Bu makalede küçük hayvan beyin mikro-CT görüntüleme, hangi lezyonlar sayılabilir ve tüm beyin bağlamında yüksek hassasiyetle yer alan elektrotlar hazırlamak için basit bir yöntem.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Lezyonlar karakterize ve küçük hayvan beyinlerinde elektrot bulmak için bir mikro-CT-esaslı Yöntem
Bu makalede
Özet
Özet
Lezyon ve elektrot konumu doğrulama geleneksel yolu ile histolojik inceleme lekeli Beyin dilimleri, el ile tahmini gerektirir zaman alıcı bir işlem yapılır. Burada, lezyonlar miktarının ve elektrotlar daha az zahmetli ve daha ayrıntılı sonuçlar verir beyin bulmak için basit, kolay bir yöntemi açıklanmaktadır. Bütün beyin osmiyum tetroxide ile lekeli, reçine gömülü ve mikro-CT tarayıcı ile görüntüsü. 3D dijital birimleri kararları ve sanal bölüm kalınlıkları örnek boyutu üzerinde bağımlı ile beyin taramaları sonucunda (voxel sıçan ve zebra finch için başına 12-15 ve 5-6 µm beyin, sırasıyla). Yüzey ve derin lezyonlar ile karakterize ve tek tetrodes, tetrot diziler, elektrolitik lezyonlar ve silikon sondalar de yerelleştirilmiş olabilir. Özgür ve özel mülk yazılım Denemecileri el ile veya otomatik olarak herhangi bir uçak ve segment birim numune hacmi incelemek izin verir. Bu yöntem tüm beyin hacmi oluşturduğu için lezyonlar ve elektrotlar karşılaştırmaları içinde ve çalışmalar arasında standart hale getirmek yardımcı olacaktır geçerli yöntemleri çok daha yüksek derecede sayısal.
Giriş
Nörologlar lezyonlar uzun süre üzerinde işlev ve beyin konumda arasındaki ilişkiyi anlamak için güveniyorlar. Örneğin, öğrenme ve hafıza için vazgeçilmez olarak hipokampus ve dürtü kontrol için anahtar olarak prefrontal korteks anladığımız kadarıyla her iki ürün insanlar1,2serendipitous lezyonların edildi. Ancak, hayvan modelleri kullanımını nörologlar lezyonlar serendipity ötesine giderek yararlanmak izin verdi ve sayısız beyin bölgeleri fonksiyonu yapı-fonksiyon ilişkilerin sistematik çalışmalar aracılığıyla aydınlatılmamıştır lezyonlar3,4.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm bakım ve deneysel hayvan manipülasyon gözden geçirilmiş ve Harvard kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmış. Burada açıklanan perfüzyon sıçanlara özgüdür, ancak yordamı herhangi bir hayvan daha küçük veya benzer şekilde ölçekli akıllı için geçerlidir.
1. perfüzyon
- 1 fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) x hazırlamak. Bir fare için (Yaş: 0.5-1.5 yaşında, ağırlık: 250-600 g), 800-1000 mL-meli var olmak yeterli. 400 mL hayvan ve sabitleştirici sulandırmak için ek bir 400 mL sıvı için kullanın.
- %2 (w/v) paraformaldehyde (PFA) ve % 2.5 (w/v) oxazolidin (GA) 1 x PBS oluşan sabitleştirici hazırlayın. B....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Geleneksel olarak, beyin kesitli ve lezyonlar ölçmek ve elektrotlar bulmak için lekeli, ancak bu yöntem hataya, emek yoğun ve genellikle tahmin sonuçları gerektirir. Bütün beyin mikro-CT görüntüleme için hazırlanıyor tarafından örnekleri zarar verme olasılığını önemli ölçüde azalır, ilgilendiğiniz olanakları tüm beyin bağlamında analiz edilebilir ve Yöntem birçok örnekleri, paralel işleme için önemli ölçüde ödünç vermek kendisi numune hazırlama hız.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Protokol için önemli adımlar şunlardır: ilk olarak, İngiltere'de yılın ve GA hayvan sıvı ve daha sonra beyin sonrası düzeltmek için bir arada kullanımı tutarlı tam osmiyum penetrasyon dokusunun ulaşmak için her şeyden. Her ne kadar biz bu açıkça did değil sınav, GA fiksasyon değil tersinir16,17ise makul bir açıklama PFA fiksasyon tersinir15, olmasıdır. Bir iki haftalık kuluçka osmiyum tetroxide içinde tam doku infiltrasyonu için gerekli ol.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Yazarlar Greg Lin ve Arthur McClelland kendi uzmanlık için mikro-CT makine, David Richmond ve Hunter Elliott, görüntü ve veri analizi çekirdek (IDAC), Harvard Tıp Okulu tavsiye işleme görüntü için ve William Liberti, Boston ile teşekkür ederiz Üniversite nezaketle zebra finch beyin sağlamak için. Bu eser için nano sistemleri (CNS), bir üye, Ulusal Nanoteknoloji koordine altyapı ağı (NSF Ödülü No 1541959 altında Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenen NNCI), kısmen merkezinde gerçekleştirildi. CNS Harvard Üniversitesi'nin bir parçasıdır. Bu eser Richard ve Susan Smith Aile Vakfı ve IARPA (sözleşme #D16PC00002) tarafından desteklenmiştir. S.B.E.W. insan sınır bilim pr....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Paraformaldehit (PFA) | Elektron Mikroskobu Bilimleri (EMS) | 15710 | 2X PBS'de %1 (a/h/) |
| Glutaraldehit (GA) | EMS | 16220 | 1x PBS'de %2,5 (a/h) GA |
| OsO4 | EMS | 19190 | Çeker ocakta çalışma |
| Etanol | Decon Labs | Koptec | 140, 190, 200 kanıt |
| Aseton | EMS | 10015 | Camla damıtılmış |
| Durcupan ACM reçinesi | Sigma-Aldrich | 44610 | A, B, C ve D bileşenleri, gömme için reçine |
| Tek kullanımlık kalıplar | Ted Pella | 27114 | Önerilen |
| milliQ su (ultra saf su) | Millipore Sigma | QGARD00R1 (veya ilgili arıtıcı) | Önerilen |
| Parafilm (parafin filmi) | Millipore Sigma | P7793 | Önerilen parafin filmi |
| Mikro-CT tarayıcı | Nikon Metrology Ltd., Tring, Birleşik Krallık | X-Tek HMS ST 225 | Yazarlar tarafından kullanılır |
| Mikro-CT taramalarını görselleştirmek ve analiz etmek için yazılım: | |||
| Hacimli Grafikler | VG Studio Max | Yazarlar | |
| FEI / Thermo Scientific | Avizo | Yazarlar | |
| FEI / Thermo Scientific | Amira | , Avizo | |
| Mark Sutton'a Benzer & Russell Garwood | Spiers Ücretsiz | , http://spiers-software.org/ | |
| Pixmeo Sarl | Osirix Lite | Ücretsiz, https://www.osirix-viewer.com/ | |
| Açık Kaynak | FIJI | Ücretsiz, https://fiji.sc/ | |
| Adobe | Photoshop | Her seferinde bir dilimi analiz etmek için iyi |
Kaynaklar
- Scoville, W., Milner, B. Loss of recent memory after bilateral hippocampal lesions. Journal of Neuropsychiatry and Clinical Neuroscience. 12, 103-113 (2000).
- Damasio, H., Grabowski, T., Frank, R., Galaburda, A. M., Damasio, A. R. The return of Phineas Gage: clues about the brain from the skull of a famous patient. Science. 264 (5162), 1102-1105 (1994)....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
