın talimatlara göre otomatik mikrobiyal tanımlama sisteminde biyokimyasal kimlik için.
    4. Serolojik karakterizasyonu
      1. Ey antijen karakterizasyonu
        1. O antijen polivalan sera temiz bir slayt üzerine bir damla ekleyin.
        2. Bir mikro-döngü ve sera taneler koloninin bir döngü toplamak.
        3. Eğer kum, akan gibi görünüyor 3.1.4.1.4 adım git hangi koloni sera (Şekil 3) reaktif olduğu anlamına gelir. Aksi takdirde, 3.1.4.1.5 adıma gidin.
        4. O antijen monovalent sera spesifik O antijen ile karakterize 3.1.4.1.1-3.1.4.1.3 tamamlayana dek için kullanın.
        5. VI sera adımları 3.1.4.1.1-3.1.4.1.3 yinelemek için kullanın. Bu VI sera reaktif koloniler halinde bir tüp toplamak ve kuru bir banyoda 5 min için 100 ° C'de kaynatın. 5 dakika süreyle 12.000 x g, santrifüj toplamak Pelet ve 3.1.4.1.1-3.1.4.1.4 arasındaki adımları yineleyin kadar spesifik O antijen ile karakterizedir.
      2. H antijeni karakterizasyonu
        1. H antijeni polivalan sera temiz bir slayt üzerine bir damla ekleyin.
        2. Bir mikro-döngü ve sera taneler koloninin bir döngü toplamak.
        3. Eğer kum, akan gibi görünüyor 3.1.4.2.4 adım git hangi koloni sera için reaktif olduğu anlamına gelir.
        4. H antijeni monovalent sera spesifik H antijen ile karakterize 3.1.4.2.1-3.1.4.2.3 tamamlayana dek için kullanın.
          Not: Bazen serum indüksiyon ikinci aşama H antijen karakterize etmek için gerekli olabilir. Eğer öyleyse, o zaman aşağıdaki isteğe bağlı adımlar gerçekleştirilmelidir.
        5. (İsteğe bağlı) Belirli H antijen sera besin agar plaka üzerine bir damla ekleyin. Tüm sera emilir kadar bekleyin.
        6. (İsteğe bağlı) Bir döngü bir mikro-döngü ve plaka üzerine yayılmış koloninin nerede belirli H antijen sera emilir toplamak. 18-24 h bir kuluçka için 36 ° C'de kuluçkaya.
        7. (İsteğe bağlı) H antijeni monovalent sera ikinci aşama H antijeni ile karakterize 3.1.4.2.1-3.1.4.2.3 tamamlayana dek için kullanın.
        8. Adım 4'e gidin.
  2. Shigella spp. PCR olumlu örnek
    1. Kültür plaka üzerinde ayıran
      1. Bir mikro-döngü ile ön zenginleştirme kültürünün bir döngü toplamak ve XLD tabak ya da MAC levha yayıldı. 18-24 h bir kuluçka için 36 ° C'de kuluçkaya.
    2. Biyokimyasal tanımlama
      1. Şüpheli koloni XLD plaka (düz, yuvarlak, şeffaf ve kırmızı koloni) veya MAC plaka (düz, yuvarlak, renksiz ve şeffaf koloni ile 2-3 mm çapında; toplamak Shigella sonnei daha büyük ve ışık için kuluçka süresinin uzaması pembe çevirmek) (Şekil 4).
      2. Konu şüpheli colony enstrümanın talimatlara göre otomatik mikrobiyal tanımlama sisteminde biyokimyasal kimlik için.
    3. Serolojik karakterizasyonu
      1. Shigella spp. polivalan sera temiz bir slayt üzerine bir damla ekleyin.
      2. Bir mikro-döngü ve sera taneler koloninin bir döngü toplamak.
      3. Eğer kum, akan gibi görünüyor 3.2.3.4 adım git hangi koloni sera için reaktif olduğu anlamına gelir.
      4. Shigella spp. monovalent sera belirli Shigella spp. karakterize 3.2.3.1 3.2.3.3 tamamlayana dek için kullanın.
      5. Adım 4'e gidin.

4. rapor

  1. Olumlu ya da olumsuz haberlere göre yukarıdaki sonuçları yayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Salmonella spp. tarama için uygulanan protokol /Shigella spp. anal dışkıda örnekleri yiyecek ve su ele alabileceğinizi kişilerden.

Gerçek zamanlı PCR adımda, Şekil 5'A, gösterildiği gibi vardı karışık örnek Salmonella spp. için pozitif olduğu anlamına geliyordu HEX kanaldaki başarılı bir amplifikasyon Sonra bir daha da gerçek zamanlı PCR pozitif olan yapıl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Salmonella spp. beri /Shigella spp. kez gıda zehirlenmesi ve fekal-oral iletim Akut gastroenterit28,29 ile ilişkili ve emek yoğun veya zaman alıcı rutin yöntemdir 7, biz yüksek üretilen iş platformu Salmonella spp. için tarif /Shigella spp. tarama, gerçek zamanlı PCR kullanarak rehberli kültürü ile kombine.

Dikkate bu platform kapasitesini en üst düzeye çıkarmak için gereken b...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser bilim ve teknoloji programı Zhuhai, Çin (grant sayı 20171009E030064), bilim ve teknoloji programı Guangdong, Çin (grant sayı 2015A020211004) ve bilim ve teknoloji programı genel yönetim tarafından desteklenmiştir Kalite gözetim, denetim ve karantina (grant numara 2016IK302, 2017IK224) Çin Halk Cumhuriyeti in.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
TrisSigma10708976001
EDTASigma798681
NP40Sigma11332473001
ddH2OTakara9012
PrimeSTAR HS (Premix)TakaraR040Q
Besin SuyuLandBridgeCM106
Besin agarLandBridgeCM107
Selenit Sistin ortamıLandBridgeCM225
XLDLandBridgeCM219
MAC LandBridgeCM908
Salmonella< / em> kromojenik agarCHROMagarSA130
Salmonella< / em> tanı serumuTianrunSAL60
Shigella< / em> tanı serumuTianrunSHI54
anal sürüntü (toplama tüpü artı)Huachenyang
slaytMingsheng7102
mikro döngüWeierkangW511
kuluçka makinesiJinghongDNP-9082
otoklavAULSS-325
kuru banyoJinghongKB-20
otomatik mikrobiyal tanımlama sistemibioM & eacute; rieuxVITEK2diğer eşdeğer sistem
floresan gerçek zamanlı PCR makinesiThermoFisherABI7500başka bir eşdeğer makine kullanılabilir

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Roy, S. L., Scallan, E., Beach, M. J. The rate of acute gastrointestinal illness in developed countries. Journal of Water and Health. 4, Suppl 2 31-69 (2006).
  2. Wilking, H., et al. Acute gastrointestinal illness in adults in Germany: a population-based telephone survey. Epidemiology and Infection. 141 (11), 2365-2375 (2013).
  3. Friesema, I. H. M., Lugnér, A. K., van Duynhoven, Y. T. H. P. Costs of gastroenteritis in the Netherlands, with special attention for severe cases. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 31 (8), 1895-1900 (2012).
  4. Henson, S. J., et al. Estimation of the costs of acute gastrointestinal illness in British Columbia, Canada. International Journal of Food Microbiology. 127 (1-2), 43-52 (2008).
  5. Okhuysen, P. C., Jiang, Z. D., Carlin, L., Forbes, C., DuPont, H. L. Post-diarrhea chronic intestinal symptoms and irritable bowel syndrome in North American travelers to Mexico. The American Journal of Gastroenterology. 99 (9), 1774-1778 (2004).
  6. Wongboot, W., Okada, K., Chantaroj, S., Kamjumphol, W., Hamada, S. Simultaneous detection and quantification of 19 diarrhea-related pathogens with a quantitative real-time PCR panel assay. Journal of Microbiological Methods. 151, 76-82 (2018).
  7. Van Lint, P., De Witte, E., Ursi, J. P., Van Herendael, B., Van Schaeren, J. A screening algorithm for diagnosing bacterial gastroenteritis by real-time PCR in combination with guided culture. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 85 (2), 255-259 (2016).
  8. Liu, J., et al. Use of quantitative molecular diagnostic methods to identify causes of diarrhoea in children: a reanalysis of the GEMS case-control study. Lancet. 388 (10051), 1291-1301 (2016).
  9. Wang, S. M., et al. Surveillance of shigellosis by real-time PCR suggests underestimation of shigellosis prevalence by culture-based methods in a population of rural China. Journal of Infection. 61 (6), 471-475 (2010).
  10. Wikswo, M. E., Hall, A. J. Outbreaks of acute gastroenteritis transmitted by person-to-person contact--United States, 2009-2010. MMWR Surveillance Summaries. 61 (9), 1-12 (2012).
  11. Shen, H., et al. The 12 Gastrointestinal Pathogens Spectrum of Acute Infectious Diarrhea in a Sentinel Hospital, Shenzhen, China. Frontiers in Microbiology. 7, 1926(2016).
  12. Tariq, A., et al. Molecular profiling of antimicrobial resistance and integron association of multidrug-resistant clinical isolates of Shigella species from Faisalabad, Pakistan. Canadian Journal of Microbiology. 58 (9), 1047-1054 (2012).
  13. Ferrari, R. G., Panzenhagen, P. H. N., Conte-Junior, C. A. Phenotypic and Genotypic Eligible Methods for Salmonella Typhimurium Source Tracking. Frontiers in Microbiology. 8, 2587(2017).
  14. Oliver, J. D. The viable but nonculturable state in bacteria. The Journal of Microbiology. 43, Spec No 93-100 (2005).
  15. Rintala, A., Munukka, E., Weintraub, A., Ullberg, M., Eerola, E. Evaluation of a multiplex real-time PCR kit Amplidiag(R) Bacterial GE in the detection of bacterial pathogens from stool samples. Journal of Microbiological Methods. 128, 61-65 (2016).
  16. Wohlwend, N., Tiermann, S., Risch, L., Risch, M., Bodmer, T. Evaluation of a Multiplex Real-Time PCR Assay for Detecting Major Bacterial Enteric Pathogens in Fecal Specimens: Intestinal Inflammation and Bacterial Load Are Correlated in Campylobacter Infections. Journal of Clinical Microbiology. 54 (9), 2262-2266 (2016).
  17. Van Lint, P., et al. Evaluation of a real-time multiplex PCR for the simultaneous detection of Campylobacter jejuni, Salmonella spp., Shigella spp./EIEC, and Yersinia enterocolitica in fecal samples. Eur Journal of Clinical Microbiology Infect Dis. 34 (3), 535-542 (2015).
  18. Kamkamidze, G., et al. Rapid Identification Of The Etiological Factors Causing Diarrheal Diseases. Georgian Medical News. (258), 89-92 (2016).
  19. Li, Y. Establishment and Application of a Visual DNA Microarray for the Detection of Food-borne Pathogens. Analytical Sciences. 32 (2), 215-218 (2016).
  20. Zhuang, L., et al. Detection of Salmonella spp. by a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method targeting bcfD gene. Letters in Applied Microbiology. 59 (6), 658-664 (2014).
  21. Shi, X. L., et al. Rapid simultaneous detection of Salmonella and Shigella using modified molecular beacons and real-time PCR. Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 27 (12), 1053-1056 (2006).
  22. Mo, Q. H., et al. Preparation of a 96-microwell plate DNA diagnostic chip for detection of foodborne bacteria and its application in an incident of food poisoning. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 30 (3), 417-421 (2010).
  23. Wang, H. B., et al. Probe-free and sensitive detection of diarrhea-causing pathogens using RT-PCR combined high resolution melting analysis. Biologicals. 44 (5), 360-366 (2016).
  24. Sun, H., et al. Rapid simultaneous screening of seven clinically important enteric pathogens using a magnetic bead based DNA microarray. World Journal of Microbiology and Biotechnology. 27 (1), 163-169 (2011).
  25. Qi, W., et al. Multiplex PCR assay for rapid detection of five important pathogenic vibrios. Chinese Journal of health laboratory technology. (24), 3497-3500 (2014).
  26. Blanco, G., Diaz de Tuesta, J. A. Culture- and molecular-based detection of swine-adapted Salmonella shed by avian scavengers. Science of the Total Environment. 634, 1513-1518 (2018).
  27. Tang, X. J., Yang, Z., Chen, X. B., Tian, W. F., Tu, C. N., Wang, H. B. Verification and large scale clinical evaluation of a national standard protocol for Salmonella.spp./Shigella.spp. screening using real-time PCR combined with guided culture. Journal of Microbiological Methods. 145, 14-19 (2018).
  28. Dekker, D. M., et al. Drinking water from dug wells in rural ghana--salmonella contamination, environmental factors, and genotypes. International Journal of Environmental Research and Public Health. 12 (4), 3535-3546 (2015).
  29. Gargano, J. W., et al. Mortality from selected diseases that can be transmitted by water - United States, 2003-2009. Journal of Water and Health. 15 (3), 438-450 (2017).
  30. Kumar, R., Surendran, P. K., Thampuran, N. Evaluation of culture, ELISA and PCR assays for the detection of Salmonella in seafood. Letters in Applied Microbiology. 46 (2), 221-226 (2008).
  31. Herrera-Leon, S., et al. Blind comparison of traditional serotyping with three multiplex PCRs for the identification of Salmonella serotypes. Research in Microbiology. 158 (2), 122-127 (2007).
  32. Cunningham, S. A., et al. Three-hour molecular detection of Campylobacter, Salmonella, Yersinia, and Shigella species in feces with accuracy as high as that of culture. Journal of Clinical Microbiology. 48 (8), 2929-2933 (2010).
  33. Eriksson, E., Aspan, A. Comparison of culture, ELISA and PCR techniques for salmonella detection in faecal samples for cattle, pig and poultry. BMC Veterinary Research. 3, 21(2007).
  34. Dutta, S., et al. Sensitivity and performance characteristics of a direct PCR with stool samples in comparison to conventional techniques for diagnosis of Shigella and enteroinvasive Escherichia coli infection in children with acute diarrhoea in Calcutta, India. Journal of Medical Microbiology. 50 (8), 667-674 (2001).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Salmonella Shigella TaramasGer ek Zamanl PCRK lavuzlu K lt rn Zenginle tirmeDNA EkstraksiyonuSelektif K lt rBiyokimyasal Tan mlamaSerolojik KarakterizasyonOtomatik Mikrobiyal Tan mlamaO antijen Karakterizasyonu

İlgili makaleler