Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Multipl Miyelom hücre büyümesini Vivo tek-duvar karbon nanotüp (SWCNT) tarafından yapılan bir baskı-MALAT1 antianlamlı Oligos teslim

5.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/58598

⸱

13 Aralık 2018

 ,  , 
1Department of Cancer Biology, Lerner Research Institute, Cleveland Clinic, 2Department of Medical Oncology, Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu el yazması bir tek-duvar karbon nanotüp (SWCNT) sentezi açıklar-SWCNT güvenilir teslim ve güçlü tedavi edici etkisini gösteren MALAT1 antianlamlı gapmer DNA oligonükleotid (SWCNT-anti-MALAT1), Birleşik Anti-MALAT1 tüp bebek ve içinde vivo. Yöntemleri kullanılan sentez, değiştirme, fiil ve SWCNT-anti-MALAT1 enjeksiyon açıklanmıştır.

Özet

Tek-duvar karbon nanotüp (SWCNT) olan hücrelere, proteinler, oligonucleotides ve sentetik küçük molekül uyuşturucu gibi birden fazla çeşit uyuşturucu dağıtmak için kullanılan nanopartikül, yeni bir türüdür. SWCNT özelleştirilebilir boyutları, yüzeysel geniş bir alanı vardır ve esnek yüzeyinde farklı değişiklikler yoluyla uyuşturucu ile bağlayabilirsiniz; Bu nedenle, uyuşturucu hücreye taşımak için ideal bir sistemdir. Uzun kodlamayan RNA'ların (lncRNAs) bir küme kodlamayan RNA 200 daha uzun olan nt, protein çevrilemeyen ancak biyolojik ve patofizyolojik işlemlerinde önemli bir rol oynamaktadır. Metastaz ilişkili akciğer adenokarsinom transkript 1 (MALAT1) son derece korunmuş bir lncRNA olduğunu. Yüksek MALAT1 düzeyleri multipl miyelom (MM) de dahil olmak üzere çeşitli kanserlerin kötü prognoz ile ilgili gösterilmiştir. Biz-si olmak kâşif MALAT1 DNA tamiri ve hücre ölüm mm düzenler; Böylece, MALAT1 MM için terapötik hedef olarak kabul edilebilir. Ancak, antianlamlı oligo verimli bir şekilde teslim inhibe/nakavt vivo içinde MALAT1 için hala bir sorundur. Bu çalışmada biz PEG-2000 ile SWCNT değiştirmek ve bunu bir anti-MALAT1 oligo eşlenik, bu bileşik tüp bebek teslim test etmek, Dissemine bir MM fare modeli olarak intravenöz enjekte etmek ve MM progresyon gösteren önemli bir inhibisyon gözlemlemek o SWCNT bir ideal teslimat servisi için anti-MALAT1 gapmer DNA'sı var.

Giriş

SWCNT çeşitli ilaçlar, nükleik asitler, proteinler ve küçük moleküller gibi ideal tolerabilite ve in vitro1 ve içinde vivo2en az toksisite stably ve verimli bir şekilde sunabilir bir roman nanomaterial var. Functionalized SWCNT büyük biyouyumluluk ve su çözünürlük vardır, bir mekik daha küçük moleküller için kullanılabilir ve hücre zarının3,4,5nüfuz onları taşıyabilir.

lncRNAs olan bir küme RNA'ın (> 200 nt) bu mRNA için genom transkripsiyonu ama protein çevrilemez. Kanıt artan lncRNAs gen ifade6 Yönetmelikte katılmak ve inisiyasyon ve en tip-in MM7,8,9dahil olmak üzere kanser progresyon katılmaktadırlar göstermiştir. MALAT1 olan bir nükleer zenginleştirilmiş kodlamayan transkript 2 (NEAT2) ve son derece korunmuş lncRNA10. MALAT1 başlangıçta metastatik olmayan küçük hücreli akciğer kanseri (NSCLC)11' kabul edilmektedir, ancak çok sayıda tümör5,12,13' te overexpressed; en çok ifade lncRNAs biridir ve kötü prognoz MM8,14ile ilişkilidir. MALAT1 ifade düzeyini yalnızca MM15tanısı göre ölümcül ders ekstramedullar MM hastalarda anlamlı olarak daha yüksek.

Bir önceki çalışmada, biz anti-MALAT1 oligos sağlam DNA hasarı ve MM16 apoptosis gapmer DNA antianlamlı oligonucleotides MALAT1 hedefleme kullanarak yol doğruladı (anti-MALAT1) MM hücrelerdeki. Gapmer DNA antianlamlı DNA'sı oluşur ve 2'-OMe-hangi MALAT1 bölünme RNase H bir kez bağlı etkinlik17tarafından sor RNA'ların, bağlanmıştır. Antianlamlı oligos içinde vivo teslim verimliliğini hala klinik kullanımını sınırlar.

Teslim test etmek için SWCNT etkisi için anti-MALAT1 gapmer oligos, DNA DSPE-PEG2000-Amin için Birleşik anti-MALAT1 gapmer SWCNT functionalized. SWCNT-anti-MALAT1 sonra intravenöz bir MM Dissemine fare modeli enjekte edilir; çarpıcı bir inhibisyon dört tedaviler sonra görülmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deney hayvanları içeren (kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi) Cleveland Kliniği IACUC tarafından önceden onaylanmış.

1. Functionalized SWCNTs sentezi

  1. Mix 1 mg SWCNTs, DSPE-PEG2000-Amin 5 mg ve 5 mL steril nükleaz ücretsiz su cam mercek flakon (20 mL). Salla de tüm reaktifler tamamen erimesi için.
  2. Bir su banyosu sonicator 40 W oda sıcaklığında 1 h için bir güç düzeyinde şişede solüsyon içeren temizleyicide (RT, 20 dk x 3, değiştirmek her 20 dk su aşırı ısınmayı önlemek için). Daha sonra 24.000 x g 6 h için de santrifüj kapasitesi ve süpernatant çözüm toplamak. Bu işlevsel bir SWCNT çözüm 4 ° C'de 2 ay depolanabilir.
  3. 1 4 mL steril su nükleaz ücretsiz tarafından takip mL 100 kDa MWCO santrifüj filtre aygıta, adım 1.2 SWCNT çözeltisi ekleyin. RT ilave DSPE-PEG2000-Amin kaldırmak için de 4000 x g , 10 dk santrifüj. 4 mL su ve 5 Santrifüjü ilavesi tekrar x. Fazla 0,5 mL artık SWCNT çözeltisi filtrede her Santrifüjü sonra sol olacaktır.
  4. Artık bir UV/VIS Spektrometre 808 kullanarak filtre SWCNT çözüm konsantrasyonu ölçmek nm son yıkama sonra. Son konsantrasyonu genellikle yaklaşık 50 mg/L (Kam ve ark.18tarafından geliştirilen yöntemine göre hesaplanır) olduğunu.
    Not: DSPE PEG functionalized SWCNTs 1.4 adımdan sonra suda çözünen ve farklı biyolojik çözümler birkaç hafta sonra görünür toplama olmadan kararlı olun.

2. 2'-O değiştirilmiş RNA'ların Functionalized SWCNT için Anti-MALAT1 Gapmer DNA'ın konjugasyon çevrili

  1. Sulfo-LC-SPDP 0.5 mg DSPE-PEG2000-Amin 450 µL içine SWCNT functionalized ekleyin. 10 x PBS 50 µL ekleyin ve sonra RT. 2 h için kuluçkaya
  2. İlave Sulfo-LC-SPDP kaldırmak için 4 mL su nükleaz ücretsiz tarafından takip tepki adım 2.1 bir aygıta 100 kDa MWCO santrifüj filtre ekleyin. 10 dakikadır RT. tekrar 4 mL ilavesi de 4000 x g , su ve Santrifüjü santrifüj kapasitesi 5 x.
  3. 200 nM thiol değiştiren anti-MALAT1-Cy3 gapmer DNA'sı içine 1,5 mL ticari DTT çözeltisi ekleyin ve 90 dk az RT. arındırmak için üreticinin protokol sonrası bir NAP-5 sütun ürünüyle kuluçkaya. Anti-MALAT1-Cy3 ile sterilize nükleaz ücretsiz 1 500 µL elute PBS x.
    Not: Functionalized SWCNT thiolated anti-MALAT1 gapmer DNA depolama sırasında oluşan disülfür bağları ayırmak ekledi DTT ile saklanır. Eklenen DTT konjugasyon SWCNT ile önce aNAP-5 sütun tarafından kaldırılabilir.
  4. Filtrede yaptı sulfo-LC-SPDP-tedavi DSPE-PEG2000-Amin SWCNT çözüm toplamak ve anti-MALAT1-Cy3 çözüm 500 µL ile sulandırmak. O zaman, 24 h için 4 ° C'de kuluçkaya. Konjuge SWCNT-anti-MALAT1 4 ° C'de 3 hafta boyunca saklanır. Aynı yordamı izleyerek, konjuge SWCNT kapış antianlamlı oligo ile sentezlenmiş ve SWCNT-denetimi olarak kullanılır.

3. kuyruk ven enjeksiyon SWCNT-Anti-MALAT1

  1. Bir MM Dissemine fare modeli oluşturmak.
    1. Karşılaştırma en iyi sonuçları elde etmek için rasgele 14 NOD düzenleyin. CB17-Prkdcscid/J fareler (8 haftalık) deneme veya denetim grupları (her grup yedi) aynı erkek/kadın oranı ile içine.
    2. İşlem tezgah temiz ve % 70 alkol ile sterilize.
    3. Isıtma lambası sıcak görünmesini damar kuyruk yardım için fareyi kullanın. Fare düzgün bir kuyruk enjeksiyon restrainer ile dizginlemek.
    4. 5 x 106 MM.1S-Luc-mCherry hücreleri PBS 50 µL anestezi olmadan kuyruk ven yoluyla enjekte. Enjeksiyon yeri bir alkol bez ile 30 s. Mark enjekte fare tuşuna basın ve temiz bir kafese geri.
  2. Gün 7'den sonra MM.1S hücre enjeksiyon tedaviye başlayın.
    1. SWCNT-anti-MALAT1 fare kuyruğu damar içine içeren PBS 50 µL enjekte. SWCNT-denetimi denetimi olarak içeren PBS kullanın.
    2. Enjeksiyon yeri bir alkol bez ile 30 için basın s.
    3. Kuyruk ve 1 dk. için fare genel davranışını yerel kanama gözlemlemek ve temiz bir kafese dönün. Tüm enjekte fareler tekrar dolaba enjeksiyonları iyi tolere emin olmak için kafes dönmeden önce gözlemlemek.
  3. Enjeksiyon her 7 gün deneme sona ermesi kadar yineleyin.
    1. Ne zaman fare genel sağlık alçaltır deneme bitirmek: otelde değil yeme veya içme, soluk pençeleri görünümünü, herhangi bir cilt altı kanama, bir nefes darlığı, etkinlik, alt ekstremite ve/veya dokunmatik kitlesel bir felç azaldı Karın görülmektedir.

4. hastalık ilerleme değerlendirilmesi

  1. Her gün MM.1S-Luc-mCherry hücre enjeksiyon sonra fareler genel durumunu değerlendirmek. Fareler geliştirirseniz ödeme özel ilgi alt bacaklarda felç ediyor.
  2. Bir içinde vivo görüntüleme sistemi 1 x bir hafta önce SWCNT-anti-MALAT1 enjeksiyon kullanarak tümör büyüme değerlendirin.
    1. Taze 15 mg/mL D-biyoluminesans 1 x PBS ile hazırlayın.
    2. Bir isoflurane Buharlaştırıcı (indüksiyon için % 3-5 ve fareler durumuna bağlı olarak bakım için % 1-3) ile fareler anestezi.
    3. İntraperitoneally 150 mg/kg D-biyoluminesans her fare enjekte, 5 dk önce görüntüleme; o zaman, yüzükoyun fareler bir spektrum görüntüleme sistemi ile görüntü.
    4. Işıma doygunluk ulaşılıncaya kadar her 2 dk, farelerin sıralı görüntüleri toplamak. D-biyoluminesans alımı/sinyal göre aralığı süresini ayarlayın.
  3. CO2 deney sona erdirilmesi ulaşıldığında fareler kurban için kullanın.
  4. Bu bir MM Dissemine modeli olduğu için fareyi aşağıdaki gibi işlem.
    1. Fareyi diseksiyon önce tartın.
    2. Periferik kan kalp kan hücresi sayaç makine tarafından gerçekleştirilen bir tam kan sayımı (CBC) tahlil için toplamak. Beyaz kan hücreleri ve kırmızı kan hücreleri sayar, hem de oranı lenfositler, birincil dizin vardır.
    3. Dalak yalıtmak ve tartmak. Dalak/vücut ağırlığı oranını hesaplama; düşünün > Dalak büyümesi olarak % 0.5.
    4. Kemik iliği, dalak, lenf nodu, böbrek doku ve doku görünür metastaz ile toplamak.
    5. Fareyi bir felç alt ekstremite geliştirilen omurga toplamak.
    6. RNA ve protein kemik iliği örneklerinden ayıklayın.
    7. Tüm kalan dokular formalin içinde düzeltmek.
    8. Kalsiyumun için 0.25 M EDTA çözüm (pH 8.0) kemik örnekleri 5 gün sonra 24 h fiksasyon için bırakın.
    9. Uzun süreli depolama için %75 alkol tüm örneklerini bırakın.
  5. Luciferase iki gruplar halinde aynı zaman noktalarda sinyal gücünü karşılaştırmak. Her iki grup, her fare kurban tarihleri kaydetmek ve iki grup yazılımı ile hayatta kalma eğrileri hesaplamak.
    Not: Tüm yordamları Şekil 1' de özetlenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Anti-MALAT1 gapmer DNA mm inhibisyon etkisini göstermek için biz MALAT1 ifade çaldı ve H929 ve MM.1S hücrelerinde kullanılan. 48 saat sonra hücre knock-down Verimlilik Analizi için toplanmıştır ve anti-MALAT1 gapmer veya denetim DNA ile hücrelerde apoptoz durumu transfected. qRT-PCR sonuçları (Şekil 2A) Anti-MALAT1 gapmer DNA H929 ve MM.1S hücreleri MALAT1 ifadede verimli bir şekilde yere serdi olduğunu gösterdi. Apoptozis durumunu aşağı düze...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Kanıt lncRNAs kanserler, MM7,8,9dahil olmak üzere çok sayıda fizyolojik ve patofizyolojik yordamlarda yönetmelikte yer almak göstermiştir; Onlar antianlamlı oligonucleotides20,21,22tarafından gerçekleştirilebilir kanser tedavisi için hedef olma potansiyeline sahip. ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) fomivirsen sitomegalovirüs retinitis

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar Lerner Araştırma Enstitüsü proteomik, genomik ve görüntüleme göbek onların yardım için teşekkür ederiz ve destek. Fonlama: Bu eser mali NIH/ncı hibe R00 CA172292 (J.J.Z.) ve başlangıç fonlar (için J.J.Z.) ve klinik ve çevirim bilim işbirlikçi (CTSC) Case Western Reserve Üniversitesi temel kullanımı Pilot hibe (için J.J.Z.) tarafından desteklenmiştir. Bu eser Ulusal Sağlık Enstitüleri SIG grant 1S10OD019972-01 ile fon ile satın alınmış Leica SP8 confocal mikroskop kullanılmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
SWCNTsMillipore-Sigma704113
DSPE-PEG2000-AminAvanti Polar Lipidler880128
banyo sonikatörüVWR97043-992
4 mL santrifüj filtreMillipore-SigmaZ740208-8EA
UV/VIS spektrometresiThermo Fisher ScientificaccuSkan GO UV/Vis Mikroplaka Spektrofotometresi808 nm'de 0,0465 L/mg/cm sönme katsayısı
Sulfo-LC-SPDPProteoChemc1118
DTT çözeltisiMillipore-Sigma43815
NAP-5 sütunuGE Healthcare17-0853-01
in vivo görüntüleme sistemiPerkinElmer
NOD. CB17-Prkdcscid/J farelerCharles River lab250
Akış sitometresiBecton Dickinso
LipofectamineInvitrogen11668019Lipofektamin2000
Fetal sığır serumu (FBS)İnvitrojen10437-028
RMPI-1640 ortaInvitrogen11875-093
MALAT1-QF:IDT tarafından sentezlenir Şirket5'- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'
MALAT1-QR:IDT ŞIRKETI5'- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'
GAPDH-QF:IDT Şirketi5'- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3'
GAPDH-QR:IDT Şirketi5'- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'
IDT5'-mC*mG*mA*mA*mA*
*G*G*C*A*A*C*A*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA*mA-3'
kantitatif
Hücre Canlılığı Test KitiPromega CorporationG7570CellTiter-GloLuminesan Hücre Canlılığı Test Kiti
accuSkan GO UV/Vis Mikroplaka Spektrofotometresi ThermoFisher Scientific
santrifüj filtreMillipore-SigmaUFC910008
SPSS yazılımıIBMsürüm 24.0
D-LuciferinMillipore-SigmaL9504
tarafından sentezlenmiştir tarafından sentezlenmiştir tarafından sentezlenmiştir Company kullanılarak PCR Serisi

Kaynaklar

  1. Jiang, X., et al. RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis. Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).
  2. Murakami, T., et al. Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy. Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).
  3. Kam, N. W., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality. Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).
  4. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing. Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).
  5. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway. Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).
  6. Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies. Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).
  7. Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer. Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).
  8. Ronchetti, D., et al. Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma. Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).
  9. Wong, K. Y., et al. Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma. Molecular Cancer. 14, 175(2015).
  10. Schmidt, L. H., et al. The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth. Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).
  11. Ji, P., et al. MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer. Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).
  12. Luo, J. H., et al. Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas. Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).
  13. Guffanti, A., et al. A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing. BMC Genomics. 10, 163(2009).
  14. Cho, S. F., et al. MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression. BMC Cancer. 14, 809(2014).
  15. Handa, H., et al. Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma. British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).
  16. Hu, Y., et al. Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma. Leukemia. , (2018).
  17. Lennox, K. A., Behlke, M. A. Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides. Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).
  18. Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).
  19. Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells. Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).
  20. Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation. Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).
  21. Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma. Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).
  22. Amodio, N., et al. Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity. Leukemia. , (2018).
  23. Highleyman, L. FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration. BETA. 5, (1998).
  24. Smith, R. J., Hiatt, W. R. Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder. JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).
  25. Aartsma-Rus, A. FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides. Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).
  26. Nelson, S. F., Miceli, M. C. FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy. The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).
  27. Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery. American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).
  28. Ali-Boucetta, H., et al. Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics. Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).
  29. Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes. Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).
  30. Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods. International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).
  31. Padilla-Parra, S., et al. Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).
  32. Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery. Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).
  33. Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages. Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).
  34. Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA. Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).
  35. Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).
  36. Lelimousin, M., Sansom, M. S. Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization. Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).
  37. Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers. J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).
  38. Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells. Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).
  39. Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles. American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).
  40. Ruggiero, A., et al. Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

MALAT1 Antisense OligoOligon kleotid letimintraven z EnjeksiyonFare ModeliKemik li iqRT PCRApoptoz nd ksiyonuNanopartik l la letimi
Multipl Miyelom hücre büyümesini Vivo tek-duvar karbon nanotüp (SWCNT) tarafından yapılan bir baskı-MALAT1 antianlamlı Oligos teslim
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.