Enfeksiyon sırasında Listeria Monositogenez beyin kolonize etmek kan - beyin bariyerini geçiş yapabiliyor. Bu protokol için organlara enfeksiyon farelerin takip bakteriyel kolonizasyon değerlendirmek nasıl gösterir. Beyin parankimi bakteriyel numaraları belirli tespiti için bütün organ perfüzyon gerçekleştirmek için bir yordam sağlanmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Listeria Monositogenez Enfeksiyon beyin
Bu makalede
Özet
Özet
Listeria Monositogenez gıda kaynaklı hastalık ile sık sık ilişkili hücre içi bir bakteriyel patojen var. L. Monositogenez kan - beyin bariyerini (BBB) çapraz yeteneği ile ilgili olarak bu hayati menenjit ve ensefalit yol açabilir. BBB çeşitli toksik metabolitleri ve mikrobiyal patojenler enfeksiyonu takip kanda bulunan beyin microenvironment karşı korur ve bu nedenle beyin homeostazı destekler. Hangi L. Monositogenez kan içinde mevcut çapraz BBB enfeksiyonları tam olarak anlaşılamamıştır beyin neden olacak ve orada olmaması da beyin enfeksiyonları L. Monositogeneztarafından eğitim için bir güçlü modeli sisteminin mekanizmaları. Burada, bir basit fare enfeksiyon modeli bakteri BBB kesişiyor olup olmadığını belirlemek ve beyin içinde vivokolonize bakteri yükü quantitate için mevcut. Bu yöntemde, hayvanlar intravenöz L. Monositogenez ile enfekte ve insanca CO2 servikal çıkığı tarafından takip maruz euthanized. Hayvanların kalp perfüzyon virüslü organ hasat öncesinde gerçekleştirildi. Kan perfüzyon önce toplanan ve organ başına bakteri sayısını veya mL kan kan veya organ homogenates agar plakaları dilutions kaplama tarafından tespit edildi ve koloniler sayılması kurdu. Bu yöntem enfeksiyon L. Monositogenez tarafından beyin geliştirmek ve birden çok bakteriyel patojenler çalışma için kolayca adapte edilebilir roman reseptör-ligand etkileşimleri eğitim için kullanılabilir.
Giriş
Gram-pozitif bakteri Listeria Monositogenez fakültatif intraselüler patojen ve en ölümcül gıda kaynaklı patojenler dünya çapında biridir. L. Monositogenez kontamine yiyeceklerin yenmesi listeriosis insanlarda, şiddetli bir invaziv hastalık hedefleme çoğunlukla hamile kadınlar, yenidoğan, Yaşlı ve immün bireyler1yol açabilir. L. Monositogenez önde gelen gıda kaynaklı patojen ABD tarafından ölüm nedenleri arasında yer alıyor ve büyük ölüm oranları listeriosis üzerinden 20-%30, tüm gıda kaynaklı patojenler2için yüksek olarak yüksek. Aşı L. Monositogenez için şimdilik ve bakteri yeteneğini....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan muhafaza ve prosedür boyunca rahatsızlığı en aza indirmek için azami itina ile ele üzeresiniz. Kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi ve tüm federal, eyalet ve yerel yasalara uygun olarak yapılacak bir yöntemdir. Ayrıca laboratuvar deneyleri seviye 2 kılavuzlarınıza uygun olarak yapılacak olduğunu unutmayın.
1. L. Monositogenez fare enfeksiyon çalışmaları için büyüme
- Otoklav beyin kalp infüzyon (BHI) agar orta katı ortam tabak hazırlamak için bir 1 L Erlenmeyer şişesi içinde 500 mL. Medya bir 56 ° C su banyosunda serin ve 100 µg/mL nihai bir konsantrasyon streptomisin eklemek izin verir. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Beyin son derece skarların ve L. Monositogenez hücre tipleri kan3,13' te mevcut enfekte olduğu bilinmektedir. Açıklanan protokolü L. Monositogenez kan - beyin enfeksiyonu farelerde beyin önde gelen bariyerini (BBB) çapraz yeteneğini göstermek için kullanılır. Bakteri BBB vivo içindegeçti belirlemek için perfüzyon fare kan beyin bakteriyel yüklerin belirlenmesi önce gerçekleştirilir. Aksi takdirde, elde e.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
L. Monositogenez hayati meningoensefalit insanlarda neden yapabiliyor. Önceki çalışmalar kan-beyin-bariyer (BBB) geçmeye ve beyin kolonize etmek bakteri yeteneğini gösterdi. Beyin işgalinin üç güzergah enfeksiyon sırasında önerilen: doğrudan penetrasyon BBB bakteriler, mononükleer hücreler3ve aksonal geçiş içinde neden L. Monositogenez suşları tarafından bulunan bakteriler tarafından verilen Gizlilik taşıma rhombencephalitis15. Beyin son derece skarların v.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının bildirin.
Teşekkürler
Bu eser ABD halk sağlığı hizmeti tarafından desteklenen AI103806 Ulusal Sağlık Enstitüleri vermek.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Beyin Kalp İnfüzyon ortamı | Becton Dickinson | 237200 | |
| Streptomisin sülfat ve nbsp; | Amresco | 0382-50G | |
| Petri kapları | VWR | 25384-342 | |
| Gliserol | VWR | 97062-832 | |
| IKA T18 ULTRA-TURRAX Temel Homojenizatör | IKA | 3352109 | Model: T18BS1 |
| Spektrofotometre | Beckman Coulter | DU 800 serisi | |
| BALB/c fareler | Jackson Laboratuvar | Modeli #000651 | |
| 1 mL şırınga | Becton Dickinson | 309659 | |
| 26 G iğneler | Becton Dickinson | 305115 | |
| 21 G kelebek iğneler | Becton Dickinson | 367281 | |
| Etilendiamintetraasetik asit | Sigma-Aldrich | 60004 | |
| 15 mL konik tüpler | VWR | 21008-918 | |
| Yuvarlak tabanlı test tüpleri | VWR | 60819-546 | |
| Fosfat tamponlu salin | Corning | 46-013-CM | |
| Paslanmaz çelik spatula | VWR | 82027-520 | |
| Paslanmaz çelik makas (6,5 inç) | VWR | 82027-592 | |
| Paslanmaz çelik makas (4,5 inç) | VWR | 82027-578 | |
| Paslanmaz çelik künt forseps (4,5 inç) | VWR | 82027-440 | |
| Paslanmaz çelik ince uçlu forseps (6 inç) | VWR | 82027-406 |
Kaynaklar
- Radoshevich, L., Cossart, P. Listeria monocytogenes: towards a complete picture of its physiology and pathogenesis. Nature Reviews Microbiology. 16 (1), 32-46 (2018).
- de Noordhout, C. M., et al. The global burden of....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
