Yöntem makalesi

Bakteriyel Pathogen sonda için hücresel ve Organismic düzeyi ana bilgisayar yanıt için kullanma

DOI:

10.3791/58775

⸱

22 Şubat 2019

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology & Immunology, University of Miami Miller School of Medicine, 2Department of Microbiology & Immunology, University of Illinois College of Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz faktörler ana bilgisayar kodlama faaliyetlerini analiz için kullanılan her iki tüp bebek ve içinde vivo enfeksiyonu deneyleri tarif.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayatta kalmak için ve bir kez ökaryotik hücre içinde prolifere bakteriyel patojenler istihdam stratejileri çeşitli vardır. Sözde 'sitozolik' patojenler (Listeria Monositogenez, Shigella flexneri, Burkholderia pseudomallei, FRANCISELLA tularensisve Rickettsia'nin spp.) tarafından enfekte hücre sitozol erişim fiziksel ve enzimatik birincil vacuolar membran aşağılayıcı. Bir kez sitozol Bu patojenler hem çoğalırlar yanı sıra yeni hücre bulaştırmak için ana hücresinin plazma zarı nüfuz için yeterli mekanik Kuvvetleri oluşturmak. İşte, L. Monositogenez (Lm) hücresel enfeksiyon döngüsünün terminal bu adımı koloni oluşturan birim testleri ve Akış Sitometresi tarafından sayısal ve nasıl her iki patojen ve ev sahibi olarak kodlanmış faktörler etkisi örnekleri bu vermek nasıl göstermektedir işlem. Ayrıca yakın bir ilişkiyi Lm enfeksiyon dinamikler kültürlü hücre tüp bebek bulaşmış ve bu fareler türetilmiş karaciğer hücrelerinin enfekte içinde vivo gösteriyoruz. Bu işlev tabanlı deneyleri oldukça basit ve kolayca keşif dayalı yüksek üretilen iş ekranlar için modülatörler ökaryotik hücre işlevinin için ölçeklendirilebilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Enfeksiyon tabanlı deneysel modeller bağımlılığını başlangıç durumu koşullar ev sahibi ve patojen, çeşitli patojen bulaşma stratejileri ve patojen ve ana bilgisayar kullanan işlemler atfederek zorluğu nedeniyle doğal olarak zor olan bağlı olarak sonuçlar. Listeria Monositogenez (Lm) bakteri konak savunma yanıt-e doğru onun genetik ve mikrobiyolojik tractability, hızlı ve ilerleyicidir hücresel enfeksiyonu stratejisini ve nispeten açık nedeniyle soruşturma için ideal bir patojen haline gelmiştir onun cep-organismic düzeyi ve enfeksiyon fenotipleri arasındaki ilişki. Lm hücresel enfeksiyon dört ayrı aşama1ile devam eder: (i) içinde bir çarpıtma; kapalı Lm ile adl hücresel Invasion (II) Lm-yönetmen çarpıtması membran dağılması ve Lm yayın içine sitozol; (III) intracytosolic yineleme; ve her iki bitişik hücreleri (olduğu gibi bir epitel sayfası gibi) enfeksiyon veya soliter hücrelerdeki sonuçları plazma zarı Lm sürümü ekstraselüler ortamın içine (IV) fiziksel nüfuz. Her bu aşamalardan belirli Lmtarafından terfi-kodlanmış faktörler ('virülans faktörleri' anılacaktır), silindiğinde, hücresel ve hayvan modellerinde enfeksiyon kusurları neden. Bu genel enfeksiyon strateji sözde 'sitozolik' patojenler2bir dizi tarafından bağımsız olarak gelişmiştir.

Koloni oluşturan birim (CFU) deneyleri yaygın olarak tüp bebek her ikisi de değerlendirmek için istihdam (yani, hücresel) olarak içinde vivo de (örneğin, organismic) enfeksiyon sonuçları. Ek olarak içinde vivo enfeksiyonlar, özellikle için onların yüksek hassasiyet patojen işgali ve hücre içi hayatta kalma/yayılması için net bir okuma CFU deneyleri sağlar. CFU deneyleri kapsamlı enfeksiyon etkisi Lm ve konak hücre belirleyicileri analiz etmek için kullanılmaktadır. Bu önceki çalışmalarda hücresel istilası ve intracytosolic çoğaltma çözümlemek için olduğu gibi bilgilendirici, CFU deneyleri bilgimizi, en iyi şekilde Lm enfeksiyon işleminin dördüncü aşamasını izlemek için kullanılmayan,: hücresel kaçış. Burada, biz (bundan böyle 'olarak ortaya çıkması' denir) nasıl hücresel kaçmanın bir yolu CFU tahlil (yanı sıra Akış Sitometresi) izlenebilir ve Lm bu aşaması nasıl her iki patojen ve ev sahibi olarak kodlanmış faktörler örnekleri gösteri düzenleyen nispeten basit tarif enfeksiyon döngüsü. Hücresel Lm enfeksiyon döngüsü terminal aşamasının analiz ek patojen ve konak hücre enfeksiyon özgü faktörler ve aktiviteleri tanımlama mümkün yapabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fareler insanca bakım için tüm uygun hükümet kılavuzlarınıza uygun olarak tedavi edildi ve kullanmak, laboratuvar hayvanları Ulusal Sağlık enstitüleri ve bunların kullanımı için tüm bu çalışma Miami Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı tarafından kabul edildi ve kullanım Komitesi (protokol 16-053).

1. enfeksiyon için hücreleri hazırlanması

  1. Fare makrofaj gibi hücre kültürünü ham 264.7 DMEM doku kültürü medya % 10 fetal buzağı serum (bundan böyle DMEM/FCS da adlandırılır) ile takıma yaymak bir 125 mL şişe ve 37 °C/5% CO2' de tutulan bir doku kültürü kuluçka makinesi kullanarak.
  2. Enfeksiyon, önceki gün bir hücre kazıyıcı hücre genişletme balonun kaldırma ve bir 15 mL vidalı kapak konik tüp içinde toplamak için kullanın. Hücreleri vasıl 800 x g 10 dk santrifüj kapasitesi, süpernatant dikkatle boşaltmak ve hücre Pelet DMEM/FCS 1 ml (olmadan antibiyotik) askıya alma ve bir hemasitometre veya bir otomatik hücre sayaç kullanarak titresi belirlemek.
  3. 2 x 106 hücre/ml titresi ayarlamak ve 48-iyi doku kültürü çanak wells için 0,10 mL (2 x 105 hücreleri) ekleyin. Hücre süspansiyon iyi tüm yüzeyine kapsar emin olun.
    1. Plaka hücreleri klimalı ortam daha sonra kaynağı için ek Wells. Aynı zamanda bir 'hiçbir hücre denetimi ' hizmet için üç ek Wells DMEM/FCS 0.10 mL yerleştirin.
  4. Gecede bir doku kültürü kuluçka 37 °C/5% CO2kuluçkaya. Bakteri inoculum hazırlanan ve kullanıma hazır olana ertesi gün, kuluçka kaldırmaz.

2. enfeksiyon için Listeria Monositogenez (Lm) hazırlanması

  1. Bir koloni bir taze çizgili agar plaka ile beyin-kalp infüzyon (BHI) 2 mL aşılamak (< 2 gün) LM ve gecede 37 ° C'de 130 rotasyonlar/dk sallayarak ile kuluçkaya.
  2. Ertesi gün, 0.10 mL 2 ml gecede kültür BHI önceden ısıttı ve 37 ° C'de sallayarak ile optik yoğunluk (OD600) 0,4 ve 0.6 arasında kadar kuluçka devam ekleyin.
  3. Yaklaşık bakteriyel titresi bir ampirik olarak elde edilen dönüşüm formülü kullanarak belirleyin. Bizim laboratuarımızda BHI katlanarak büyüyen bir Lm kültüründe yaklaşık 1.3 x 10 's9 koloni oluşturan birimler (CFU) /OD600. Bakteriyel kültürlerde oda sıcaklığına maruz kalan süreyi en aza indirmek.
  4. Sadece enfeksiyon önce titresi 5 x 107 CFU/mL Önceden ısıtılmış DMEM/FCS eritici kullanarak ayarlayın.

3. enfeksiyon

  1. Hızlı ve hassas, çalışma eklemek 20 µL (1 x 106 CFU; çokluğu enfeksiyon, MOI = 5) taze hazırlanmış Lm inoculum (Adım 2.4 yukarıdaki) için biraz yemek devirme ve dikkatle damlalıklı ucunu örten medyada; yerleştirerek wells,
    Not: iyi damlalıklı ucu duvarlarının dokunmaktan kaçının.
  2. Yavaşça damlalıklı karıştırma sağlamak için her şey içeriğini tamamlamak; sallamak ya da bu kuyunun duvarları üzerinde Lm yayılacak gibi önemli ölçüde plaka eğimli değil. Hücre kültür çanak 37 °C/5% CO2 kuluçka için dönmek.
  3. Klimalı ortam bulaşmamış kuyulardan eritici kullanarak 10 µg/mL gentamisin solüsyonu hazırlayın.
  4. Enfeksiyon (MPI) 30 dakika sonrası, dikkatle gentamisin çözüm (son konsantrasyonu 2,5 µg/mL) ve yavaşça damlalıklı 30 µL 37 °C/5% CO2 kuluçka için hem de daha önce ve dönüş hücre kültür çanak içeriği ekleyin.
  5. 60 MPI CFU tahlil (60 MPI süresi noktası) veya FCM analiz için uygun wells (aşağıda bölüm 4 ve 5, sırasıyla açıklandığı gibi) hasat.
  6. Kalan kuyular için bundan sonra çeşitli zamanlarda ya önce veya, Lm ortaya çıkması tahlil için tamamen medya kuyudan kaldırmak ve klimalı ortam gentamisin ücretsiz 150 µL ile yerine hücre hasat.

4. örnekleme işleme ve hücre içi ve acil Lm CFU tahlil tarafından analizi

  1. Hasat için biraz yemek eğilme ve dikkatli bir şekilde tüm medya kuyudan çıkarın. 0.50 mL distile steril su (dsH2O) kuyuya ekleyin. Sonra 30 s, lysate elde edilen su transferi (100) 1.5 mL microcentrifuge tüp ve şiddetle 10 için girdap s.
  2. 10-1 ve 10-2 dilutions ya 4.5 µL veya 50 µL dsH2O 450 µL için lysate su ve kısaca ayrıntılı karıştırma sağlamak için girdap ekleyerek hazırlayın.
  3. 10 50 µL yaymak0, 10-1 ve/veya lysogeny suyu (LB) Ağar kaplamalar üzerine 10-2 örnekleri.
  4. Acil Lm için (Adım 3.6 yukarıdaki) tahlil, 10 µL overlaying medya kaldırmak ve iki 5 µL aliquots bölmek için: bir aliquot için 5 µL DMEM/FCS ve ikinci aliquot DMEM/FCS 5 µg/mL gentamisin içeren 5 µL ekleyin. İkinci denetim hücre dışı Lm arasında (gentamisin duyarlı) ayıran ve hücre içi Lm (gentamisin sonraki CFU dayanıklı) tahlil.
  5. Oda sıcaklığında 5 dk sonra dsH2O, 10 s için şiddetle girdap 90 µL ve yayılan 50 µL LB agar Tabaklarda ekleyin.
  6. LM kolonileri LB agar plakaları, kuluçka 37 ° C'de 2 gündür takip numaralandır

5. örnekleme işleme ve analiz hücre içi ve acil Lm Akış Sitometresi (FCM) tarafından

  1. HAM 264.7 hücreleri 1,1-4 adımda açıklandığı şekilde hazırlayın. 1 x 106 hücre/mL hücrelere ayarlamak ve 1 mL (1 x 106 hücreler) 6-iyi doku kültürü çanak wells için ekleyin.
  2. Bakteri inoculum 2.1 2.3. adımda açıklandığı şekilde hazırlayın ve inoculum 50 (5 x 107 CFU) MOI için karşılık gelen hacmi içeren hücreleri enfekte.
  3. 1,5 saat sonrası enfeksiyon (HPI), medya Wells ilk kümesinden toplamak ve bütün wells işlenene kadar 500 µL % 4 paraformaldehyde (PFA) ve buz üzerinde yer ile 1.5 mL microcentrifuge tüp yerleştirin.
  4. Hücre içi Lmtoplamak için iyi ve 60 sonra dsH2O 1 mL ekleyin s, lysate elde edilen su ile 500 µL % 4'lük bir 1.5 mL microcentrifuge tüp transfer PFA. 10 s ve bütün wells işlenene kadar buz üzerinde yer için şiddetle girdap. (Örnek işleme adım 5,8 aşağıda açıklanmıştır.)
  5. Kalan wells, medyayı çıkarın ve DMEM/FCS 1 mL hücre dışı Lm öldürmek ve hemen iade hücreleri kuluçka için 5 µg/mL gentamisin ile değiştirin.
  6. 30 dk (2 HPI) sonra medyayı çıkarın ve gentamisin DMEM/FCS ile değiştirin.
  7. 2 ve 4 h (4 ve 6 HPI) sonra ikinci al ve üçüncü adım 5.3 ve 5,4 medya ve lysates toplayarak Puan oluyor.
  8. 10.000 x g 7 dk. Kaldır süpernatant olmadan rahatsız edici Pelet için de tüpler santrifüj kapasitesi.
  9. %4 50 µL kokteyl boyama içinde her Pelet askıya PFA ve phalloidin 15 µL. 20 dk için 4 ° C'de karanlık tüplerde kuluçkaya.
  10. Kuluçka sonra 1 mL FACS arabelleği her tüp ve pipet yukarı ve aşağı karışımı ekleyin.
  11. Tüpler, 10.000 x g 7 dk. Kaldır süpernatant olmadan rahatsız edici Pelet için spin.
  12. Her Pelet 400 µL FACS arabelleği için acele kullanma, ya da 200 µL FACS arabelleği ve % 4'lük 200 µL'askıya alma daha sonraki analizler için depolama Eğer PFA.
  13. Bir Akış Sitometresi örneği çalıştırmak ve toplanan verileri çözümleyebilirsiniz.

6. örnekleme işleme ve Lm kolonizasyon ve ana bilgisayar yanıt karaciğerde analizi

  1. LM 2.1 2.3 adımda anlatıldığı gibi enfeksiyon için hazır olun.
  2. Alt kültür 3 x 106 CFU/mL istenen titresi için gerekli miktarı hesaplamak.
  3. Sadece enfeksiyon önce hesaplanan bakteri ile Önceden ısıtılmış Hank'in dengeli tuz çözüm (HBSS) 1 ml son birimindeki miktarı oranında seyreltin. Fareyi enjekte edilir giriş inoculum bu.
  4. 28 G½ 100U insülin kullanarak, 100 µL (3 x 105 CFU) giriş inoculum çizmek ve herhangi bir görünür hava kabarcıkları kaldırın.
  5. Fare (soy C57BL/6; 6 ve 12 hafta yaşlı arasındaki erkekler) holding kısıtlama yerleştirin ve kuyruk ven genişletmek için ılık su (en fazla 45 ° C) kullanın, sonra giriş inoculum damar içine enjekte.
  6. 10-2 ve 10-3 dilutions LB agar 10bcm levhalar üzerine giriş inoculum, plaka ve gecede 37 ° C gerçek giriş dozu belirlemek için kuluçkaya.
  7. 18 HPI insanca fare (servikal çıkığı tarafından takip CO2 boğulma) ve frontal lob için dış ve iç in ayırın cımbız ve makas kullanarak karaciğer toplamak için steril makas kesim açık fare karın zarını kullanarak ötenazi fare. Karaciğer 6 cm buzda Petri kabına yerleştirin.
  8. Karaciğer küçük küpler halinde kesilmiş ve bir manyetik heyecan bar ile cam şişe içine yerleştirin. 2 mL 2 mg/mL collagenase D DMEM FCS olmadan yeniden ekleyin. Şişeleri 30−45 min için bir manyetik karıştırıcı olarak 37 ° C'de kuluçkaya. Doku homojen bir kez collagenase devre dışı bırakabilirsiniz için DMEM/FCS 3 mL ekleyin.
  9. Hücreleri bir 70 µm hücre süzgeç aracılığıyla daha fazla DMEM/FCS ekleme bir konik tüp filtre.
  10. 10 dk 4 ° C'de cips, süpernatant kaldırmak ve hücre Pelet ACK arabellek kırmızı kan hücreleri parçalayıcı 500 µL içinde askıya almak için 800 x g hücreleri santrifüj kapasitesi.
  11. Hücreleri bildirim arabelleğindeki 5 min için oda sıcaklığında kuluçkaya. 1 mL DMEM/FCS hücrelerde askıya alma.
  12. 10 dk 4 ° C'de cips, süpernatant kaldırmak ve 1 mL DMEM/FCS askıya almak için 800 x g hücreleri santrifüj kapasitesi. Sonra bir hemasitometre veya bir otomatik hücre sayaç kullanarak hücreleri saymak.
  13. 1 x 106 hücre transfer için 1.5 mL microcentrifuge tüp ve cips için döndür. O zaman 1 mL dsH2O ve girdap hücreleri parçalayıcı askıya alma. 50 µL LB plakaları, su katılmamış ve 10-2 dilutions plaka ve 37 ° C'de Lm CFU analiz için numaralandırmak için kuluçkaya.
  14. 1 x 106 hücre hücre sayımları göre her doku örneği için FACS tüpler içine transfer ve 1 mL FACS arabellek ile yıkayın.
  15. 10 dk 4 ° C'de cips ve süpernatant kaldırmak için 800 x g hücreleri santrifüj kapasitesi.
  16. Her antikor ve FACS arabellek için önerilen konsantrasyon göre faiz antikorlar içeren bir antikor kokteyl hazırlamak. Önerilen tutarlarda analizinde kullanılan Malzemeler tablo bakın.
  17. Pelet antikor kokteyl 100 µL içinde askıya alma ve tüpler için 30 dk 4 ° C'de karanlıkta kuluçkaya.
  18. Kuluçka sonra her tüpün FACS arabellek 2 mL ekleyin ve hücreleri askıya alma.
  19. 4 ° C'de cips ve süpernatant atmak için 800 x g hücreleri santrifüj kapasitesi. Öyleyse Pelet 400 µL FACS arabelleği için acele kullanma, ya da 200 µL FACS arabelleği ve 200 µL % 4'askıya sonraya saklamak Eğer PFA.
  20. Hücreleri Akış Sitometresi tarafından analiz (bkz. Adım 5.13).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Patojen ve hücresel enfeksiyon etkileyen ev sahibi olarak kodlanmış faktörlerin rolü değerlendirilmesi
Yukarıda açıklanan enfeksiyon koşulları kullanarak, giriş vahşi tipi Lm yüzde 0.15, kültürlü makrofajlar (şekil 1A) ile ortak kuluçka 1,5 saat sonra kurtarılır. Sonraki 1,5 saat, co kuluçka (3 h sonrası enfeksiyon, HPI) kurtarma uygun Lm 4-fold bir artış oldu ve 3 6 HPI için uygun Lmkurtarma bir...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Onun hızlı ve ilerleyicidir hücresel enfeksiyonu nedeniyle, Lm enfeksiyon etkisi hücresel aktiviteler soruşturma için ideal bir patojen bir programdır. Ana faktörlerin bir Lm hücresel enfeksiyon11,12,13,14olumlu veya olumsuz yönde etkileyen tespit edilmiştir. İki tür ev sahipliği bizim laboratuvar Perforin-2 ve Heme düzenlenir inhibitörü ile karakterize faktörler (P2 ve Merhab...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ACK Lysing TamponuGibco 
ArC Amin Reaktif Kompanzasyon Boncukları Yaşam TeknolojileriA10346
BHI (Beyin Kalp İnfüzyonu) et suyuEMD Milipore110493
Hücre Süzgeci, 70 & mVWR10199-656
Kollajenaz DRoche11088858001
DMEM ortamı Gibco 11965-092
FACS tüpleri BD Falcon352054
FBS - Isı Etkisiz Hale Getirildi Sigma-AldrichF4135-500ML
Hanks' Dengeli Tuz çözeltisiSigma-AldrichH6648-6X500ML
LB agarBüyüme Hücreleri MSMBPE-4040
CANLI/ÖLÜ Sabitlenebilir Sarı Ölü Hücre Lekesi kiti Yaşam TeknolojileriL349S9
Rhodamine Phalloidin Thermo FischerR415
SP6800 Spektral Analiz CihazıSony
Şırınga 28 G 1/2 "1ccBD329461
TPP Doku Kültürü 48 Kuyulu Plakalar ve nbsp;MIDSCITP92048
TPP Doku Kültürü 6 Kuyulu Plaka MIDSCITP92406
UltraComp eBeadseBioscience01-2222-42
Antijen
CD11b Biolegendflurochrome = PE Cy5, seyreltme = 1/100, klon = M1/70
CD11cbiolegendflurochrome = AF 647, seyreltme = 1/100, klon = N418
CD45biolegendflurochrome = APC cy7, seyreltme = 1/100, klon = 30-f11
f4/80biolegendflurochrome = PE, seyreltme = 1/100, klon = BM8
canlı/ölüinvitrogenFlurokrom = AmCyN, Seyreltme = 1/100
Ly6CBiolegendFlurochrome = PacBlue, Seyreltme = 1/200, Klon = HK1.4 MHC
IIBiolegendFlurokrom = AF 700, Seyreltme = 1/200, Klon = M5/114.15.2
NK 1.1BiolegendFlurochrome = BV 605, Seyreltme = 1/100, Klon = PK136
A1049201

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. Listeria monocytogenes - from saprophyte to intracellular pathogen. Nature Review Microbiology. 7 (9), 623-628 (2009).
  2. Ray, K., Marteyn, B., Sansonetti, P. J., Tang, C. M. Life on the inside: the intracellular lifestyle of cytosolic bacteria. Nature Review Microbiology. 7 (5), 333-340 (2009).
  3. Miner, M. D., Port, G. C., Freitag, N. E. Functional impact of mutational activation on the Listeria monocytogenes central virulence regulator PrfA. Microbiology. 154, 3579-3589 (2008).
  4. McCormack, R., et al. Perforin-2 Protects Host Cells and Mice by Restricting the Vacuole to Cytosol Transitioning of a Bacterial Pathogen. Infection and Immunity. 84, 1083-1091 (2016).
  5. Gregory, S. H., et al. Complementary adhesion molecules promote neutrophil-Kupffer cell interaction and the elimination of bacteria taken up by the liver. Journal of Immunology. 168, 308-315 (2002).
  6. Shi, C., et al. Monocyte trafficking to hepatic sites of bacterial infection is chemokine independent and directed by focal intercellular adhesion molecule-1 expression. Journal of Immunology. 184, 6266-6274 (2010).
  7. Pitts, M. G., Combs, T. A., D'Orazio, S. E. F. Neutrophils from Both Susceptible and Resistant Mice Efficiently Kill Opsonized Listeria monocytogenes. Infection and Immunity. 86, 00085(2018).
  8. Carr, K. D., et al. Specific depletion reveals a novel role for neutrophil-mediated protection in the liver during Listeria monocytogenes infection. European Journal of Immunology. 41 (9), 2666-2676 (2011).
  9. Blériot, C., et al. Liver-resident macrophage necroptosis orchestrates type 1 microbicidal inflammation and type-2-mediated tissue repair during bacterial infection. Immunity. 42 (1), 145-158 (2015).
  10. Jones, G. S., D'Orazio, S. E. F. Monocytes are the predominant cell type associated with Listeria monocytogenes in the gut, but they do not serve as an intracellular growth niche. Journal of Immunology. 198, 2796-2804 (2017).
  11. Agaisse, H., et al. Genome-wide RNAi screen for host factors required for intracellular bacterial infection. Science. 309, 1248-1251 (2005).
  12. Cheng, L. W., et al. Use of RNA interference in Drosophila S2 cells to identify host pathways controlling compartmentalization of an intracellular pathogen. Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102, 13646-13651 (2005).
  13. Singh, R., Jamieson, A., Cresswell, P. GILT is a critical host factor for Listeria monocytogenes infection. Nature. 455, 1244-1247 (2008).
  14. Burrack, L. S., Harper, J. W., Higgins, D. E. Perturbation of vacuolar maturation promotes listeriolysin O-independent vacuolar escape during Listeria monocytogenes infection of human cells. Cellular Microbiology. 11, 1382-1398 (2009).
  15. Shrestha, N., et al. The host-encoded Heme Regulated Inhibitor (HRI) facilitates virulence-associated activities of bacterial pathogens. PLoS One. 8, 68754(2013).
  16. Bahnan, W. The eIF2α Kinase Heme-Regulated Inhibitor Protects the Host from Infection by Regulating Intracellular Pathogen Trafficking. Infection and Immunity. 20, 00707(2018).
  17. Kortebi, M., et al. Listeria monocytogenes switches from dissemination to persistence by adopting a vacuolar lifestyle in epithelial cells. PLoS Pathogen. 13, 1006734(2017).
  18. VanCleave, T. T., Pulsifer, A. R., Connor, M. G., Warawa, J. M., Lawrenz, M. B. Impact of Gentamicin Concentration and Exposure Time on Intracellular Yersinia pestis. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 505(2017).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Listeria monocytogenesPathogen EffluxColony Forming UnitFlow CytometryGentamicin Protection AssayIntracellular ProliferationHost Cell InfectionCytosolic PathogensCellular Efflux AssayHigh Throughput Screening

İlgili makaleler