Antijen spesifik T hücreleri ayırdetmek veya tedaviler nedeniyle onların son derece düşük frekanslı kullanmak zordur. Burada, bu hücreler zenginleştirmek için antijen spesifik T hücrelere bağlayabilirsiniz bir manyetik parçacık geliştirmek için bir protokol sağlar ve daha sonra bunları birkaç genişletmek için hundred-fold karakterizasyonu ve tedavisi için.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Zenginleştirmek ve nadir antijen spesifik T hücreleri Manyetik Nano tanecikleri ile genişletin
Bu makalede
Özet
Özet
Hem zenginleştirmek ve antijen spesifik T hücreleri genişletmek için bir araç geliştirdik. Bu gibi durumlarda yararlı olabilir A) antijen spesifik T hücrelerinin varlığını tespit, B) antijen spesifik yanıt dinamikleri sonda, C) anlamak için nasıl antijen spesifik yanıt-e doğru hastalık durumu otoimmünite gibi etkiler, D) etrafındaki sisi ortadan türdeş olmayan Yanıt için antijen spesifik ya da E T hücreleri) antijen spesifik hücreleri tedavi için kullanmaktadır. Araç üzerinde bir manyetik parçacık antijen spesifik ve T hücre co-stimulatory sinyalleri eşlenik ve yapay antijen sunan hücreler (aAPCs) vadeli temel alır. Teknoloji üretmek basit olduğundan, sonuç olarak, bu kolayca diğer laboratuvarlar tarafından kabul edilebilir; Böylece, Buradaki amacımız imalat ve aAPCs sonraki kullanımını ayrıntılı olarak tarif etmektir. Biz aAPCs için antijen spesifik ve co-stimulatory sinyalleri eklemek, onları antijen spesifik T hücreleri için zenginleştirmek için kullanmak ve antijen spesifik T hücreleri genişletin açıklar. Ayrıca, mühendislik tasarım konuları antijen spesifik T hücreleri karakterize ile deneyimimizin deneysel ve biyolojik bilgileri temel alarak vurgular.
Giriş
Birçok immunotherapies yükselişi ile karakterize ve bağışıklık yanıtı kontrol edebilmek için bir ihtiyaç vardır. Özellikle, adaptif bağışıklık yanıtı özgüllük ve dayanıklılık hücrelerin nedeniyle ilgi biridir. Son zamanlarda, antijen reseptör chimeric T hücre tedavileri kanser tedavisi için onaylanmış olan; Ancak, antijen-reseptörleri kanser1olarak belirli antijenleri yerine ortak hücre yüzey antijeni CD19, kapalı dayanır. Özgüllüğü immunotherapies ayrıca denetim ve sınırlı dinamik bağışıklık yanıtı kanser veya otoimmünite içinde anlama eksikliği muzdarip.
Antijen spesifik yanıt eğitim sorunları biridir onların son d....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bütün fareler Johns Hopkins Üniversitesi'nin kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylanan yönergeleri başına muhafaza.
1. istenen antijen peptit dizisi ile dimerik Binbaşı MHC kompleksi immünglobulin füzyon Protein (MHC-Ig) yükleyin.
Not: H - 2 Kb kullanıyorsanız: IG, daha sonra takip adım 1. 1 '; ayrıntılı iletişim kuralı H kullanıyorsanız-2Db:Ig, daha sonra takip adım 1.2 ile ayrıntılı iletişim kuralı.
- Etkin peptid sırası içine H - 2 Kb yükleme: IG.
- Gerekli arabellek hazırlayın. Denatürasyon arabellek 150 mM NaCl ve 15 mM Na2CO3 bir çözüm deiyonize suyla yapma ve 11,5 iç....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Başarılı zenginleştirme ve genişleme antijen spesifik T hücrelerinin tamamlamak için peptid yüklü MHC-IG ve co-stimulatory molekülleri başarıyla aAPC parçacık iliştirilmesi gerekir. Parçacık Eki 3 yöntemleri üzerinde bağlı olarak, biz başarılı konjugasyon yordam sonucu (Şekil 5a) temsilcisi bazı veriler sağlar. Nitekim, ligand yoğunluğu çok düşük ise, o zaman olacak bu 100 yukarıdaki ligandlar arasındaki doğrusal Aralık etrafında oluştuğu antijen spesifik CD8.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Nanopartikül yapay antijen sunan hücreler (aAPCs) üzerinde esaslı bir roman antijen spesifik T hücre izolasyon teknoloji oluşturduk. Nanopartikül aAPCs peptid-MHC bırakmak antijen spesifik T hücre bağlama ve harekete geçirmek co-stimulatory harekete geçirmek yanında yüzey üzerinde yüklenmiş. aAPCs da paramagnetic ve böylece bir manyetik alanını kullanarak nadir antijen spesifik T hücreleri zenginleştirmek için kullanılabilir. Biz en iyi duruma getirilmiş ve anahtar nanopartikül özellikleri boyut, ligand yoğunluğu ve liga.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar aşağıdaki rakip mali interest(s) ilan: NexImmune ve Johns Hopkins Üniversitesi arasındaki Lisans Sözleşmesi altında Jonathan Schneck üniversitede bu konuda açıklanan ürünler satışı, tarafından alınan telif pay hakkına sahiptir Makale. O da NexImmune kurucusu ve sermaye şirket sahibi. NexImmune'nın Yönetim Kurulu ve Bilimsel Danışma Kurulu üyesi olarak hizmet vermektedir. Bu düzenlemelerin şartları gözden geçirilmiş ve onun çıkar çatışması ilkelerine uygun olarak Johns Hopkins Üniversitesi tarafından onaylanmış.
Teşekkürler
J.W.H. NIH kanser nanoteknoloji Eğitim Merkezi Johns Hopkins Enstitüsü'nde NanoBioTechnology, Ulusal Bilim Vakfı Yüksek Lisans Araştırma Bursu (DGE-1232825) ve kemerler Vakfı bursu destek için teşekkürler. Bu eser destek Ulusal Sağlık Enstitüleri (P01-AI072677, R01-CA108835, R21-CA185819), TEDCO/Maryland İnovasyon Girişimi ve Coulter Vakfı (JPS) tarafından finanse edildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| DimerX I: Rekombinant Çözünür Dimerik İnsan HLA-A2:Ig Füzyon Proteini | BD Biosciences | 551263 | |
| DimerX I: Rekombinant Çözünür Dimerik Fare H-2D[b]:Ig | BD Biosciences | 551323 | |
| DimerX I: Rekombinant Çözünür Dimerik Fare H-2K[b]:Ig Füzyon Proteini | BD Biosciences | 550750 | |
| Vivaspin 20 MWCO 50 000 | GE Yaşam Bilimleri | 28932362 | |
| Vivaspin 2 MWCO 50 000 | GE Yaşam Bilimleri | 28932257 | |
| Saflaştırılmış İnsan Beta 2 Mikroglobulin | Bio-Rad | PHP135 | |
| nanomag-D-spio, NH2, 100 nm nanopartiküller | Micromod | 79-01-102 | |
| Super Mag NHS Aktif Boncuklar, 0.2 ve mikro; m | Okyanus Nanoteknoloji | SN0200 | |
| Anti-Biotin MicroBeads UltraPure | Miltenyi | 130-105-637 | |
| EZ-Link NHS-Biotin | ThermoFisher | 20217 | |
| Sulfo-SMCC Çapraz Bağlayıcı ve nbsp; | ProteoChem | c1109-100mg | |
| 2-İminotiyoolan hidroklorür | Sigma-Aldrich | I6256 Sigma | |
| 96 Kuyu Yarım Alan Mikroplaka, siyah polistiren | Corning | 3875 | |
| FITC Sıçan Anti-Fare Ig, &anda; 1, λ 2, & λ 3 Hafif Zincir Klon & nbsp; R26-46 | BD Biosciences | 553434 | |
| FITC Fare Anti-Ermeni ve Suriye Hamsteri IgG Klon & nbsp; G192-1 | BD Biyolojik Bilimler | 554026 | |
| B6. Cg-Thy1a/Cy Tg(TcraTcrb)8Rest/J (transgenik PMEL) fareler | Jackson Laboratuvarı | 005023 | |
| C57BL/6J (B6 vahşi tip) fareler | Jackson Laboratuvarı | 000664 | |
| CD8a+ T Hücre İzolasyon Kiti, Fare | Miltenyi | 130-104-075 | |
| MS Sütunları | Miltenyi | 130-042-201 | |
| LS Sütunları | Miltenyi | 130-042-401 | |
| Streptavidin-Phycoerythrin, SAv-PE | Biolegend | 405203 | |
| 0.75 inç & N52 disk mıknatısları; | K & J Magnetics | DX8C-N52 | |
| APC anti-fare CD8a Antikoru, klon 53-6.7 | Biolegend | 100711 | |
| CANLI / ÖLÜ Sabitlenebilir Yeşil Ölü Hücre Leke Kiti, 488 nm uyarma için | ThermoFisher | L-34969 |
Kaynaklar
- Prasad, V. immunotherapy: Tisagenlecleucel-the first approved Car-t-cell therapy: implications for payers and policy makers. Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (1), 11(2018).
- Jenkins, M. K., Moon, J. J.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
