Yöntem makalesi

3D dinamik kültür sistemi ile bir çok katmanlı mezenkimal kök hücre levha inşaatı

DOI:

10.3791/58624

⸱

20 Ekim 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory for Regenerative Medicine, Ministry of Education, Jinan University, 2Department of Developmental and Regenerative Biology, Jinan University, 3Nansha College Preparatory Academy, 4Department of Cardiology, First Affiliated Hospital of Jinan University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale uygun kök hücre özelliği ile çok katmanlı kök hücre tabloları oluşturmak için verimli ve uygun bir yöntem sağlar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kök hücre tedavisi bir umut verici yaralanan organ ve doku Yenileyici gelecekteki gösterir ve hücre sayfası teknik düşük hücre saklama ve hedef bölge içinde yoksul hayatta kalma artırmak için geliştirilmiştir. Ancak, vitro İnşaat sürecinde acilen kök hücre bioactivity bakımı ve hücre sayfası içinde hücre miktarı artan bir çözüm gerekir. Burada, bu protokole uygun kök hücre bioactivity ve en uygun kullanım ile bir çok katmanlı hücre sayfası oluşturmak için bir yöntem sunuyor. Decellularized domuz kalp zarını (DPP)2 (PLA2) decellularization yöntemi olarak hücre sayfası iskele fosfolifaz tarafından hazırlanan ve sıçan kemik iliği mezenkimal kök hücre (BMSCs) izole ve numaralı seribaşı hücreler olarak genişletilmiş. Geçici çok katmanlı hücre sayfa yapısı RAD16 kullanarak inşa edilmiştir-Ben peptid hidrojel. Son olarak, hücre sayfası üç boyutlu (3D) yapısı stabilize etmek dinamik perfüzyon sistemi ile kültürlü ve 48 saat kültür vitrotakip hücre sayfası alınamadı. Bu iletişim kuralı bir çok katmanlı kök hücre sayfası oluşturmak için verimli ve uygun bir yöntem sağlar ve hücre sayfası bir olumlu kök hücre terapisi ürün olarak gelecekte geliştirilebilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kök hücre tedavisi birçok hastalık için etkili bir tedavi olarak bildirilmiştir; Ancak, düşük hücre saklama ve hedef bölge içinde yoksul hayatta kalma kritik konularda geleneksel kök hücre enjeksiyon takip kalır. Bu sorunu çözmek için doku mühendisliği bilim adamları hücre sayfası tekniği geliştirdi. Monolayered hücre sabıkası olduğu gibi hücre dışı matriks ile öncelikle sıcaklık-yanıt kültür çanak1kullanılarak hazırlanan ve kök hücre saklama ve hayatta kalma hazır içinde önemli gelişmeler takip çalışmalarına bildirdi alan2,3. Yöntemler arasında çok katmanlı hücre sayfası oluşturmak hüc....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm kök hücre ve hayvan deney yordamlar bakım ve kullanım Laboratuvar hayvanlarının Ulusal Kılavuzu etik kurallarına göre yürütülen ve Jinan Üniversitesi hayvan bakım ve kullanım Komitesi (Guangzhou, Çin Halk Cumhuriyeti) tarafından onaylanmış.

1. hazırlanması PLA2 Decellularization ile DPP iskele yöntemi14

Not: PLA2 decellularization yönteminin şematik için Şekil 1A ' ya bakınız.

  1. 100 mL 200 U/mL PLA2 çözeltisi hazırlamak. 0.5 g sodyum deoxycholate ve PLA2 2 mL 198 mL karbonat tampon çözeltisi ekleyin. Bu ç....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çok katmanlı kök hücre sayfası inşaat şematik resim 1' de gösterilen. Hücre sayfası iskele PLA2 decellularization yöntemi tarafından hazırlanması için ilk adımdır. İskele üzerinde bağlı olarak, geçici 3D hücre yapısı kök hücre RAD16-1 peptid hidrojel ile karışımı ile inşa edilmiştir. Uygun kök hücre bioactivity ve en iyi mekanik gücü ile bir çok katmanlı hücre sayfası elde etmek için hücre sayfası dinamik perfüzyon sisteminde kültürlü. Dinamik besl.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mevcut iletişim kuralı çok katmanlı bir MSC sayfası oluşturmak için verimli bir yöntem bildirir. Bu hücre sayfasını en iyi mekanik güç, yüksek hücre tohumlama yoğunluğu ve olumlu kök hücre bioactivity sergiler. BMSCs örnek olarak kullanarak, 3D hücre yapısı hızlı bir şekilde RAD16 ile inşa edilmiştir-Ben peptid hidrojel. Dinamik perfüzyon sistemi kültürlü sonra çok katmanlı BMSC sayfası başarıyla alındı ve kök hücre işaretlerinin yüksek bir ifade BMSCs korumak.

Geçici çok katmanlı hücre yapısı.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin tarafından (grant numarası 31771064); desteklenmiştir Bilim ve teknoloji planlama projesi, Guangdong Eyaleti (grant numaraları 2013B010404030, 2014A010105029 ve 2016A020214012); Bilim ve teknoloji planlama proje Guangzhou (grant numarası 201607010063); ve lisans yenilik ve Girişimcilik Eğitim programı (grant numarası 201610559028); Ulusal Bilim Vakfı (sayı 31800819 vermek) Çin genç bilim adamları için.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Fosfolipaz A2Sigma-AldrichP6534
Sodyum deoksikolatSigma-AldrichD6750-100G
Fosfat tamponuGibco BRL89033
Penisilin streptomisin / amfoterisin ve nbsp;Gibco BRL15640055
Tampon bikarbonatSigma-AldrichC3041
Masa yoğunlaştırıcıChangzhou Aohua Instrument Co.
Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium (DMEM)Corning Cellgro10-014-CVR
Güney Amerika fetal sığır serumu Gibco BRL10270-106 / P30-3302
L-GlutaminCorning Cellgro25-005-CI
0.25 Tripsin / 2.21 mM EDTACorning Cellgro25-053-CI
Biyogüvenlik kabiniEsco, SingapurAC2-2S1
Sabit sıcaklık inkübatörü ve nbsp;Esco, SingapurCLS-170B-8
Santrifüj tüpü ve nbsp;Corning430790
EP tüpAxygen31617934
Santrifüj makinesiTOMOS1-16R 
SükrozSigma-AldrichS9378-500G
Pura Matrisi BD354250
Dinamik perfüzyon kültür sistemiMinucells ve MinutissueD-93077
Peristaltik pompaIsmatecIPC N8
Pompa hortumuIsmatecNr.1306
MINUSHEET 1300 Regensburgdoku taşıyıcı bileşenleri 
MINUSHEETRegensburgdinamik perfüzyon sistemi 
MINUSHEET 0006Regensburggaz değişim ekipmanları 
MINUSHEET 0002Regensburg500 mL cam şişe 
MINUSHEET 1301perfüzyon kültür kabı 
KT20183%

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Miyahara, Y., et al. Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction. Nature Medicine. 12 (4), 459-465 (2006).
  2. Narita, T., et al.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

3B Dinamik K lt r SistemiDesel lerize Porcine PerikardKemik li i Mezenkimal K k H creleriRAD16 I Peptit HidrojeliDinamik Perf zyon SistemiH cre Tabakas skelesiK k H cre Biyoaktivitesiok Tabakal H cre Yap sK k H cre Canl l

İlgili makaleler