Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Stres tepkiler olası zararlı veya olumsuz uyaranlara kaynaklanan davranış ve fizyolojik durumları değiştirilir. Stres tepkiler Hayvan Krallığı boyunca temin edilir ve bir organizmanın hayatta kalması için önemlidir¹. Yıllar süren araştırmalar, stres devletlerinin temelindeki genetik ve nöronal mekanizmalar hakkında bilgilerimizi büyük ölçüde genişletmiştir. Bugün, amigdala ve striatum²gibi beynin alanları ve kortikotropin serbest hormon (CRH) gibi genetik faktörler ve glukokortikoid (gr) ve mineralokortikoid reseptörleri ( Bay) kapsamlı^3,4,5,6okudu. Bu kritik bulgulara rağmen, genetik ve nöronal stresin düzenlenmesi hakkında pek bilinmemektedir. Bu nedenle, birçok stres ile ilgili bozukluklar terapötik eksikliği muzdarip.

Genetiği değiştirilebilen model organizmalar, davranışların genetik ve nöronal kontrolünün çalışmasında yararlı bir araç sağlar. Balık modelleri, özellikle, son derece güçlüdür: onlar kısa nesil zaman ile küçük organizmalar, bir laboratuar ortamında kullanımı facile, onların genomları kolayca değiştirilebilir, ve, bir omurgası olarak, onlar sadece genetik paylaşmak, aynı zamanda nöroanatomik memeli meslektaşları ile Homoloji^7,8. Stresi ölçmek için standart testler, genetik mutasyonlar içeren zebrafit hatları ile eşleştirilebilir veya hassas nöronal alt setlerin manipülasyonunun mümkün olduğu ve tek genlerin veya tanımlanmış nöronların etkileri hızla ve verimli bir şekilde değerlendirilebilir.

Davranışsal olarak, stres yanıtları, hiper-aktivite veya uzun süreli (' donma ')⁹, azaltılmış keşif¹⁰, hızlı nefes, azaltılmış gıda alımı¹¹dönemleri olarak balık karakterize edilebilir ve bir yer-bir tank alt için tercih¹². Örneğin, tanıdık olmayan bir tank içine yerleştirildiğinde, Yetişkin zebra balığı ve diğer küçük balık modelleri tankın alt yarısı için bir başlangıç tercihi gösterir, henüz, zamanla, Balık yakın eşit frekans¹²ile üst ve alt yarısı keşfetmeye başlar. Tedavi yetişkinlerin anksiyete neden balık hemen üst yarım¹⁰keşfetmek için bilinen ilaçlar ile^,13. Bunun tersi olarak, endişeyi artıran ilaçlar, balık tankının alt yarısında güçlü bir tercih göstermesine neden olur^12,14,15. Böylece, düşük keşif ve tank alt yarısında tercih stres basit ve güvenilir göstergeleri vardır.

Çoğu omurga gibi, balık stres tepkiler Hipotalamik-hipofiz-inter-renal eksen aktivasyonu ile tahrik edilir (HPI; memelilerde Hipotalamik-hipofiz-adrenal [hPa] eksenine benzer)^14,16. Hipotalamik nöronlar hormon kortikotropin-serbest hormon ifade (CRH) hipofiz için sinyal, hangi sırayla serbest adrenokortikotropik hormon serbest (ACTH). ACTH o zaman inter-böbrek bezi üretmek ve salgıya kortizol, hangi aşağı hedefleri¹⁶, bunlardan biri CRHüreten hipotalamik nöronların negatif geribildirim olan bir dizi vardır sinyalleri^{3,17, 18,19}.

Burada, doğuştan gelen stresin davranışsal önlemlerini değerlendirmek için bir yöntem tarif ediyoruz. Davranış için, biz detay protokolleri yeni tank dalış testi^12,14kullanarak. Daha sonra, bir örnek olarak, bilinen bir anksiyolitik ilaç, Buspirone, stres davranışsal önlemleri azaltır göstermektedir.

Protokol, kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi Florida Atlantik Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.

1. hazırlık

1. Davranış etütler gerçekleştirmek için yalıtılmış bir oda belirleyin veya bir odanın bir bölümünü kapatmak için yalıtın.
   Not: Oda bozulmamış olmalıdır ve balık normal davranışını kesintiye kaçınmak için düşük trafik var.
2. Aşağıdaki malzeme ve ekipman davranışsal odaya taşıyın: (i) bir kamera ve objektif, (ii) objektif bağlı olabilir bir kızılötesi filtre, (iii) bir kamera standı, (iv) kamera edinme yazılımı ile bir bilgisayar, (v) bir firma ve istikrarlı tablo tahlil gerçekleştirmek için , (vi) kızılötesi ışıklar (IR ışıkları; 850 nm veya 940 nm), (vii) kayıt tankının uzunluğundan daha uzun olan beyaz akrilik difüzör (VIII) 1,8 L trapez plastik tahlil tankı (' roman tankı ' olarak anılacaktır; burada kullanılan 12 x 18 inç) ve (IX) bir kova balık sistemi suyu.
   Not: yeni tank için, laboratuvarımız, şekildeki trapez olan ticari olarak kullanılabilen plastik gemiler kullanır. Tankın boyutları yaklaşık olarak 6 x 9 ' da (ayrıntılı boyutlar Şekil 1A'da sağlanır). Kullandığınız difüzör panosu, yeni tanktan (12 ' si x 18 in) biraz daha büyüktür. Yeni tank deneyleri, dikdörtgen veya farklı trapez boyutları^20,21olan olanlar gibi farklı şekillerde olan tanklarla gerçekleştirilmiştir. Genellikle, balık davranışı ne olursa olsun kendi boyutları tüm tanklarda benzer: Tüm konteynerler için, balık başlangıçta alt yarısını tercih, henüz zaman içinde daha büyük frekans ile üst yarısında keşfetmeye başlar.
3. Kızılötesi filtreyi kamera lensi ile bağlayın. Kızılötesi ışık şeritlerinin dalga boyları genellikle 850 nm 'den 940 nm 'ye kadar değişir. Filtre, kamera üzerinden 720 nm 'den daha az dalga boyu ışığı kısıtlayan uzun geçiş filtresine sahiptir.
4. Kamera edinme yazılımı için uygun parametreleri seçin. Çoğu kayıt için, kamera edinimini saniyede 30 kare/saniye hızında ve kayıt süresini 10 dakikaya ayarlayın.
   Not: Bu parametreler, denemeye bağlı olarak farklılık gösterebilir. Örneğin, bir roman tankında alışkanlık okumak için^22,23, daha uzun kayıtlar gerekebilir.

2. Kurulum

Not: Bu bölümdeki adımlar yeni tank tahlil ayarlama açıklanmaktadır. Şekil 1B'de son ürünün bir diyagramı verilmiştir.

1. Masanın ortasına yeni tankı yerleştirin.
2. Kızılötesi ışıkları tankının arkasına konumlandırın ve beyaz akrilik levha veya difüzör ekranını tank ile LED ışık kaynağı arasına yerleştirin.
   1. Difüzör yerleştirin böylece LED 'Ler gelen ışık maksimum yayılır ve ışığın yoğunluğu roman tankı aydınlatmak için yeterlidir. Yakın tahta ışık kaynağına, daha parlak ışıklar olacak, henüz daha az diffuz olacaktır. Bunun tersine, difüzör kartını ışık kaynağından uzağa yerleştirmek ışık yoğunluğunu azaltır, ancak ışığı daha iyi yayacak.
3. Balık sistemi suyu ile roman tankının yaklaşık dörtte üçünü doldurun.
   Not: sistem suyu, musluk suyunun ters osmoz kullanılarak üretilir, böylece iletkenlik 900 ± 100 μS 'ye eşittir, pH nötr (7,2) ve sıcaklık 27 ± 1 °C ' dir.
4. Kamerayı kamera standında takın ve kamerayı bilgisayara bağlayın. Video edinme yazılımı açın ve tank ön yüz ve tüm roman tankı görülebilir ve video hiçbir gizlenmiş alanlar vardır sağlamak için kamerayı ayarlayın. Kamera aracılığıyla gözlenen tank boyunca yeterli ve hatta aydınlatma var gibi tank ve kızılötesi ışıkları ayarlayın.
   Not: deneylere geçmeden önce, bir balık videosunu yakalanan ve izleme gerçekleştirildiği bir deneme çalışması gerçekleştirmek için genellikle yararlı olabilir. Bu, Kur 'un davranış denemesi için yeterli olmasını sağlayacaktır.

3. yeni tank testi kurulumu

1. Bir 250 ml kabı balık sistemi su ile önceden dolu hazırlamak ve en az iki tutma tankları.
2. Test sabahı, en az 10 test yetişkin zebra balığı her deneysel durum (kontroller ve deneysel yetişkinler) bir tutma tankı içine balık tesisinden kullanılmak üzere transfer, davranış odasına aktarmak ve en az bir için gelmesini izin Saat.
   Not: bir güç analizi denenmeden önce yapılmalıdır, henüz bizim elimizde, bir n = 10 istatistiksel önemini algılamak için genellikle yeterlidir. Dahası, tutma tankı litre su başına beş kişiden fazlasını içermelidir. Zebra balığı yetişkinler yeni bir tank²²dakika içinde habituate gösterilmiştir olarak bir saat bir aklimasyon yeterlidir. Ayrıca, davranışsal ritimler sirkadiyen süreçlerden etkilenir ve böylece farklı günlerde yapılan deneysel çoğaltır aynı saatler içinde yapılmalıdır. Biz genellikle 11:00 saat arasında tüm deneyler gerçekleştirmek ve 6:00 PM.
3. Tanklara, hayvanların durumunun veya genotipinin denemeler için kör olduğu şekilde etiketleyin.
   Not: denemeler, bir mektup veya sayı sistemi kullanarak tankları etiketleme yoluyla deneylere kolayca kör edilebilir (yani, bir tank ' A ', başka bir ' B ', vb. olarak etiketlenmiştir). Deneylere dahil olmayan bir parti, tankları böyle bir sistemle etiketleyebilir ve deneme sonrası kimliklerinizi, post-analiz tamamlandıktan sonra maskeler.
4. Bir NET kullanarak, nazikçe adım 3,1 önceden doldurulmuş kabı tek bir yetişkin yerleştirin. Yetişkin balık 10 dakika boyunca kabı içinde gelmesini izin verin.
   Not: cinsiyete özgü farklılıklar aramak için önemli post-analiz olabilir gibi, yetişkin seks kaydedin.
5. Beaker sonra aklimasyon, yeni tank içine balık tanıtmak (Bölüm 1) yavaşça Beaker su ve yetişkin dışarı dökme tarafından kurmak.
6. Yeni tank içine yetişkin tanıttıktan sonra, kamera kaydını başlatın ve balık ek sıkıntı önlemek için kurulum uzağa taşıyın.
7. Kayıt bittikten sonra, tek bir yeni tank ve bir tutma tankı içine yerden bireysel çıkarın.
   Not: aynı bireylerde tekrarlanan testleri önlemek için 3,2 adımda birinden farklı bir tutma tankı kullanılmalıdır.
8. Tüm hayvanlar test edilinceye kadar her yetişkin için 3,7 3,4 adımları yineleyin.
   Not: kör edici koşullara veya genotiplere ek olarak, denemeleri rasgele yapın. Rasgele bir sayı jeneratör veya bir denemeler arasında rastgele sağlayan herhangi bir araç kullanın. Denemeler başlamadan önce her deneme belirlenir böylece bu deneme önce yapılmalıdır.
9. Tüm testlerin sonunda, balıkları balık tesisine geri dönün.

4. ilaç ile ön tedavi

Not: aşağıdaki adımların amacı, ilaçların kullanımından önce ve sonra bireyin davranışını karşılaştırmak. Bu karşılaştırma ilk olarak yeni bir tank testi gerçekleştirerek elde edilir adım 3,4 olarak 3,6, ilaç tedavisi ve ardından ikinci bir roman tank testi (Şekil 3a).

1. Pozitif ve negatif kontroller dahil olmak üzere ilacın stok çözümünü hazırlayın.
   Not: ilaç daha önce literatürde kullanılırsa, uygun bir çalışma dozu bulun ve bunu kullanın. Örneğin, temsili sonuçlar buspiron için, biz bir 100x stok çözüm yapmak ve kullanım 0,05 mg/ml son konsantrasyon olarak, literatürde açıklandığı gibi^13,20. Önerilen doz bilinmiyor ise, birkaç konsantrasyonları inceleyerek bir doz yanıt eğrisi yapılmalıdır. Uyuşturucu seri dilüsyonları ile daha fazla kadehler ayarlayın. İlaç suda çözülebilir değilse, bir solvent olarak dimetil sülventid (DMSO) kullanın.
2. 250 ml kadehler sistem su ile konsantrasyon çalışma ilaçlar seyreltir. Örneğin, 100x çözelti yapılırsa, sistem suyunda seyreltmeli 1:100. Kontrol olarak sadece sistem suyu ile bir kabı ayarlayın.
   Not: DMSO, adım 3,1 bir çözücü olarak kullanılırsa, kontrol kabı içinde DMSO eşit bir hacim kullanın.
3. Başka bir araştırmacı yardımıyla, ilaç ve kontrol kadehler kimliklerini maskelemek Tester sonrası analiz kadar tedavi koşullarına kör olmasını sağlamak için.
   Not: bir sayı veya mektup sistemi kullanılabilir.
4. 3,1, temel davranışsal stres yanıtı elde etmek için 3,6 ile ilgili adımları izleyerek yeni bir tank testi gerçekleştirin.
5. Temel kayıt sonra, hemen yeni tank yetişkin balık kaldırmak ve ilaç veya araç ile dozlu kabı yerleştirmek için bir net kullanın, adım 4,2 açıklandığı gibi. Yetişkin 10 dakika boyunca kabı kalmak için izin verin.
   Not: net, ilaçların çapraz kontaminasyonunu önlemek için beaklardaki suya dokunmadığından emin olun. Kullanılan ilaç bağlı olarak uygun doz ve yönetim süresi emin olun. 10 dakika tedavi süresi tüm ilaçlar için çalışamayabilir.
6. Tedavi sonrası, adım 4,5 içinde kabı yetişkin kaldırmak için bir net kullanın ve başka bir kabı sadece taze sistem suyu ile dolu yerleştirin. Bu, ikinci yeni tank testi sırasında dozajı en aza indirmek için yıkım dönemdir. Yetişkin bir ek 10 dakika yıkanmasına kalmak için izin verin.
   Not: ilaç ile herhangi bir istenmeyen çapraz tedavi önlemek için her ilaç durumu için ayrı ağlar kullanılmalıdır. Deneylerin istekleri durumunda yıkama süresi atlanabilir.
7. Önceki adımda kabı Bu yetişkin kaldırarak ikinci bir kez yeni tank dalış testi gerçekleştirin, New Roman tankı yerleştirin ve 3,6 için 3,5 adımları izleyin.
8. İkinci yeni tank testinden sonra, kişiyi ayrı bir tutma tankına çıkarın. İkinci roman tankı sistem suyu dökmek ve bir sonraki test için taze sistem suyu ile doldurun. Bu adım, herhangi bir ilacın çapraz kontaminasyonunu önler.
   Not: ilaçların yarı ömrü bağlı olarak, her 3 saatte bir ilaç içeren taze bezeler yapılmalıdır. Buspirone için, her 3 saatte bir taze çözümler yapın. Buna ek olarak, adım 3,8 notun ardından, testler ve ilaç tedavileri arasında denemeler randomize edilmelidir.
9. Tüm denemelerin sonunda, kişileri balık tesisine geri dönün.
   Not: kullanılan ilacın türüne bağlı olarak, bu tedavilerin bireyler üzerinde etkileri uzun ömürlü olabilir. Bu nedenle, diğer deneylerde bu kişileri kullanmayın.

5. video analizi

1. Tüm denemeler sonra, seçim izleme yazılımı içine video dosyalarını yükleyin.
   Not: genellikle ticari olarak kullanılabilen izleme yazılımı kullanıyoruz, ancak serbestçe kullanılabilen birçok yazılım paketi kullanılabilir. İzleme elde etme adımları kullanılan yazılım paketine göre farklılık gösterebilir.
2. Videodan hala bir çerçeve kullanarak, (i) çevresindeki hayali sınırları (i) su ile dolu tüm yeni tank Arenası ve çevresindeki sınırlar (ii) üst üçüncü, (iii) ikinci üçüncü, ve (iv) tankının alt üçte biri olarak tanımlayın. Balık roman tankının her bölümünde harcanan zaman kurmak için bunları kullanın.
3. 5,2 adımda tanımlanan her arenada kare başına x-y yer değiştirmesi hesaplayın.
4. Tankın üst, orta ve alt alanlarını tanımlayın. Her bölge boyutu benzer olmalıdır. Bu bölgelerin belirlenmesi için kısa bir yöntem, y yönünde tank uzunluğunu hesaplamak ve bu 3 ile bölmek etmektir.
   Not: genel protokol varyasyonları var. Örneğin, bazı laboratuvarlar üçte biri yerine yarısını kullanır¹⁴.
5. Her arenada, mesafeye ve hızda harcanan süreyi belirleyin.
   Not: çoğu izleme paketleri Kullanıcı için otomatik olarak hesaplar. Ancak, izleme yazılımı yoksa, bunlar x-y yer değiştirme değerlerinden kolayca hesaplanabilir. Örneğin, uzaklık formül kullanılarak belirlenebilir:
   
   ve hız formülü takiben tespit edilebilir:
   
6. Tüm denemeler için parça ve ölçümler almak için 5,4 5,2 adımları yineleyin.
   Not: Bu genel protokol varyasyonları

6. normallik için test

1. İstatistiksel farklılıkları hesaplamak için geçmeden önce istatistikleri gerçekleştirin. Verilerin normal olarak bir Shapiro-Wilk testi kullanılarak dağıtılıp dağıtılacağını kontrol edin.
2. Verilerin normalde dağıtıldığı boş varsayım reddedilirse (yani, veriler bir Gauss dağıtımını izlemez), parametrik olmayan testler kullanarak tüm testleri gerçekleştirin. Bunun tersi olarak, veriler normal bir dağılımın takibinde bulunursa, parametrik testler kullanmaya devam edin.
   Not: istatistik gerçekleştirmek için ticari olarak kullanılabilen yazılımları kullanırız; Ancak, R programlama dili de kullanılabilir. Bir Shapiro-Wilk analizi, R 'nin Shapiro. test işlevi kullanılarak gerçekleştirilebilir.

Zebra balığı 'te stres incelenmesi
Vahşi tip zebrafish zaman içinde stres davranışını incelemek için, biz yeni tank testinde AB gerinim24 yetişkin balık test. AB yetişkinleri, yukarıda açıklandığı gibi protokole tabi tutulmuştur. Kısaca, Balık davranış odasında bir tankta 1-h iklimlendirme dönemi verildi. Bir birey 10 dakika boyunca bir kabı yerleştirilir ve daha sonra yavaşça taze sistem suyu ile dolu bir tanıdık olmayan tank (yeni tank) yerleştirilir. Lokomotor aktivitesi 10 dakika boyunca kaydedildi ve ticari olarak kullanılabilen yazılımlar kullanılarak izleme çevrimdışı olarak gerçekleştirildi. İlk ve son dakika arasındaki lokomotor aktivitesinin karşılaştırılması dramatik farklılıklar gösterdi (Şekil 2A, B). İlk tank içine tanıtılan zaman, balık alt (Şekil 2b), henüz zamanla, yetişkinler zaman içinde harcanan süreyi kademeli bir artış vardı (Şekil 2b, C) çoğunluğunu geçirdi. Son dakikaya göre ilk dakikada üst kısmında harcanan toplam süre önemli farklılıklar göstermiştir (6,29 ± 8,21 s vs. 23,23 ± 9,02 s; eşleştirilmiş t-testi, p < 0,05) (Şekil 2C). Buna karşın, ilk ve son dakika arasındaki toplam mesafe önemli bir farklılık ortaya çıkmaz (440,4 ± 110,3 cm vs. 405,5 ± 49,71 cm; eşleştirilmiş t-testi, p = 0,375) (Şekil 2D). Çünkü doğuştan tercih ilk ve son dakika arasında farklı olduğu ve mesafe seyahat değil, biz davranış değişikliği bir stres yanıtı temsil inanıyoruz, ve sadece lokomotor aktivite bir değişiklik değil. Bu sonuçlar, zebra balığı 'in kolay ölçülebilir bir stres tepkisi olduğunu göstermektedir. Bu yaklaşım aynı zamanda farklı hayvanlar grupları arasındaki stres farklılıkları karşılaştırmak ve aralarında stres farklılıkları değerlendirmek için bir temel kurar.

Zebra balığı stres davranışı üzerinde anksiyolitik ilaçların etkileri
Zebrafish tarama ilaçlar için güçlü bir sistemdir, ilacın uygulanması sadece su ekleyerek non-invazif şekillerde uygulanabilir beri25,26,27. Zebra balığı içinde alt konut doğrulamak için bir doğuştan stres yanıtı temsil eder, biz erişkin zebra balığı önce ve bir anksiyolitik ilaç maruz kalma sonra test gruplar halinde davranış karşılaştırıldı; bir kontrol olarak, biz benzer bir yetişkin ayrı ele, henüz sadece araç (sistem suyu) yerine ilaç uygulanır. Biz kullanılan 5HT1a reseptör agonist buspiron, kontrollü bir madde değildir ve genelleştirilmiş anksiyete bozukluğu muzdarip insan hastalarına reçete28. Buspirone çeşitli balık ve mammalin modelleri10,13,21,29,30, davranışsal stres tepkiler azalma neden doğrulandı 31,32,33,34 . Protokolde açıklandığı gibi, zebra balığı ilk yeni tank testinde kaydedildi, daha sonra alınan ve 10 dakika boyunca bir ilaç veya araç bir kabı yerleştirilir. balık daha sonra 10 dakika bir ' Wash-Out ' dönemi, nerede onlar için New kabı yerleştirilir verildi ve sonra yeni tank testinde yeniden kaydedildi (Şekil 3A).

Lokomotor yollarının analizi, tek başına araca maruz kalan yetişkinler grupları için tedavi öncesi ve sonrası küçük bir fark ortaya çıkardı (Şekil 3B). Buna karşın, buspiron 'a maruz kalan yetişkinler, uyuşturucu maruz kalmadan önce aynı balıkların lokomotor yollarına kıyasla büyük miktarda zaman harcadı (Şekil 3B, C). Üstte harcanan süreyi ölçmek, kontrol hayvanlarında ön ve tedavi sonrası arasında önemli bir fark ortaya koymuştur (183,9 ± 90,46 s 'den önce 113,8 ± 81,88 s; tek yönlü ANOVA ve ardından Sidak 'ın çoklu karşılaştırmalar testi, p = 0,4254), ancak buspiron 'a maruz kalan hayvanlar, ön tedavi için üst üste önemli ölçüde daha fazla zaman harcadı ve tedavi sonrası bireyleri kontrol eder (buspiron: 201,4 ± 49,95 s daha önce 552,2 ± 42,97 s; tek yönlü ANOVA ve ardından sidak 'ın çoklu karşılaştırmalar testi, p < 0,0001; Kontrol vs Buspirone sonrası tedavi: p < 0,0001.) (Şekil 3C). Farklılıkları genel olarak daha az lokomotif nedeniyle olup olmadığını incelemek için, toplam mesafe seyahat ölçülen. Bu veriler herhangi bir grup için önemli bir fark ortaya koymuştur (4134 ± 601,9 cm önce kontrol için 3471 ± 766 cm; Kruskal-Wallis testi, p > 0,05; 3904 ± 301,3 cm önce vs. 3644 ± 566,3 cm buspiron için; Kruskal-Wallis testi, p > 0,05) (Şekil 3D). Birlikte alındığında, bu veriler yetişkin zebra balığı alt konut doğuştan stres bir ölçüsüdür olduğunu göstermektedir, ve yetişkin zebra balığı daha farmakolojik deneyler için bir temel kurmak.

Şekil 1 . Yeni tank kurulumunun diyagramı. (A) 1,8 L trapez roman tankının boyutları, tankın kayıt tarafından görülür. (B) insan parazitlerini en aza indirmek için kullanılan kızılötesi ışıklar, kamera ve bariyerlerin pozisyonları da dahil olmak üzere kurulum diyagramı. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Şekil 2 . Vahşi tip zebrafish 'de doğuştan gelen stres yanıtlarının incelenmesi. (A) ilk dakika (sol) ve son dakika (sağ) 10 dakikalık kaydın yeni tank testinde bireysel bir yetişkinin temsilcisi yüzme yolları. Tankın üst, orta ve alt bölgelerini tanımlayan hayali çizgiler, noktalı çizgiler ile belirtilir. (B) 10 dakikalık kaydın her dakikası için üst bölgede toplam zaman harcama miktarının ölçülmesini. (C &Amp; D) Üst bölgede (C) harcanan toplam süre ve tüm denemelerin ilk ve son dakikalarında (D) seyahat edilen toplam mesafe karşılaştırmalar. Veri Shapiro-Wilk test normallik için geçirilen bu yana eşleştirilmiş t-testleri analiz için kullanıldı. n = 5; *: p = 0,028. Hata çubukları ortalama standart hata gösterir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Şekil 3 . Anksiyolitik ilaçların stres davranışına etkilerini incelemek. (A) deneysel akış şematik. (B) temsilci yüzme yolları ön ve sonrası tedavi tek bir kontrol bireysel sistem suyu ile tedavi, ve başka bir birey buspiron ile yeni tank testi tedavi. Noktalı çizgiler, tankın üst, orta ve alt bölgelerinin ayrılmasını tanımlar. Gri parça kontrol bireysel temsil ve mavi parçalar Buspirone-tedavi bireysel temsil eder. (C &Amp; D) Üst bölgede (C) harcanan toplam süre ve denetim (Ctrl) ile Buspirone (busp) denemeleri arasındaki toplam mesafe (D) arasındaki karşılaştırmalar. Shapiro-Wilk testini kullanarak normallik için bir test yapıldı. Normallik testinin başarısız olduğu durumlarda, Kruskal-Wallis testi ve ardından Dunn 'ın birden fazla karşılaştırmalar testi kullanıldı (C); ve veri normallik geçirildi, tek yönlü ANOVA takip Sidak 's birden fazla karşılaştırmalar testi (D) analiz için kullanıldı. n = 5 her koşul için; : p = 0,001. Hata çubukları ortalama standart hata gösterir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Yazarlar, rakip veya mali çıkarları olmadığını beyan ederler.