Burada zaman ve mekan içinde hızlı ve hassas sıcaklık değişiklikleri üretir programlanabilir bir ısı kontrollü arena kullanarak sıcaklık değiştirme Drosophila lokomotor performansını otomatik olarak belirlemek için bir iletişim kuralı mevcut.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Burada zaman ve mekan içinde hızlı ve hassas sıcaklık değişiklikleri üretir programlanabilir bir ısı kontrollü arena kullanarak sıcaklık değiştirme Drosophila lokomotor performansını otomatik olarak belirlemek için bir iletişim kuralı mevcut.
Ne tür dağıtmak ve hareket etkiler her yerde bulunan bir çevre faktörü sıcaklığıdır. Drosophila meyve sinekleri farklı türler belirli yanıt-e doğru sıcaklık fizyolojik tolerans ve adaptasyon göre değiştirme hakkına sahiptir. Drosophila sinekler de sinir ectotherms içinde işleme sıcaklık temelini anlamak için temel haline gelmiştir sistem algılama bir sıcaklık sahip. Burada sıcaklık değişen bireysel sinekler yanıt keşfetmek için zamansal ve mekansal kontrolü ile hızlı ve hassas sıcaklık değişikliklerine izin ısı kontrollü bir arena mevcut. Bireysel sinekler arenada yer ve Tekdüzen kademeli sıcaklık tepki normları belirlemek için veya dağınık şekilde dağıtılmış sıcaklıklar artar tercihlerinizi belirlemek için aynı anda gibi hazır çekim sıcaklık sorunlar için maruz. Bireyler hız veya Konum tercihi miktar izin otomatik olarak izlenir. Bu yöntem hızlı bir şekilde yanıt geniş sıcaklık sıcaklık performans eğrileri Drosophila içinde belirlemek için veya diğer böcekler benzer boyutta üzerinden ölçmek için kullanılabilir. Buna ek olarak, bu genetik çalışmalar için sıcaklık tercihleri ve mutantlar veya vahşi-türü sinekler tepkiler ölçmek için kullanılabilir. Bu yöntem termal türleşme ve adaptasyon gibi sinirsel mekanizmalar arkasında sıcaklık işleme temeli ortaya çıkarmak yardımcı olabilir.
Nasıl organizmalar işlev ve1davranır etkiler sürekli bir çevre faktörü sıcaklığıdır. Enlem ve yükseklik farklılıkları türü organizma için onların yanıtları sıcaklık2,3için evrimsel seçimi hangi sonuçlar maruz kalan iklim farklılıkları yol. Organizmaların farklı sıcaklıklarda onların belirli ortamlarda4altında performansı en üst düzeye çıkarmak morfolojik, fizyolojik ve davranışsal uyarlamalar ile yanıt. Örneğin, meyve sineği Drosophila melanogaster, örneğin alınma olasılığını farklı bölgelerde farklı sıcaklık tercihleri, gövde boyutları, gelişimsel süreleri, uzun ömürlü, verimlilik ve yürüyüş performans farklı sıcaklıklarda2 var ,5,6,7. Farklı kökenleri sinekler arasında gözlenen çeşitlilik kısmen genetik varyasyon ve plastik gen ifade8,9tarafından açıklanmıştır. Benzer şekilde, Drosophila türler farklı alanlardan farklı sıcaklık degradeler arasında dağıtmak ve aşırı sıcak ve soğuk testleri10,11,12için direnç farklılıklar gösterir.
Drosophila de son zamanlarda sıcaklık algı13,14,15,16,17genetik ve nöral temeli anlamak için seçim modeli haline geldi. Genel olarak, Yetişkin sinekler anten soğuk ve sıcak periferik sıcaklık sensörleri ve sıcaklık sensörleri beyin13,14,15,16 üzerinden sıcaklık algıladıkları , 17 , 18 , 19 , 20. Gr28b.d16 ya da yüksek ateş21çevre reseptörleri sıcak hava için hızlı, çevre soğuk reseptörleri Brivido14tarafından karakterize edilmektedir. Beyinde, sıcaklık TrpA115ifade nöronlar tarafından işlenir. Mutantlar bu yollar üzerinde davranış çalışmaları sıcaklık nasıl işleneceğini bizim anlayış geliştirmek ve Drosophila farklı bölgelerdeki nüfus arasında değişir mekanizmaları içine anlayışlar verebilir.
Burada hızlı ve hassas sıcaklık değişiklikleri üreten ısı kontrollü bir arena açıklayın. Müfettişler bu değişiklikler için standart ve tekrarlanabilir sıcaklık manipülasyonlar insan müdahalesi olmadan sağlayan önceden programlayabilirsiniz. Sinekler kaydedilir ve onların konumu da bir deney farklı aşamalarında belirlemek için özel yazılımı ile izleniyor. Bu protokol için sunulan ana ölçüm yürüme hızı farklı sıcaklıklarda, bireysel termal adaptasyon5tanımlayabilirsiniz fizyolojik performans ekolojik ilgili dizin olduğu içindir. Sıcaklık reseptör mutantlar ile birlikte, bu teknik, hücresel ve biyokimyasal düzeyde termal adaptasyon mekanizmaları ortaya çıkarmak yardımcı olabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
1. sinek gıda orta hazırlanması
2. sinekler hazırlanması
3. çerçeve ışık
4. ısı kontrollü Arena
5. sıcaklık Davranışsal deney
6. video izleme ve veri analizi
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Üç bakır taş olan sıcaklık ayrı ayrı programlanabilir bir devre kontrol edilebilir ısı kontrollü arena (Şekil 1A) oluşur. Her bakır döşeme için programlanabilir devre geribildirim veren bir sıcaklık sensörü sahiptir. Her döşeme sıcaklığını artırmak için bir güç kaynağı devre etkinleştirir. Pasif termoelektrik elemanları tarafından bir fan soğutmalı bir soğutucu sürekli soğutma sağlarken istenilen sıcaklık sürdürmek için sürekli ısıtma elemanları hareket. Orta...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Burada zaman ve mekan içinde hassas ısı değişiklikleri üreten bir otomatik ısı kontrollü arena (Şekil 1) sunulmuştur. Bu yöntem sadece sıcaklık (Şekil 2 ve Şekil 3) hazır çekim yavaş yavaş artar, aynı zamanda dinamik sıcaklık zorluklar içinde uçmak arena her parçasına sıcak olduğu için bireysel Drosophila pozlama sağlar farklı bir sıcaklık için bağımsız olarak (Şekil 4 ve
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.
Bu eser kısmen tarafından burs davranışsal ve bilişsel sinirbilim programı Groningen Üniversitesi ve Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) Meksika, yüksek lisans burs verilen Andrea desteklenmiştir Soto Padilla ve Hedderik van Rijn ve Jean-Christophe Billeter saat çalışmanın John Templeton Vakfı Hibe. Biz de Peter Gerrit Bosma FlySteps ait diğer gelişmekte olan onun katılımı için müteşekkir vardır.
Komut dosyaları TemperaturePhases, FlySteps ve FlyStepAnalysis tamamlayıcı bilgiler olarak ve aşağıdaki geçici ve kamuya bağlantısında bulunabilir:
https://dataverse.nl/privateurl.XHTML?Token=c70159ad-4D92-443D-8946-974140d2cb78
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Arduino Due | Arduino | A000062 | Yazılımı RUG |
| Elektronik Kartı | Ruijsink Dinamik Mühendislik | FF-Main-02-2014 | |
| Güç kaynağı Boost | XP-Power 48. V 65 W | ECS65US48 | 53 Volt |
| Güç kaynağına ayarlayın Fayans Isıtma | XP-Power 15. V 80 W | VFT80US15 | |
| Güç kaynağı Soğutma | XP-Power 15. V 130 W | ECS130U515 | |
| Peltier elemanları | Marlow Industries | RC12-4 | 2 Elemanlı, kontrollü DC besleme |
| Isı emici | Fisher Technik | LA 9/150-230V | Titreşim için ayrılmış |
| Sıcaklık sensörleri | Ölçüm Özellikleri | MCD_10K3MCD1 | Mikro Termistör Probu |
| Bakır blok/fayans | Ruijsink Dinamik Mühendislik | FF-CB-01-2014 | |
| Auminum halkası | Ruijsink Dinamik Mühendislik | FF-RoF-02-2015 | |
| Tesa 4104 beyaz bant 25 x 66 mm | RS Bileşenleri | 111-2300 | Beyaz iletken bant |
| Kırmızı LED'ler | Lucky Ligt | ll-583vc2c-v1-4da | 625 nm, 20 mAmp ve 6 V arasında dalga boyu |
| Sıcak beyaz LED şerit | Ledstripkoning | HQ-3528-SMD | Metre başına 60 LED |
| Anahtar Güç Kaynağı | Jenerik | T-36-12 | |
| Logitech c920 | Logitech Europe SA | PN960-001055 | |
| QuickTime Oynatıcı | Apple Bilgisayar | Kaydı program | |
| İzleme analiz yazılımı | R | Paketleri: pacman | |
| İzleme analiz yazılımı | MATLAB | ||
| Termal Görüntüleme | FLIR T400sc | ||
| Grafikler ve İstatistik Yazılımı | Grafik Pedi Prizma | ||
| Sigmacote | Sigma-Aldrich | SL2-100ML | Silikonlaştırıcı ajan |
| Sinek yetiştirme şişeleri | Flystuff | 32-130 | 6oz Drosophila stok şişe |
| Flypad | Flystuff | 59-114 | |
| Sinek yetiştirme şişeleri | Dominique Dutscher | 789008 | Drosophila tüpleri dar 25x95 mm |
| İnkübatör | Sanyo | MIR-154 | |
| Manyetik sıcak plaka | Heidolph | 505-20000-00 | MR Hei-Standart |
| Agar | Caldic Malzemeler B.V. | 010001.26.0 | |
| Glikoz | Gezond & wel | 1019155 | Dekstroz/Druivensuiker |
| Sükroz | Van Gilse | Toz şeker | |
| Mısır unu | Flystuff | 62-100 | |
| Buğday tohumu | Gezond& wel | 1017683 | |
| Soya unu | Flystuff | 62-115 | |
| Pekmez | Flystuff | 62-117 | |
| Aktif kuru maya | Red Star | ||
| Tegosept | Flystuff | 20-258 | 100 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste