Method Article

Floresan Isotiyoyanat-polisucrose 70 ile Farelerde Glomerüler Geçirgenliğin Yüksek Hassas Ölçümü

DOI:

10.3791/59064

⸱

August 9th, 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Nephrology, Medical Faculty, Heinrich-Heine-University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, farelerde çok hassas, radyoaktif olmayan bir izleyici kullanarak glomerüler geçirgenliği test etmek için bir protokol sıyoruz. Bu yöntem küçük idrar hacimleri ile tekrarlayan idrar analizleri sağlar.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İdrarda albumin kaybı (albuminüri) kardiyovasküler sonucu tahmin eder. Fizyolojik koşullar altında, az miktarda albumin glomerulus tarafından süzülür ve emme sınırına ulaşıncaya kadar tübüler sistemde tekrar emilir. Patolojik albumin filtrasyonundaki erken artışlar albuminüri analiz edilerek gözden kaçabilir. Bu nedenle, glomerüler permselectivity test etmek için izleyicilerin kullanımı avantajlı görünür. Floresan etiketli tracer fluorescein izotiyoyanat (FITC)-polissökroz (yani, FITC-Ficoll), glomerüler permselectivity çalışma için kullanılabilir. FITC-polissucrose molekülleri glomerulus tarafından serbestçe süzülür, ancak boru sisteminde emilir. Fare ve sıçanlarda FITC-poliskroz, teknik olarak karmaşık prosedürler (yani radyoaktif ölçümler, yüksek performanslı sıvı kromatografisi [HPLC], jel filtrasyon) kullanılarak glomerüler geçirgenlik modellerinde araştırılmıştır. Farelerde FITC-polysucrose 70 (albumin boyutu) glomerüler geçirgenlikte erken ve küçük artışları test etmek için FITC-polissucrose tracer tabanlı protokolü modifiye ettik ve kolaylaştırdık. Bu yöntem, küçük idrar hacimleri (5 μL) ile tekrarlayan idrar analizleri sağlar. Bu protokol, fitc-polisökroz 70'in intravenöz olarak nasıl uygulandığı ve basit bir idrar kateteri ile idrarın nasıl toplandığı hakkında bilgi içermektedir. İdrar bir floresan levha okuyucu ile analiz edilir ve bir idrar konsantrasyonu belirteci normalize (kreatinin), bu şekilde teknik olarak karmaşık prosedürler kaçınarak.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Glomerüler filtrasyon bariyerindeki fonksiyonel veya yapısal bozukluklar glomerüler geçirgenliği arttırarak albümine (albuminüri) albumin saptanır. Albuminüri kardiyovasküler sonucu tahmin eder ve glomerüler yaralanma için önemli bir belirteçtir1. Hatta düşük albuminüri düzeyleri, normal aralıkta yalan, artmış kardiyovasküler risk ile ilişkilidir1.

Fizyolojik koşullar altında, albumin glomerulus yoluyla süzülür ve neredeyse tamamenboru sistemi 2,3emilir . Farelerde, idrarda albumin tespiti genellikle idrar toplama 24 saat bir albumin e....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Araştırmalar, Laboratuvar Hayvanlarının Bakım ve Kullanımı Rehberi'nde (ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri Yayın No. 85-23, revize 1996) belirtilen esaslara göre yürütülmüştür. Tüm hayvan deneyleri ilgili kurumsal onaylara uygun olarak yapılmıştır (devlet hükümeti Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz [LANUV] referans numarası 84-02.04.2012.A397).

1. Alet, çözeltin ve ekipmanların hazırlanması

  1. FITC-polissucrose 70'i %0,9 steril sodyum klorür (NaCl) ile 10 mg/mL (yani 10 mL NaCl'de 100 mg) son konsantrasyona yeniden oluşturun.
  2. Diyaliz FITC-polisökroz 70 çözeltisi 4 °C'de bir gecede serbest FITC moleküllerini çıkarı....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil2'de de belirtildiği gibi, farelerde glomerüler geçirgenliği test etme yöntemi üç aşamada oluşturulmuştur. İlk evre, üriner kateter ve santral venöz kateterin yerleştirildiği hazırlık evresi olarak adlandırılır. İkinci faz, FITC-polissucrose 70'in intravenöz bolus enjeksiyonu ile başlayıp 60 dk boyunca FITC-polissucrose 70'in sürekli infüzyonu ile başlayan denge fazı olarak adlandırılır. Son aşamaya deneysel faz denir. Bu aşamada, FITC-polisökroz 70 infü.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sunulan yöntem, araştırmacının farelerde glomerüler geçirgenliği çok hassas bir şekilde bir izleyici kullanarak test etmesini sağlar. Bu yöntemle glomerüler geçirgenlikte kısa süreli artışlar sadece az miktarda idrar kullanılarak teşhis edilebilir. Bu tekniği başarılı bir şekilde ustalaşmak için en kritik adımlar 1) fare cerrahisinde manuel uzmanlık geliştirmek, özellikle merkezi bir damarın kanülasyonunda, 2) idrar kateterini mukozaya zarar vermeden yerleştirmek ve 3) elle işleme de manuel uzmanlık Küçük hacimli numunel.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar Christina Schwandt, Blanka Duvnjak ve Nicola Kuhr onların olağanüstü teknik yardım ve Dr Dennis Sohn floresan tarama ile yaptığı yardım için teşekkür ederiz. Bu araştırma Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) SFB 612 TP B18'in L.C.R. ve L.S. için verdiği bir hibe ile desteklenmiştir. Funder çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayımlama kararı, ya da el yazması hazırlanmasında hiçbir rolü vardı.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Motic SMZ168 BLMoticSMZ168BLmikroskobu
KL1500LCDPulch ve Lorenz mikroskobu150500fare cerrahisi için ışık
MicrofederschereBraun, AesculapFD100Rince makas
Durotip Feine ScherenBraun, AesculapBC210Rboyun kesimi için
Anatomische PinzetteBraun, Ameliyat için AesculapBD215R 
Prä ameliyat için parierklemmeAesculapBJ008R 
SeraflexSerag WiessnerIC108000ipek iplik
Ketamin %10Medistaranestezi
Rompun (Xylazin) %2Bayeranestezi
İnce Delikli Polietilen Boru ID 0.28mm OD 0.61mmPortex800/100/100Kateter
İnce Delikli Polietilen Boru ID 0.58mm OD 0.96mmPortex800/100/200Kateter
Harvard aparatı 11 PlusHarvard Aparatı70-2209şırınga pompası
BD Insyte AutoguardBD381823  üriner
kateter Çok Modlu Dedektör DTX 880Beckman Coulterplaka okuyucu
384 kuyulu mikrotitre plakaNunc262260384 kuyu platte
Kreatinin Test KitiSigma-AldrichMAK080kreatinin konsantrasyonunu ölçmek için
96 kuyulu plakaNunc260836kreatinin testi için & nbsp;
FITC etiketli polisuçroz 70TBD DanışmanlığıFP70
Glomerüler geçirgenliği test etmek için kullanılanAnjiyotensin IISigma-AldrichA9525
Kan basıncı ölçümü içinBP-98ASoftron
OTS 40.3040Medite01-4005-00fare cerrahisi için ısıtma plakası
Instillagel 6mLFarco-Pharma GmbHüriner kateter
ExactaAesculapGT415tıraş makinesi
Fare cerrahisi için FITC-ficoll için

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chronic Kidney Disease Prognosis Consortium,, et al. Association of estimated glomerular filtration rate and albuminuria with all-cause and cardiovascular mortality in general population cohorts: a collaborative meta-analysis. Lancet. 375 (9731), 2073-2081 (2010).
  2. Mori, K. P., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Glomerular PermeabilityFITC Polysucrose 70Urine AnalysisFluorescence Plate ReaderUrinary CatheterizationJugular Vein CannulationSyringe Pump InfusionCreatinine NormalizationAngiotensin II StimulationMouse Kidney Disease

Related Articles