Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

3B cilt Organoid kablosu kan kaynaklı nesil Pluripotent kök hücreler indüklenen

13.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/59297

⸱

18 Nisan 2019

 , 

Bu makalede

Özet

Biz İndüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı lenfositi ve fibroblastlar ayırt etmek ve bir 3B cilt organoid oluşturmak gösterilmiştir bir protokol bu lenfositi ve fibroblastlar kullanarak öneriyoruz. Bu iletişim kuralı insanlaşmış fareler model oluşturma ek bir adım içerir. Burada sunulan teknik dermatolojik araştırma artıracaktır.

Özet

Deri vücudun en büyük organıdır ve birçok işlevi vardır. Deri bir fiziksel bariyer ve vücudun koruyucu görev yapan ve bedensel işlevleri düzenleyen. Biyomimetik imitasyon modelleri, sistemleri ve karmaşık insan sorunları1çözme amacıyla doğa unsurları olduğunu. Cilt Biyomimetik tüp bebek Hastalıkları Araştırma ve içinde vivo rejeneratif tıp için yararlı bir araçtır. İnsan İndüklenmiş pluripotent kök hücreler (iPSCs) sınırsız nükleer silahların yayılmasına karşı karakteristik ve üç germ katmanları ayırt etme yeteneği var. İnsan iPSCs kan hücreleri, keratinositler, fibroblastlar ve diğerleri gibi çeşitli Primer hücre oluşturulur. Bunlar arasında kordon kanı mononükleer hücre (CBMCs) allojenik rejeneratif tıp açısından bir alternatif hücre kaynağı olarak ortaya çıkmıştır. Bankacılık sistemi hücre insan lökosit antijeni (HLA) yazarak önemlidir çünkü CBMCs içinde rejeneratif tıp yararlıdır. Biz CBMC-iPSCs farklılaşma lenfositi ve fibroblast ve 3B cilt organoid nesil için bir yöntem sağlar. Lenfositi CBMC IPSC türetilmiş ve fibroblastlar bir birincil hücre satırı ile benzer özelliklere sahip. 3B cilt organoids epidermal bir katman bir dermal tabaka üzerine overlaying tarafından oluşturulur. Bu 3D cilt organoid dikim tarafından insanlaşmış fare modeli oluşturulur. Bu çalışmada bir 3D insan IPSC elde edilen deri organoid tüp bebek ve içinde vivo dermatolojik araştırma için roman, alternatif bir araç olabilir gösterir.

Giriş

Deri vücudun en dış yüzeyi kaplar ve iç organları korur. Cilt patojenlere karşı korumak, emici ve su depolama da dahil olmak üzere çeşitli işlevleri vardır, vücut ısısını düzenleyen ve vücut excreting2atık. Deri nakli cilt kaynağına bağlı olarak sınıflandırılabilir; deri başka bir donörden kullanarak greft allogrefler denir ve hastanın kendi cilt kullanarak greft autografts vardır. Bir otogrefti onun düşük ret riski nedeniyle tercih edilen tedavi olmasına rağmen cilt biyopsileri hastalarda şiddetli lezyonlar veya cilt hücrelerini yetersiz sayıda gerçekleştirmek zordur. Şiddetli yanık hastalarında, cilt hücrelerinin sayısının üç katı geniş alanl....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Hayvanları içeren tüm yordamları laboratuvar hayvanları Sosyal Yardım Yasası, bakım ve laboratuvar hayvanlarının kullanım kılavuzu uygun olarak gerçekleştirilen ve kurallar ve ilkeler kemirgen deneme için sağlanan kurumsal hayvan bakım ve Kore Katolik Üniversitesi Tıp Okulu Komitesi (IACUC) kullanın. Çalışma Protokolü Katolik Üniversitesi Kore (CUMC-2018-0191-01) kurumsal inceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır. IACUC ve bölümü, laboratuvar hayvanları (DOLA) Kore Katolik Üniversitesi, Songeui kampüs 2017 ve Edinsel Derneği değerlendirmesi için Kore mükemmellik hayvan laboratuvar tesiste Kore gıda ve İlaç İdaresi akredite ve Akreditasyon laboratuvar hayvan bakımı Inte....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Cilt, çoğunlukla, epidermis ve dermis oluşmaktadır. Keratinositler ana hücre tipi epidermis, ve fibroblastlar dermis ana hücre türü vardır. Keratinosit farklılaşma düzeninin şekil 1içindeAgösterilir. CBMC-iPCSc vitronectin kaplı bir tabak (şekil 1B) muhafaza. Bu çalışmada, keratinositler ve EB oluşumu kullanarak fibroblastlar CBMC-iPSCs farklı. EBs asılı kullanarak oluşturulan damla lenfositi ve fibroblast (.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

İnsan iPSCs kişiselleştirilmiş rejeneratif tıp17için yeni bir alternatif olarak önerilmiştir. Kişiselleştirilmiş iPSCs hasta kaynaklı hastalık modelleme, uyuşturucu tarama ve Otolog transplantasyon18,19için kullanılabilir hasta özelliklerini yansıtır. Hasta kaynaklı iPSCs kullanımı da Primer hücre, yeterli hücre sayıları ve bağışıklık tepkileri5,17,19

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Bu eser sağlık, refah ve aile işleri, Kore Cumhuriyeti (H16C2177, H18C1178) için bir hibe Kore sağlık teknoloji R & D proje, Bakanlığı tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AdeninSigmaA2786farklılaşma ortamının bileşeni
(EB oluşum ortamı)STEMCELL05893EB oluşumu
Anti-Fibronektin antikoruabcamab23750Fibroblast belirteci
Anti-KRT14 antikoruabcamab7800Keratinosit belirteci
Anti-Loricrin antikoruabcamab85679Stratum corneum marker
Anti-p63 antikorabcamab124762Keratinosit marker
Anti-Vimentin antikoruSanta cruzsc-7558Fibroblast işaretleyici
BANT YARDIM ESNEK KUMAŞJohnson & Johnson-Bandage
Bazal membran matrisi (Matrigel)BD354277Fibroblast için farklılaşma ortamının bileşeni
SİYAH İPEK sütürAILEEESK617Deri grefti
CaCl2SigmaC56703D cilt organoidi için epitel ortamının bileşeni
Kollajen tip IBD3542363D cilt organoidi
Kollajen tip IVSanta-cruzsc-29010Keratinosit için farklılaşma ortamının bileşeni
Tanımlanmış keratinosit-Serum Serbest OrtamGibco10744-019Keratinosit DMEM için farklılaşma ortamının bileşeni
, yüksek glikozGibco11995065Farklılaşma ortamının bileşeni
DMEM/F12 OrtaGibco11330-032Bileşeni farklılaşma ortamı
Esansiyel 8 ortaGibcoA1517001iPSC ortamı
FBS, NitelikliCorning35-015-CVFibroblast ve keratinosit için farklılaşma ortamının bileşeni
Glutamax Takviyesi Gibco35050061için farklılaşma ortamının bileşeni
12585-014Fibroblast ve keratinosit için farklılaşma ortamının bileşeni
İris standart kavisli makasProfesyonelPC-02.10Cerrahi alet
Keratinosit Serum İçermeyen OrtaGibco17005-042Farklılaşma ortamının bileşeni keratinosit
L-askorbik asit 2-fosfat seskimagnezyum tuzu hidratSigmaA8960Keratinosit için farklılaşma ortamının bileşeni
MEM Esansiyel Olmayan Amino AsitGibco1140050Fibroblast için farklılaşma ortamının bileşeni
Meriam Forseps Başparmak 16 cmHIROSEHC 2265-1Cerrahi alet
NOD. CB17-Prkdc SCID/JJackson Laboratuvarı001303Deri grefti Petri kabı için fare suşu
90 mmHyundai MicroH10090Plastik eşya
Rekombinant İnsan BMP-4R& D314-BPKeratinosit Rekombinant insan EGF proteini R& için farklılaşma ortamının bileşeni
D236-EGKeratinosit Retinoik asit için farklılaşma ortamının bileşeni
SigmaR2625Keratinosit için farklılaşma ortamının bileşeni
T / C Petridish 100 mm, 240 / bxTPP93100Plastik eşya
TransferrinSigmaT37053D cilt organoidi
Transwell-COL kollajen kaplı membran ekleri için epitel ortamının bileşeni ve nbsp;CorningCLS34923D cilt organoidi için plastik eşya 
VitronektinYaşam teknolojileriA14700iPSC kültürü
Y-27632 Dihidroklorürpeprotech1293823iPSC kültürü
Fibroblast AggreWell Ortamı için Fibroblast İnsülin İnvtrojeni

Kaynaklar

  1. Vincent, J. F., Bogatyreva, O. A., Bogatyrev, N. R., Bowyer, A., Pahl, A. K. Biomimetics: its practice and theory. Journal of The Royal Society Interface. 3 (9), 471-482 (2006).
  2. Madison, K. C. Barrier function of the skin: "la raison d'etre" of the epiderm....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Kordon Kanı Mononükleer Hücreleri3B Cilt OrganoidiKeratinosit DiferansiyasyonuFibroblast DiferansiyasyonuEmbriyonik Cisim OluşumuTip I KollajenTip IV KollajenROCK İnhibitörüKemik Morfogenetik Protein 4