Embriyonik desen ölçekleme çalışma için zebrafish cerrahi boyutu azaltma

Kana Ishimatsu; Anna Cha; Zach  M. Collins; Sean G. Megason

doi:10.3791/59434

Yöntem makalesi

Embriyonik desen ölçekleme çalışma için zebrafish cerrahi boyutu azaltma

DOI:

10.3791/59434

⸱

3 Mayıs 2019

Kana Ishimatsu¹ , Anna Cha¹ , Zach M. Collins¹ , Sean G. Megason¹

¹Department of Systems Biology, Harvard Medical School

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, biz normal gelişimsel süreçleri bozmadan zebra balığı embriyo boyutunu azaltmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik, boyut değişikliklere karşı desen ölçekleme ve gelişimsel sağlamlık etüdünü sağlar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gelişimsel süreçte, embriyolar vücut boyutlarına karşı vücut desenlerini eşleştirmek için dikkat çekici bir yetenek sergiler; vücut orantısı, belirli sınırlar içinde daha büyük veya daha küçük olan embriyolarda bile korunur. Ölçekleme bu fenomen bir yüzyıl boyunca dikkat çekti rağmen, temel mekanizmaları anlamak, çeşitli boyutlarda embriyo gelişimsel dinamiklerin nicel açıklaması eksikliği nedeniyle sınırlı olmuştur. Bu sınırlamanın üstesinden gelmek için, in vivo canlı görüntüleme için büyük avantajlara sahip olan zebra balığı embriyolarının boyutunu cerrahi olarak azaltmak için yeni bir teknik geliştirdik. Biz ayrı adımlarla Blastula aşamasında hücrelerin ve sarısı dengeli kaldırılması sonra, embriyo hızlı bir şekilde doğru koşullar altında kurtarabilirsiniz ve daha küçük ama başka normal embriyolar içine geliştirmek olduğunu göstermektedir. Bu teknik özel ekipman gerektirmeyen bu yana, kolayca uyarlanabilir ve morphogen aracılı desen sağlamlık da dahil olmak üzere, ölçekleme sorunları geniş bir yelpazede çalışmak için kullanılabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bilim adamları uzun embriyo boyutu büyük ölçüde hem doğal ve deneysel koşullar altında değişebilir rağmen embriyoların sürekli vücut oranlarını oluşturmak için olağanüstü bir yeteneği var bilinen¹^,²^,³. Onlarca yıl süren teorik ve deneysel çalışmalara rağmen, boyutsal varyasyona bu sağlamlık, ölçeklenme ve altta yatan mekanizmalar birçok doku ve organda bilinmiyor. Gelişmekte olan sistemin dinamiklerini doğrudan yakalamak için, zebra balığı⁴' te, in vivo canlı görüntüleme⁵' te büyük bir avantaja sahip olan tekrarlanabilir ve basi....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Balık ile ilgili tüm prosedürler Harvard Tıp fakültesinde kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi 'nin (ıAVUC) onayı ile gerçekleştirilmiştir.

1. alet ve reaktif hazırlama

Embriyo kesmek için bir tel döngü olun
1. 40 μm çapı ile sert ve korozif olmayan 20 cm 'lik paslanmaz çelik tel alın. Kabloyu cam kapiller (1,0 mm dış çapı, 0,5 mm iç çapı, hiçbir filament), üst kısmında küçük bir döngü yapma (döngü uzunluğu 1,0 mm) içine döngü
2. Yerinde tutmak için tel döngü arasında cam kapiller ucunu üzerine açık oje biraz damlacık koyun. Kurumaya bırakın. Eğer embriyo zarar verebilir, dö....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sarısı hacim azaltma normal morfoloji için önemlidir
Son zamanlarda Almuedo-Castillo ve al.¹⁷' de açıklandığı gibi, embriyoların boyutu azaltılması, sarısı hacmini azaltmadan elde edilebilir. Sarısı hacim azaltma ile karşılaştırmak için, hem iki adımlı kesme (hem Blastula hem de sarısı) ve Blastula sadece doğrama (Şekil 2 ve ek film 1) gerçekleştirdik. İki adımlı doğranmış embriyo, gelişimsel aşamalarında ( Şek.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tarihsel olarak, omurgalı hayvanlar arasında, Boyut azaltma genellikle bir Blastula aşamasında hayvan-bitkisel eksen boyunca embriyolar bisecting tarafından, amfitiyomer embriyo kullanılarak yapılmıştır¹². Ancak, biz embriyolar şehri ikiye bölüyor zaman kurbağa ve zebra balığı embriyo arasında ağırlıklı olarak iki fark vardır. İlk olarak, zebra balığı embriyoları bisi (Blastula aşaması) toleranslı olduğunda sahnede, organizatör Blastula marjı¹⁸<.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar hiçbir rekabet veya mali çıkarları beyan.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çalışma, Japonya bilim ve teknoloji Ajansı (JPMJPR11AA) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe (R01GM107733) PRESTO programı tarafından destekleniyordu.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
60 mm PYREX Petri kabı	CORNING	3160-60
Agarose	affymetrix	75817	Canlı görüntüleme için bir montaj yapmak için
Agaroz, düşük jelleşme sıcaklığı Tip VII-A	SIGMA-ALDRICH	A0701-25G
CaCl₂	EMD	CX0130-1	1/3 Ringer çözümü
için CaSO₄			Yumurta suyu için
Kapak kayması (25 mm x 25 mm, Kalınlık 1)	CORNING	2845-25
Tek Kullanımlık Spatula	VWR ve nbsp;	80081-188
Köpük levha	ELMER'S	951300	Mikroskop inkübatörü için
Forcept (No 55)	FST	11255-20
Cam pipet	VWR	14673-043
HEPES	SIGMA Life Science	H4034	1/3 Ringer çözeltisi için
INCUKIT XL Kabin İnkübatörleri için	INKÜBATÖR Warehouse.com		Mikroskop inkübatörü için
Anında deniz tuzu	Instant Ocean	138510	Yumurta suyu için
KCl	SIGMA-ALDRICH	P4504	1/3 Ringer çözeltisi için
Metil selüloz	SIGMA-ALDRICH	M0387-100G
NaCl	SIGMA-ALDRICH	S7653	1/3 Ringer çözeltisi için
Petri kabı	Falcon	351029	İçin Canlı görüntüleme için bir montaj yapmak
Fenol kırmızısı	SIGMA Life Science	P0290
Pipet pompası	BEL-ART ÜRÜNLERİ	F37898
Pronase	EMD Millipore Corp	53702-250KU
Trikain-S (MS222)	BATI KİMYA A.Ş
. NC0135573 Ultra ince parlak tavlanmış 316L çap 0.035 mm Paslanmaz Çelik Dokuma Telleri	Sandra		Kullandığımız tel ~20 yıl önce elde edildi ve tam olarak aynısını bulamadık. Bu ürün, kullandığımız ürünle aynı malzemeye ve çapa sahiptir.

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cooke, J. Scale of body pattern adjusts to available cell number in amphibian embryos. Nature. 290, 775-778 (1981).
Driesch, H. Entwicklungsmechani....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Zebrafish Embryos Size Reduction Technique Blastula Chopping Yolk Wounding Embryo Recovery Somite Formation Neural Tube Scaling Live Imaging Methyl Cellulose Ringer Solution

Embriyonik desen ölçekleme çalışma için zebrafish cerrahi boyutu azaltma

Bu makalede

Özet

Özet

Giriş

Protokol

Sonuçlar

Tartışma

Açıklamalar

Teşekkürler

Malzemeler

Kaynaklar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler