Burada, postoperatif peritoneal lavaj sıvı, kurtarılan insan düşük yoğunluklu nötrofil (LDN), büyük nötrofil hücre dışı tuzakları (ağlar) üretmek ve verimli bir şekilde daha sonra grow ücretsiz tümör hücreleri tuzak bir yöntem mevcut.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Düşük yoğunluklu nötrofil tarafından oluşturulan nötrofil hücre dışı tuzakları Peritoneal lavaj sıvı aracılık tümör hücre büyümesini ve eki elde
Bu makalede
Özet
Özet
Hangi yakalayabilir ve mikroplar yok nötrofil yayın nötrofil hücre dışı tuzakları (ağlar), aktif. Son yıllarda yapılan çalışmalarda NETs, otoimmün hastalığı, kan pıhtılaşması ve tümör Metastazlari gibi çeşitli hastalık süreçlerini katılmaktadırlar öneririz. İşte, bindirme ağları için ek sonra büyümek ücretsiz tümör hücrelerinin sırasında NET faaliyet algılamak için detaylı vitro tekniği göstermektedir. İlk olarak, biz düşük yoğunluklu nötrofil (LDN) laparotomies yapılan hastaların postoperatif peritoneal lavaj sıvı toplanan. Kısa vadeli LDN kültür yeşil floresan nükleer ve kromozom counterstain ile görüntülenmiştir büyük NET oluşumu sonuçlandı. Sonra eş kuluçka insan mide kanseri hücre hatların MKN45, OCUM-1 NUGC-4 ağları ile birçok tümör hücreleri ağlar tarafından kapana kısıldın. Daha sonra ek tamamen DNaz ı. Time-lapse video ağları tarafından tuzağa tümör hücreleri ölmek ortaya ağlar bozulması tarafından kaldırıldı ama bunun yerine şiddetle sürekli bir kültürde büyüdüm. Bu yöntemler ağlar ve hücreleri ve materyaller çeşitli yapışkanlı Hofstede tespiti için uygulanabilir.
Giriş
Polimorf nükleer nötrofiller kan dolaşan içinde genelde yoğunluk gradient hazırlama yöntemi mononükleer hücreler ayrılır. Ancak, bazı nötrofil düşük yoğunluklu nötrofil (LDN), CD11b(+), CD15(+), CD16(+) ve CD14(-) fenotipleri ile bilinen mononükleer hücreler ile birlikte saf. LDN göreli sayısı otoimmün hastalıklar1,2, sepsis3ve kanser4,5de dahil olmak üzere çeşitli patolojik koşullarında önemli ölçüde artırır. Önceki çalışmalarda LDN nötrofil6phenotypically ve işlevsel olarak ayrı bir sınıf olduğunu göste....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
LDN Bu çalışmada kayıtlı hastalardan elde edilmiştir ve kurumsal İnceleme Kurulu, Jichi tıbbi üniversite tarafından kabul edildi.
1. yalıtım LDN karın boşluğu Lavages ve NET algılama
- Örnek alma
- 1000 mL normal steril serum doğrudan gastrointestinal malignite nedeniyle karın ameliyatı geçiren hastalarda yara kapatma önce karın boşluğu içine süzülür.
Not: Örnekleri gastrektomi, kolektomi veya yaşında yaş veya cinsiyet dayalı önyargı olmadan yapılan hastalarda elde edilmiştir. Serum fizyolojik bir konteyner içine transfer ve bir dakika içinde tüm karın dökülür. Bu rutin bir ameliyat sonrası periton yıkama hasta üzerinde öne....
- 1000 mL normal steril serum doğrudan gastrointestinal malignite nedeniyle karın ameliyatı geçiren hastalarda yara kapatma önce karın boşluğu içine süzülür.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
2 saatlik kültüründe CD66b(+) peritoneal lavaj sıvı gösterdi dize yapılardan türetilmiş LDN lekeli yeşil-floresan boya için nükleer ve kromozom (Şekil 1B), mononükleer hücreler vermedi CD66b(-) ise (Şekil 1 c). LDN kültürleri ile ön işleme Ancak, 100 U/mL DNaz olduğumu karakteristik yapısı (Şekil 1 d), yok ekstraselüler DNA nötrofil ihraç oluşan olduklarını gösteren. LDN kültürlü zaman plastik tabakl.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Önceki çalışmalarda tümör hücreleri dolaşan NET yüzeylerde vivo içinde10,11tarafından kapana olduğunu bildirdi. Metastatik meme kanseri hücrelerinin nötrofil uyarmak ve hangi tümör hücre büyümesini hedef organ17yardımcı olur ağlar, oluşumu teşvik gösterilmiştir. Buna ek olarak, biz kısa vadeli kültürleri LDN ameliyat sonrası lavaj sıvı üzerinden verimli bir şekilde tümör hücreleri daha fazla stimülasyon15ol.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.
Teşekkürler
Bayan J. Shinohara ve ı. Nieda teknik ve idari personel çalışma için teşekkür ederiz. Ayrıca, biz Drs. Shiro Matsumoto, Hidenori Haruta, Kentaro Kurashina ve Kazuya Takahashi ameliyathane örnek edinme için işbirliği için teşekkür ederiz. Bu eser bir Grant-in-Aid tarafından Milli Eğitim Bakanlığı, bilim, spor ve kültür Japonya ve Japonya Derneği bilimsel araştırma bilim promosyon (17 K 10606) için destek verdi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Ficoll-Paque PLUS | GE Healthcare, İSVEÇ | 17-1440-02 | |
| StraightFrom™ Tam Kan CD66b MicroBeads | Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Almanya | 130-104-913 | |
| Fc blok | Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Almanya | 130-059-901 | |
| MACS Durulama Solüsyonu | Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Almanya | 130-091-222 | |
| MACS BSA Stok Çözümü | Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Almanya | 130-091-376 | |
| LS Sütunları | Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Almanya | 130-041-306 | |
| MACS Manyetik Ayırıcı | Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Almanya | 130-042-501 | |
| Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, | ABD'de SYTOX yeşil nükleik asit lekesi 5mM çözeltisi | S7020 | |
| PKH26 Kırmızı Floresan Hücre Bağlayıcı Kiti | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, ABD | P9691 | |
| Seyreltici C | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, ABD | CGLDIL | |
| Orta | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, ABD | R8758 | |
| Dulbecco' s Modifiye Eagle Orta-yüksek glikoz (DMEM) | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, ABD | D5796 | |
| Dulbecco' s Fosfat Tamponlu Salin (DPBS) | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, ABD | D8537 | |
| 0.5mol / l-EDTA Çözeltisi (pH 8.0) | nacalai tesque, Japonya | 06894-14 | |
| Fetal Sığır Serumu, nitelikli, USDA onaylı bölgeler | gibco by life technologies, Meksika | 10437-028 | |
| Sığır Serumu Albümin liyofilize toz, & % 96 (agaroz jel elektroforezi) | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, ABD | A2153 | |
| Penisilin Streptomisin | Yaşam Teknolojileri Japonya | 15140-122 | |
| Plazmosin Profilaktik | InvivoGen, San Diego, CA-ABD | ant-mpp | |
| DNase I | Worthington, Lakewood NJ) | LS002138 | |
| Poli-L-Lizin Kaplı MİKROPLAKA 6Well | IWAKI, Japonya | 4810-040 | |
| Poli-L-Lizin Kaplı MİKROPLAKA 24Well | IWAKI, Japonya | 4820-040 | |
| floresein stereomikroskop | BX8000, Keyence, Osaka Japonya | BZ-X710 | |
| Tam görünüm hücresi gözlem sistemi | Nikon, Kanagawa, Japonya | BioStudio (BS-M10) | |
| MKN45 insan mide kanseri hücre hattı | Riken, Tukuba Japonya | N/A | |
| NUGC-4 insan mide kanseri hücre hattı | Riken, Tukuba Japonya | N/A | |
| OCUM-1 insan mide kanseri hücre hattı | Osaka City Üniversitesi, Japonya | N/A | Dr. M.Yashiro'dan Hediye |
Kaynaklar
- Hacbarth, E., Kajdacsy-Balla, A. Low density neutrophils in patients with systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and acute rheumatic fever. Arthritis and Rheumatology. 29 (11), 1334-1342 (1986).
- Denny, M. F., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
