Yöntem makalesi

Asit maserasyon yöntemini kullanarak tüm böbrek netron numarasının tahmini

DOI:

10.3791/58599

⸱

22 Mayıs 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology and Toxicology, The University of Mississippi Medical Center, 2Department of Medicine, Division of Nephrology, Rush University Medical Center, 3Department of Medicine, Division of Nephrology, The University of Mississippi Medical Center, 4Department of Neurology, The University of Mississippi Medical Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bütün böbrek netron sayısının tahminleri klinik ve deneysel olarak önemli olup, ne, sayısı ile böbrek ve kardiyovasküler hastalık riski arasında ters bir ilişki olduğu için. Burada, tüm böbrek netron sayısının hızlı ve güvenilir tahminlerini sağlayan asit maserasyon yönteminin kullanımı gösterilmiştir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nephron bağış bir bireyin doğduğu toplam nefron sayısını ifade eder, insanlarda nefrogenit gebelik 36 hafta tarafından tamamlanmış ve yeni nefron Doğum sonrası oluşturulur. Netron numarası, Doğum sonrası zaman içinde herhangi bir noktada ölçülen nefron toplam sayısını ifade eder. Hem genetik hem de çevresel faktörler hem netron bağış hem de sayıyı etkiler. Daha düşük netron tedavisi veya sayısına sahip bireyler böbrek veya kardiyovasküler hastalık gelişimi açısından daha yüksek bir risk altında olduğu düşünülmektedir gibi belirli genler veya faktörlerin nefrogenik ve netron kaybı veya ölümü sürecini nasıl etkilediğini anlamak önemlidir. Bir kişinin ömür boyu boyunca çevresel pozlarının netron numarasını nasıl etkilediğini anlamak, gelecekteki hastalık riskinin belirlenmesinde de hayati önem taşır. Böylece, tüm böbrek netron numarasını hızlı ve güvenilir bir şekilde değerlendirmek yeteneği, nefrogenit veya netron kaybına katkı sağlayan veya teşvik eden mekanizmaları daha iyi anlamak için temel bir deneysel gerekliliktir. Burada, Damadian, Shawayri ve Bricker tarafından açıklanan prosedüre göre tüm böbrek netron numarasının tahmin edilmesi için asit maserasyon yöntemini tarif ediyoruz, hafif modifikasyonlar ile. Asit maserasyon yöntemi, daha gelişmiş, pahalı olsa da, manyetik rezonans görüntüleme gibi yöntemler kullanılarak Belirlenenlerin% 5 ' i içinde olan netron sayısının hızlı ve güvenilir tahminler (glomeruli sayma tarafından değerlendirilir) sağlar. Dahası, asit maserasyon yöntemi çok sayıda numune veya deneysel koşullarda ne, sayısını değerlendirmek için mükemmel bir yüksek verimlilik yöntemidir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Netron hem temel yapısal hem de böbrek1' in fonksiyonel birimidir. Yapısal olarak, netron Bowman kapsülü içinde bulunan glomerülden (kapiller ve podositler) ve böbrek tübülü oluşur, proksimal tübül oluşan, Henle döngü, ve toplama kanalına sona erer distal tubüs. Fonksiyonel olarak, netron rolü su ve elektrolit filtrasyon ve reemilimi ve atıkların salgılanmasını olduğunu. Genel olarak, nefrogenis tamamlanan 36 gebelik hafta insanlarda ve kısa bir süre sonra fare ve sıçan2gibi çeşitli türler doğumdan sonra. Nefron bağış, bir bireyin doğduğu toplam nefron sayısını ifade eder, zira netron sayısı her zaman Doğum sonrası3olarak ölçülen nefron toplam sayısıdır. Netron numarası ve glomerüler sayı terimi sıklıkla birbirinin yerine kullanılır. Çünkü netron başına sadece bir glomerülden vardır, glomerül numarasının değerlendirilmesi ne, sayısı tahmin için önemli bir vekil olduğunu.

Netron bağış ve netron sayısının değerlendirilmesi, klinik ilginin değerlendirilmesinin netron bağış ve azalmış netron numaraları arasında bir ilişki gösterdiği gibi kardiyovasküler hastalığın daha fazla görülme sıklığı4,5 ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. otopsi sırasında böbreklerdeki bulgulara dayanarak, Brenner hipertansif bireylerin normotensif bireyler16daha düşük toplam nefron sayısı ile sunulan görüldü. Böylece, Brenner ne, sayısı ve daha sonra yaşam içinde hipertansiyon gelişimi riski arasında ters bir ilişki olduğunu hipotez. Brenner aynı zamanda, netron sayısında bir azalma olan nöfrisi tarafından telafi edildiğini hipotez. Böbrek normal filtrasyon hızını korumak için, kalıntı nefron onların glomerüler yüzey alanını artırarak telafi (glomerüler hipertrofisi), böylece Renal fonksiyon netron kaybı herhangi bir olumsuz etkisini azaltmak için çalışıyor4 ,16.

Kısa vadede koruyucu iken, glomerüler hipertrofisi, uzun vadede, artan sodyum ve sıvı tutma yol açar, artan ekstrellüler sıvı hacmi, ve arter kan basıncında artar, daha fazla artan bir kısır döngüye yol glomerüler kapiller basıncı, glomerüler Hiperfiltrasyon ve netron skarlık (skleroz) ve yaralanma4,16.

Tahminlerin veya netron numarasının sayılarının alınması, birkaç deneysel avantaj sunar: 1) nefrogenit süreci ile ilgili bilgi sağlar, bu da embriyo veya maternal-fetal ortamda belirli genler veya faktörlerle bağlantılı olabilir ve 2) kalp-damar hastalığı olan bir ne, sayısı ilişkisi vardır ve böylece, ne, sayısının tahminlerinin gelecekteki kardiyovasküler riski tahmin etmek için kullanılabileceği potansiyeli vardır2,17,18, 19 , 20 tane , 21 , 22. maternal-fetal çevreye ek olarak, çeşitli hastalıklar doğrudan netron numarası ve böbrek fonksiyonunu etkiler, ateroskleroz dahil, diyabet, hipertansiyon, ve hatta normal yaşlanma2,9, 10,11,12,22,23. Bu nedenle, tüm böbrek netron sayısının değerlendirilmesi, bir kişinin hayatı boyunca nefrogeninin (i.e.netron Endowment) ve netron numarasını etkileyen genetik ve çevresel faktörleri ve ortaya çıkan etkileri anlamak önemlidir böbrek fonksiyonu ve kardiyovasküler sağlık üzerinde.

Şu anda, her biri kendi avantajları ve sınırlamaları24,25,26,27,28 olan netron numarasının belirlenmesi ve ölçülmesine yönelik çeşitli yöntemler mevcuttur ,29,30. Tüm böbrek netron sayısını belirlemek için sofistike Yöntemler, disloji/fraksiyoncu yöntemi ve manyetik rezonans görüntüleme25,26gibi stereolojik yöntemler içerir. Genellikle tüm böbrek ne, sayısını belirlemek için altın standardı olarak kabul, disasyon/fraksiyoncu yöntemi hem pahalı hem de zaman alıcı. Manyetik rezonans görüntüleme ve işlemede son gelişmeler ve iyileştirme, her netron bireysel olarak saymak için Araçlar sağladı. Ancak, manyetik rezonans görüntüleme sadece zaman alıcı değil, aynı zamanda son derece pahalıdır. Buna ek olarak, hem disasyon/fraksiyoncu yöntemi hem de manyetik rezonans görüntüleme, gelişmiş teknik uzmanlık gerektirir, böylece araştırma laboratuvarlarının çoğunda bu tür yöntemlerin kullanımını kısıtlamaktadır.

Ne, sayısının belirlenmesinde çoğu Yöntem, glomerüllerin tanımlanmasını temel alarak sayar veya tahminler yapar, böylece yapısal olarak kolayca tanımlanabilir. Bu yazıda tüm böbreklerde ne, sayısını tahmin etmek için asit maserasyon yöntemi tarif edilir ve27' dir. Asit maserasyon yöntemi hızlı, güvenilir ve diğer yöntemlerden daha az pahalıdır, örneğin disik/fraksiyoncu yöntemi ve manyetik rezonans görüntüleme gibi. Dahası, asit maserasyon yöntemi, manyetik rezonans görüntüleme26kullanılarak belirlenen aralıktaki içinde olduğu bildirilmiştir netron numarasının son derece tekrarlanabilir tahminler sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aşağıda listelenen sarf malzemeleri ve reaktifler, tek bir fareyle tüm böbrek netron numarasının belirlenmesi için, yani iki böbrek. Sıçan için asit maserasyon yönteminin kullanımı için değişiklikler yıldız ile tanımlanır. Tüm deneysel protokoller, Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Ulusal Sağlık Kılavuzu Enstitüleri 'ne konmuştur ve Mississippi Tıp Merkezi Üniversitesi 'nde kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.

1. böbrek yalıtım prosedürü

  1. Fare (veya diğer türler) tartmak ve bir izofluran ile ötenize (% 5-8%) doz aşımı veya pentobarbital (150 mg/kg intraperitoneal enjeksiyon).
  2. Fare ötenize edildikten sonra, orta çizgi boyunca ince cerrahi makas kullanarak karın boşluğunu açın.
  3. Dikkatle bağırsak ve üreme adipoz karın boşluğunun sağ tarafına kaldırın. Brüt diseksiyon, sol böbrek izole. İnce cerrahi makas kullanarak, sol böbrek arter ve ven kesmek ve dikkatle sol böbrek kaldırmak, uygun etiketli bir (fare numarası/tanımlayıcı) içine böbrek yerleştirerek fosfor-tamponlu tuzlu (PBS) içeren ağırlık tekne.
  4. Doğru böbrek için prosedürü tekrarlayın.
  5. Her böbreğini ilgili tartım teknesinden çıkarın ve PBS ile önceden nemlendirilmiş bir cerrahi gazlı bez üzerine yerleştirin.
  6. Böbrek cerrahi gazlı bez üzerinde bırakarak, hızlı bir şekilde herhangi bir yapışan böbrek dışı doku kaldırmak (örneğin perirenal anjiyomiksoma adipoz veya adrenal bezi) böbrek kapsülünün kaldırılması ile takip. Her böbreği bireysel olarak tartın, sol ve sağ böbreğin ağırlığını laboratuvar defterinde ayrı olarak kaydetme.

2. homojenizasyon, Inkübasyon ve süzme prosedürleri

  1. Her böbrek tartılır sonra, PBS her ağırlık tekne drenaj ve uygun etiketli tartım teknesine geri böbrekler yerleştirin. Temiz bir jilet kullanarak böbreğini ikiye kesebilir, uzunlamasına. Her böbrek yarısını aşağı bakacak şekilde yerleştirin ve her yarısını 2 mm veya daha küçük parçalara kesin.
  2. Aynı Razorblade kullanarak, dikkatle toplamak ve etiketli 15 mL konik tüp içine doğranmış böbrek parçaları yerleştirmek (fare numarası/tanımlayıcı; sol karşı sağ böbrek).
  3. Yeni bir jilet kullanarak, ters böbrek için prosedürü tekrarlayın. Ayrı etiketli 15 mL konik tüp içine doğranmış böbrek yerleştirin.
  4. İyi havalandırılmış bir duman kapında, her 15 mL konik tüpte 5 mL 6 M hidroklorik (HCl) asit ekleyin.
  5. Konik tüp için kapağı değiştirin, yavaşça böbrek/HCl karışımı karıştırın ve 15 mL konik tüp 37 °C ' de 90 dk (sıçan böbrekleri için * 120 dk) olarak ayarlanan bir ısıtılmış su banyosuna yerleştirin.
  6. Kısaca her 15-mL tüp her 15 dakikada kuluçdak sırasında tüm doku HCl asit maruz kalmasını sağlamak için karıştırılır.
  7. 5 mL şırıngaya 18-G iğne takın (sıçan için * 10 mL şırınga) ve şırınga pistonu dikkatle çıkarın. Şırınga bir 50 mL konik tüp (tüp #1) bir duman kaputu yerleştirin.
  8. Su banyosundan böbrek/HCl çözeltisi çıkarın ve şırınga açık ucuna doku solüsyonu dökün ve bir test tüp raf içinde 15 mL konik tüp kenara ayarlayın. Dikkatle piston değiştirin ve yavaşça iğne yoluyla çözüm ekstrüzyon ve tüp #1 gibi piston itin.
  9. 15 mL konik tüpü 5 mL PBS çözeltisi ile yıkayın. Girdap PBS 15-mL konik tüp böylece herhangi bir kalan böbrek dokusu çözünmek için.
  10. Yine, dikkatle 18-G iğne içeren 5 mL şırıngadan pistonu kaldırmak ve şırınga açık ucuna 15 mL konik tüp içeriğini dökün. Pistonu dikkatlice değiştirin ve şırıngayı hafifçe aşağı doğru tüp #1 içine itmek suretiyle enjektörü temizleyin. Bu işlemi 2x olarak tekrarlayın (Toplam 3x yapılır).
  11. Yeni 5 mL şırıngaya 21-G iğne takın (sıçan için * 10 mL şırınga) ve şırınga pistonu dikkatle çıkarın. Şırıngayı, 21-G iğne ile yeni bir 50-mL konik tüpüne (tüp #2) yerleştirin.
  12. 21-G iğne içeren şırınga açık ucuna tüp #1 içeriğini dökün. Şırıngayı dikkatlice takın ve şırınga pistonu hafifçe itmek ve ekstrüze solüsyonu tüp #2 içine koyarak şırıngayı temizleyin.
  13. 5 mL PBS çözeltisi ile yıkama tüpü #1. Girdap PBS tüp #1 böylece kalan böbrek dokusu çözünmek için.
  14. Yine, dikkatle 18-G iğne içeren 5 mL şırıngadan pistonu kaldırmak ve şırınga açık ucuna tüp #1 içeriğini dökün. Dikkatli bir şekilde pistonu yerine takın ve şırıngayı hafifçe aşağı doğru iterek, boru #2 ekstrüzyon çözeltisi ile temizleyin. Bu işlemi 2x olarak tekrarlayın (Toplam 3x yapılır).
  15. Tüp #2 50-mL hattına kadar ek PBS ekleyerek 50 mL 'ye kadar boru #2 toplam hacmini getirin.
  16. Bir buzdolabı içinde bir rocker plaka üzerinde bir tüp raf içinde böbrek dokusu çözeltisi içeren tüp #2 inkük 4 °C gece (minimum 8-10 h).

3. Glomeruli sayımı ve nephron numarasının Extrapolasyonu

  1. Soğutucudan tüp #2 çıkarın ve homojen bir çözüm oluşturmak için tüpün birkaç kez hafifçe ters çevirme ile pelleted doku pelletini. İşlendikten sonra 5 d içinde glomerül sayma öneririz.
  2. Dikkatle kısım 500 μL böbrek çözeltisi 12-kuyu plaka tek bir kuyu içine. Bu 2x tekrarlayın, her bir kısım ayrı bir kuyuya yerleştirerek böylece böbrek başına böbrek çözeltisi üç kuyuları vardır, triplicate analizi için.
  3. 1:1 seyreltme için böbrek çözeltisi içeren üç kuyunun her biri için 500 μL PBS ekleyin.
  4. Ters bir mikroskop kullanarak, iyi başına glomerül sayısını saymak. Sayım, her bir kuyunun altına yerleştirilen 16 ayrı bölümden oluşan bir ızgara kullanılarak desteklenir. Her gridded bölüm başına glomerül sayısını saymak ve sonra iyi başına glomerül toplam sayısını almak için ızgara başına sayım toplamı. Glomeruli küresel yapısı ile kolayca tanımlanabilir. Ek tanımlayıcılar, kan dolu kılcal damarların yanı sıra, bireysel glomerüllerin gövdesine bağlı kalan ön veya sonrası arterioller nedeniyle kırmızımsı bir ton içeriyordu (Şekil 1).
  5. Glomerül toplam sayısı üç kuyuların her biri olarak sayılan ekleyin ve daha sonra üç tarafından glomerül ortalama sayısı için ikiye böler böbrek çözeltisi 500 μL başına. Eğer iyi başına glomerül ortalama sayısının farkı% 10 ' dan büyükse, ne, sayım prosedürü tekrarlayın, böbrek çözeltisi homojen doğası yakın dikkat. Çoğalan glomerül sayısı iyi kez 100 böbrek başına glomerül ortalama sayısı için sayılır. Toplam netron sayısı böbrek başına veya böbrek ağırlığı, mg veya g dokusu kullanılarak ifade edilebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aşağıda hipertansiyon kurulan bir fare modeli ve yaş ile ilgili kronik böbrek hastalığı bir genetik sıçan modeli tüm böbrek netron numarasının temsili tahminleri vardır. Glomerüllerin anahtar tanımlayıcı özellikleri, örneğin ön veya post-arteriolar veya tübüler yapıları ile veya bağlı olmayan küresel bir yapı gibi, asit maserasyon yöntemine yeni olanlar için vurgulanır (Şekil 1).

İlk deneysel örnekt...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İyi deneysel teknikle, asit maserasyon yöntemi tüm böbreklerde netron numarasını tahmin etmek için idealdir. Böbrek asit içinde çözünmüş olsa da, glomerül büyük ölçüde bozulmamış kalır ve kolayca tanımlanabilir, bireysel glomerül sayımı nispeten kolay ve basit hale. Asit maserasyon tekniği özellikle çeşitli nedenlerle avantajlıdır. İlk olarak, asit maserasyon yöntemi gider ve fiziksel çaba açısından nispeten az gerektiren hızlı ve kullanışlı bir yöntemdir. Asit maserasyon yöntemini gerçekleştirmek için gereken tüm reakti...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (R01HL107632) tarafından kısmen destekleniyordu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
İzofluran anesteziAbbott Laboratuvarları05260-05
İzofluran buharlaştırıcı sistemi ve akış ölçerBraintree ScientificVP ITıbbi sınıf oksijen kaynağını içerir
Leica Ters Mikroskop DMIL LEDLeica MicrosystemsDMIL LEDHerhangi bir marka ayrıca uygun
Dijital su banyosuFisher Scientific2239Herhangi bir marka uygun
ToughCut İnce cerrahi makasGüzel Bilim Aletleri14058-1125 mm kesme kenarı, 11,5 cm uzunluk; İpuçları: keskin-keskin; Uç şekli: düz
Mikro diseksiyon forseps 4 1/4 inç.Biomed Res Instruments, Inc10-1760Kavisli uçlu
Pleksiglas levha 5 inç x 7 inçUygun herhangi bir kaynakn/aHerhangi biri ayrıca uygun Altıgen
polistiren tartı kabıFisher Scientific02-2002-100Herhangi biri de uygun
Tıraş bıçağıFisher Scientific12-640Tek kenarlı karbon çeliği 0.009
Gazlı bez sünger 4 x 4 inç. 8 katlıFisher ScientificMSD-1400250
10x konsantre fosfat tamponlu salin (PBS)Sigma AldrichP5493-4L1x 'ye seyreltin;
6 N Hidrokolik asit çözeltisiSigma Aldrich3750-32
15 mL konik santrifüj tüpüFisher Scientific14-959-70CHerhangi biri de uygun
50 mL konik santrifüj tüpüyapmak Fisher Scientific14-959-49AHerhangi bir marka ayrıca uygun
Tek kullanımlık 5 mL şırıngaCole PalmerEW-07944-06Herhangi bir marka da uygun
18G1.5 tek kullanımlık iğneFisher Scientific14-826-5DHerhangi bir marka da uygun
21G1.5 tek kullanımlık iğneFisher Scientific14-826-5BHerhangi biri de uygun hale getirir
Kapaklı 12 kuyulu çok kuyulu hücre kültürü plakalarıCole Palmer#FW-01959-06Herhangi biri de uygun
Polipropilen modüler test tüpü rafıCole Palmer#EW-06733-0015 ve 50 mL konik boruları barındırabilir; herhangi bir de uygun yapmak

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hall, J. E., Guyton, A. C. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 13th, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
  2. Wang, X., Garrett, M. R. Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models. Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).
  3. Didion, S. P. A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension. Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).
  4. Brenner, B. M. Nephron adaptation to renal injury or ablation. American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).
  5. Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension. Hypertension. 68, A052(2016).
  6. Luyckx, V. A., Brenner, B. M. The clinical importance of nephron mass. Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).
  7. Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension? American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).
  8. Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man. The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).
  9. Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. Structural and functional changes with the aging kidney. Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).
  10. Denic, A., et al. The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging. Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).
  11. Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. Nephron number in patients with primary hypertension. The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).
  12. Hoy, W. E., et al. Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).
  13. Hoy, W. E., et al. Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index. Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).
  14. Hughson, M. D., et al. Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race. Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).
  15. Puelles, V. G., et al. Glomerular number and size variability and risk for kidney disease. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).
  16. Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other? American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).
  17. Clark, A. T., Bertram, J. F. Molecular regulation of nephron endowment. American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).
  18. Benz, K., et al. Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number. American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).
  19. Zhao, H., et al. Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud. Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).
  20. Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice. Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).
  21. Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice. Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).
  22. Stelloh, C., et al. Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria. Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).
  23. Galinsky, R., et al. Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep. American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).
  24. Bertam, J. F., et al. Why and how we determine nephron number. Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).
  25. Nyengaard, J. R. Stereologic methods and their application in kidney research. Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).
  26. Beeman, S. C., et al. Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI. American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).
  27. Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog. Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).
  28. Bonvalet, J. P., et al. Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs. The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).
  29. Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs. Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).
  30. Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. Improved method for the isolation of mouse glomeruli. Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).
  31. Wang, X., et al. Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model. Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).
  32. Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study. Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).
  33. Fassi, A., et al. Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit. Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).
  34. Wintour, E. M., et al. Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment. The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).
  35. Van Vuuren, S. H., et al. Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy. PLoS One. 7 (11), e49735(2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Nefron Say s TahminiGlomeruli Say mB brek DiseksiyonuHidroklorik Asit lemiDoku HomojenizasyonuPBS ile Y kamanverted MikroskopiT m B brek AnaliziY ksek Kapasiteli Tarama

İlgili makaleler