Method Article

Sentez ve karakterizasyonu plasental kondroitin sülfat (plCSA) - Lipid hedefleme - polimer nano tanecikleri

DOI:

10.3791/58209

⸱

September 18th, 2018

 ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 2Guangdong Key Laboratory of Nanomedicine, CAS Key Lab for Health Informatics, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 3Department of Chemistry, Guangdong Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, plasental kondroitin sülfat A bağlama peptid (plCSA-BP) sentezi için bir iletişim kuralı mevcut-Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri ile tek adım sonication ve bioconjugate teknikleri. Bu parçacıklar tedavi hedeflenen teslimat en insan tümörleri ve kanserleri ve plasental bozuklukları tedavisinde plasental trophoblasts için bir roman araç oluşturmaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir etkili kanser tedavi yöntemi azaltır ve tümörleri ile en az sistemik toksisite ortadan kaldırır. Aktif olarak hedefleme nano tanecikleri kanser tedavisi için umut verici bir yaklaşım sunuyoruz. Glikozaminoglikan plasental kondroitin sülfat (plCSA) çok çeşitli kanser hücrelerinin ve plasental trophoblasts ve sıtma protein VAR2CSA özellikle plCSA için bağlayabilirsiniz ifade edilir. Sıtma protein VAR2CSA, türetilmiş bir bildirilen plasental kondroitin sülfat A bağlama peptid (plCSA-BP), de özellikle kanser hücrelerinin ve plasental trophoblasts plCSA bağlayabilirsiniz. Bu nedenle, nano tanecikleri plCSA BP Birleşik bir araç olarak insan kanser ve plasental trophoblasts için hedeflenen ilaç dağıtım için kullanılabilir. Bu protokol için biz (plCSA-DNPs); doksorubisin ile yüklenen plCSA BP Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri sentezlemek için bir yöntem tarif Yöntem bir tek sonication adım ve bioconjugate teknikleri oluşur. Buna ek olarak, plCSA-DNPs, Fizikokimyasal özellikleri ve plasental choriocarcinoma (JEG3) hücreler tarafından hücresel alımını belirlemek de dahil olmak üzere karakterize için birkaç yöntem açıklanır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir etkili kanser tedavi yöntemi azaltır ve tümörleri ile en az sistemik toksisite ortadan kaldırır. Bu nedenle, başarılı tedavi yöntemleri keşfetmek için anahtar Seçici tümör hedefliyor. Nano tanecikleri kanser tedavisi için umut verici bir fırsat sunuyoruz ve moleküler derlemeler farklı fonksiyonel grubu ile ilaç etkinliğini artırmak ve azaltmak ilişkili yan etkileri1,2. Ayrıca, nanopartikül sistemleri esas hedef tümörler3ulaşmak için pasif ve aktif hedefleme yararlanmak.

Pasif hedefleme nano tanecikleri ve gelişmiş geçirgenliği ve tümör hücreleri ulaşmak i....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. stok çözümleri hazırlanması

  1. %4 etanol sulu bir çözüm mutlak etanol 4 mL 100 mL Ultrasaf Su ile sulandrarak hazırlayın. Çözüm 4 ° C'de depolayın
    Not: Ultrasaf Su kirleticileri bakteri, partiküller, iyonlar veya enzimler gibi susuz olarak tanımlanır. Ultrasaf Su bir su arıtma sisteminden düşük anyonik kirlenme anlamına gelir kadar 18,2 mΩ·cm bir hedef direnci ile elde edildi.
  2. 1 mg/mL Soya lesitin hisse senedi çözüm Soya lesitin 20 mL % 4 etanol sulu çözeltisi içinde 20 mg çözülerek hazırlayın. Soya lesitin hisse senedi çözüm 4 ° C'de depolayın
  3. Bir 25 mg/mL DSPE-PEG (2000)-COOH hisse senedi çözüm DSPE-PEG-COOH 100 mg 4 ml % 4 etanol su....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol için PLGA, DSPE-PEG-COOH ve soya lesitin are bir temsilcisi polimer, lipit-PEG-COOH eşlenik ve lipid, anılan sıraya göre. Sonication yöntemi ile tek adım plCSA hedefli lipid-polimer nano tanecikleri ve EDC/NHS tekniği sentezi Şekil 1' de gösterilmiştir. İlk olarak, sonication koşullar altında Soya lesitin, PLGA ve Show DSPE-PEG-COOH formu çekirdek-kabuk için kendi kendine araya DNPs yapılandırılmış. Çekirdek PLGA ve kapsüllenmiş DOX oluşu.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu iletişim kuralı plCSA BP Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri sentezleme için verimli ve tekrarlanabilir bir yöntem sağlar. Lipid-polimer nano tanecikleri hazırlamak için tek adım sonication Yöntem hızlı, tekrarlanabilir ve Isıtma, vortexing veya buharlaşma içeren tipik nanoprecipitation yöntemlerden farklı değildir. Bu nedenle, Gelişmiş Yöntem sentez zaman önemli ölçüde azaltır. Buna ek olarak, bu protokol için kullanılan EDC/NHS bioconjugate peptidler ve nano tanecikleri antikorlar çekimlerine bir yaygın olarak k.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

X.F. ve B.Z. mucitler patent PCT/CN2017/108646 ve bir plCSA hedefli nanoparçacık sentezi yöntemi ve uygulama kapsayan SIAT tarafından gönderilmiş 201710906587.6 vardır. Hiçbir potansiyel çıkar çatışmaları diğer yazarlar tarafından açıklanması.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser hibe tarafından ulusal anahtar araştırma ve geliştirme programı of China (2016YFC1000402), Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81571445 ve 81771617) ve Guangdong Eyaleti doğal Bilim Vakfı (2016A030313178) için desteklenen X.F. ve X.F. için Shenzhen temel araştırma fonu (JCYJ20170413165233512)

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
peptit sentezi içinplCSA peptidShanghai GL Biochem573518
Nanopartikül sentezi içinmutlakSinopharm Chemical10009218
Nanopartikül sentezi içinfasulyesi lesitiniAvanti Polar Lipids441601
Nanopartikül sentezi
için DSPE-PEG-COOH Avanti Polar Lipids 880125Nanopartikül sentezi için doksorubisinJKimetik113424Nanopartikül
sentezi içinasetonitrilShanghai Lingfeng1008621
Nanopartikül sentezi içinPLGASigma-Aldrich719897
Nanopartikül sentezi içinultrasonik işlemciSonics VCX130
Santrifüj filtresi (MWCO 10 kDa)Milliporenanopartikülsaflaştırma santrifüjü için
nanopartikül saflaştırma içinSigma3-18KS
2- [morfolino] etansülfonik asit (MES)Sigma-AldrichM3671peptit konjugasyonu için
1-etil-3- (3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidroklorür (EDC)Sigma-Aldrich3450peptit konjugasyonu için
N-hidroksisüksinimid (NHS)Peptit konjugasyonu içinSigma-Aldrich56480
Diyaliz torbaları Nanopartikülsaflaştırma içinSpectrum132592T
Hücre kültürü içinPBSHycloneSH30028.01
10 mL santrifüj tüpleri, nanopartikülsentezi içinAladdinS-025
15 mL santrifüj tüpleri, polipropilenCorning430791çeşitli uygulamalar için
0.22 μ Nanopartikül saflaştırma için m steril şırınga filtresiMillipore SLGV033RB
1 ml şırınga, polipropilenNanopartikül sentezi içinBD328421
Malvern ZetasizerMalvernNano ZSpartikül boyutu analyer için
TEMfosfotungstik asit
TEM
için EMCN BZ10024aTEM İletim için UV-VIS spektrometresiLeageneDZ0035

elektron mikroskobu		JEOLJEM-100CXIIboyutu analyeri
BCA reaktifiA Thermo Fisher Scientific23228BCA testi için
BCA reaktifi BThermo Fisher Scientific23224BCA testi için
96 Kuyulu PlakalarCorning3599 tahlil
Plaka okuyucuThermo Fisher ScientificMultiskan & trade; BCA tahlili için
12 oyuklu plakalarHücre kültürü içinCorning3513
JEG3 hücreÇin Bilimler Akademisi Hücre BankasıTCHu195İnsan plasentası
DMEM / F12HücreSH30272.01fenol kırmızı içermeyen
Fetal sığır serumu (FBS)GIBCO10100
Penisilin / streptomisinGIBCOHücre kültürü için15070063
Floresan mikroskobuOLYMPUSCKK53
Hücre alımı içinparaformaldehitShanghai Lingfeng1372021
Selür alımı içinDAPISangon BiotechA606584
Montaj ortamıSelür alımı içinLifeP36961
etanolsoyaUFC801024Peptit konjugasyonu içinpolipropilen için TEM ızgarası için partikül için GO kültürü için

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
  2. Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
  3. Jabir, N. R., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Placental Chondroitin Sulfate ALipid Polymer NanoparticlesPeptide ConjugationDoxorubicin LoadingCellular Uptake AssayFluorescence MicroscopyZeta Potential MeasurementTEM ImagingPLGA Nanoparticle SynthesisEster Activation Reaction

Related Articles