Burada, farelerde çok hassas, radyoaktif olmayan bir izleyici kullanarak glomerüler geçirgenliği test etmek için bir protokol sıyoruz. Bu yöntem küçük idrar hacimleri ile tekrarlayan idrar analizleri sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Floresan Isotiyoyanat-polisucrose 70 ile Farelerde Glomerüler Geçirgenliğin Yüksek Hassas Ölçümü
Bu makalede
Özet
Özet
İdrarda albumin kaybı (albuminüri) kardiyovasküler sonucu tahmin eder. Fizyolojik koşullar altında, az miktarda albumin glomerulus tarafından süzülür ve emme sınırına ulaşıncaya kadar tübüler sistemde tekrar emilir. Patolojik albumin filtrasyonundaki erken artışlar albuminüri analiz edilerek gözden kaçabilir. Bu nedenle, glomerüler permselectivity test etmek için izleyicilerin kullanımı avantajlı görünür. Floresan etiketli tracer fluorescein izotiyoyanat (FITC)-polissökroz (yani, FITC-Ficoll), glomerüler permselectivity çalışma için kullanılabilir. FITC-polissucrose molekülleri glomerulus tarafından serbestçe süzülür, ancak boru sisteminde emilir. Fare ve sıçanlarda FITC-poliskroz, teknik olarak karmaşık prosedürler (yani radyoaktif ölçümler, yüksek performanslı sıvı kromatografisi [HPLC], jel filtrasyon) kullanılarak glomerüler geçirgenlik modellerinde araştırılmıştır. Farelerde FITC-polysucrose 70 (albumin boyutu) glomerüler geçirgenlikte erken ve küçük artışları test etmek için FITC-polissucrose tracer tabanlı protokolü modifiye ettik ve kolaylaştırdık. Bu yöntem, küçük idrar hacimleri (5 μL) ile tekrarlayan idrar analizleri sağlar. Bu protokol, fitc-polisökroz 70'in intravenöz olarak nasıl uygulandığı ve basit bir idrar kateteri ile idrarın nasıl toplandığı hakkında bilgi içermektedir. İdrar bir floresan levha okuyucu ile analiz edilir ve bir idrar konsantrasyonu belirteci normalize (kreatinin), bu şekilde teknik olarak karmaşık prosedürler kaçınarak.
Giriş
Glomerüler filtrasyon bariyerindeki fonksiyonel veya yapısal bozukluklar glomerüler geçirgenliği arttırarak albümine (albuminüri) albumin saptanır. Albuminüri kardiyovasküler sonucu tahmin eder ve glomerüler yaralanma için önemli bir belirteçtir1. Hatta düşük albuminüri düzeyleri, normal aralıkta yalan, artmış kardiyovasküler risk ile ilişkilidir1.
Fizyolojik koşullar altında, albumin glomerulus yoluyla süzülür ve neredeyse tamamenboru sistemi 2,3emilir . Farelerde, idrarda albumin tespiti genellikle idrar toplama 24 saat bir albumin e....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Araştırmalar, Laboratuvar Hayvanlarının Bakım ve Kullanımı Rehberi'nde (ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri Yayın No. 85-23, revize 1996) belirtilen esaslara göre yürütülmüştür. Tüm hayvan deneyleri ilgili kurumsal onaylara uygun olarak yapılmıştır (devlet hükümeti Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz [LANUV] referans numarası 84-02.04.2012.A397).
1. Alet, çözeltin ve ekipmanların hazırlanması
- FITC-polissucrose 70'i %0,9 steril sodyum klorür (NaCl) ile 10 mg/mL (yani 10 mL NaCl'de 100 mg) son konsantrasyona yeniden oluşturun.
- Diyaliz FITC-polisökroz 70 çözeltisi 4 °C'de bir gecede serbest FITC moleküllerini çıkarı....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil2'de de belirtildiği gibi, farelerde glomerüler geçirgenliği test etme yöntemi üç aşamada oluşturulmuştur. İlk evre, üriner kateter ve santral venöz kateterin yerleştirildiği hazırlık evresi olarak adlandırılır. İkinci faz, FITC-polissucrose 70'in intravenöz bolus enjeksiyonu ile başlayıp 60 dk boyunca FITC-polissucrose 70'in sürekli infüzyonu ile başlayan denge fazı olarak adlandırılır. Son aşamaya deneysel faz denir. Bu aşamada, FITC-polisökroz 70 infü.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Sunulan yöntem, araştırmacının farelerde glomerüler geçirgenliği çok hassas bir şekilde bir izleyici kullanarak test etmesini sağlar. Bu yöntemle glomerüler geçirgenlikte kısa süreli artışlar sadece az miktarda idrar kullanılarak teşhis edilebilir. Bu tekniği başarılı bir şekilde ustalaşmak için en kritik adımlar 1) fare cerrahisinde manuel uzmanlık geliştirmek, özellikle merkezi bir damarın kanülasyonunda, 2) idrar kateterini mukozaya zarar vermeden yerleştirmek ve 3) elle işleme de manuel uzmanlık Küçük hacimli numunel.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Yazarlar Christina Schwandt, Blanka Duvnjak ve Nicola Kuhr onların olağanüstü teknik yardım ve Dr Dennis Sohn floresan tarama ile yaptığı yardım için teşekkür ederiz. Bu araştırma Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) SFB 612 TP B18'in L.C.R. ve L.S. için verdiği bir hibe ile desteklenmiştir. Funder çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayımlama kararı, ya da el yazması hazırlanmasında hiçbir rolü vardı.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Motic SMZ168 BL | Motic | SMZ168BL | mikroskobu |
| KL1500LCD | Pulch ve Lorenz mikroskobu | 150500 | fare cerrahisi için ışık |
| Microfederschere | Braun, Aesculap | FD100R | ince makas |
| Durotip Feine Scheren | Braun, Aesculap | BC210R | boyun kesimi için |
| Anatomische Pinzette | Braun, Ameliyat için Aesculap | BD215R | |
| Prä ameliyat için parierklemme | Aesculap | BJ008R | |
| Seraflex | Serag Wiessner | IC108000 | ipek iplik |
| Ketamin %10 | Medistar | anestezi | |
| Rompun (Xylazin) %2 | Bayer | anestezi | |
| İnce Delikli Polietilen Boru ID 0.28mm OD 0.61mm | Portex | 800/100/100 | Kateter |
| İnce Delikli Polietilen Boru ID 0.58mm OD 0.96mm | Portex | 800/100/200 | Kateter |
| Harvard aparatı 11 Plus | Harvard Aparatı | 70-2209 | şırınga pompası |
| BD Insyte Autoguard | BD | 381823 | üriner |
| kateter Çok Modlu Dedektör DTX 880 | Beckman Coulter | plaka okuyucu | |
| 384 kuyulu mikrotitre plaka | Nunc | 262260 | 384 kuyu platte |
| Kreatinin Test Kiti | Sigma-Aldrich | MAK080 | kreatinin konsantrasyonunu ölçmek için |
| 96 kuyulu plaka | Nunc | 260836 | kreatinin testi için & nbsp; |
| FITC etiketli polisuçroz 70 | TBD Danışmanlığı | FP70 | |
| Glomerüler geçirgenliği test etmek için kullanılan | Anjiyotensin II | Sigma-Aldrich | A9525 |
| Kan basıncı ölçümü için | BP-98A | Softron | |
| OTS 40.3040 | Medite | 01-4005-00 | fare cerrahisi için ısıtma plakası |
| Instillagel 6mL | Farco-Pharma GmbH | üriner kateter | |
| Exacta | Aesculap | GT415 | tıraş makinesi |
Kaynaklar
- Chronic Kidney Disease Prognosis Consortium,, et al. Association of estimated glomerular filtration rate and albuminuria with all-cause and cardiovascular mortality in general population cohorts: a collaborative meta-analysis. Lancet. 375 (9731), 2073-2081 (2010).
- Mori, K. P., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
