Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bir outflow stenozu ile Aokaval fistül kullanarak Merkezi venöz stenozis murine modeli

7.1K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/59540

⸱

11 Temmuz 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Yale University, 2Vascular Biology and Therapeutics Program, Yale University, 3Department of Vascular Surgery, University of Tokyo, 4Department of Diagnostic Radiology, Tokai University School of Medicine, 5Department of Cardiovascular Surgery, Tokyo Medical University, 6Department of Vascular Surgery, VA Connecticut Healthcare Systems

Bu makalede

Özet

Bir aokaval fistül, her iki duvar üzerinden Vena Cava inferior içine murine infra-renal aort delip tarafından oluşturuldu ve inferior vena cava kısmi ligasyon yoluyla onun çıkış bir stenoz oluşturulması izledi. Bu tekrarlanabilir model, Merkezi venöz stenozu incelemek için kullanılabilir.

Özet

Merkezi venöz stenoz, arteriovenöz fistül (AVF) yetmezliğine katkıda bulunan önemli bir varlıktır. Bir murine AVF modeli, fistül çıkışı, Merkezi venöz stenozis taklit inferior vena kava (ıVC) kısmi bir ligasyon oluşturmak için değiştirildi. Bu modelin teknik yönleri tanıtıldı. Aort ve ıVC, karın kesi sonrasında ortaya çıkar. İnfra-renal aort ve IVC proksimal bağlama için disseke ve distal aort delinme için maruz kalır. Sol böbrek ven ve aort bifurkasyon arasındaki orta noktada IVC dikkatle bir 8-0 yerleştirmek için disseke olduğunu ıVC altında sütür. Aort ve IVC 'yi bağladıktan sonra, bir AVF, her iki duvara da 25 g iğne ile IVC içine infra-renal aort delip, ardından 22 g intra-venöz (IV) kateter ve IVC ile birbirine bağlanarak oluşturulur. Sonra kateter kaldırılır, oklüzyon olmadan yeniden üretilebilen bir venöz stenoz yaratılır. Aort ve ıVC birincil hemostaz onayladıktan sonra UNCL, vardır. Merkezi ven stenozu bu roman modeli, yeniden üretilebilen, gerçekleştirmek kolaydır ve AVF başarısızlığı üzerinde çalışmalar kolaylaştıracaktır.

Giriş

Arteriovenöz fistüller (AVF), Greftler veya Merkezi venöz kateter gibi diğer erişimler ile karşılaştırıldığında üstün patens ve azaltılmış enfeksiyon ile hemodiyaliz için en yaygın erişimlerdir. Ancak, AVF% 60 kadar olgun1,2,3başarısız; Son zamanlarda sistematik bir inceleme, 1 yılda primer patens oranlarının sadece%460 olduğunu bildirdi. Venöz çıkış boyunca stenoz ağırlıklı olarak AVF olgunlaşma başarısızlığa neden olur5,6. Fistül için proksimal stenoza eğilimli bazı karakteristik yerler vardır: radyosefalik fistül için juxtaanastomotik salıncak kesimi, brakiyosefalik fistül için sefalik kemer bölgesi ve daha önce fistül için merkezi ven yerleştirilmiş ipsilateral subklavian veya internal juguler ven kateter7,8.

Merkezi venöz stenoz genellikle AVF olmayan hastalarda asemptomatiktir, ancak venöz hipertansiyon ile ipsilateral ekstremite ödem ve fistül akışı9ile meydan okuyan fistül olgunlaşma yetmezliği neden olabilir. Merkezi venöz stenozun patofizyolojisi büyük olasılıkla inflamasyon ve cihaz yerleştirme sonrası aktif pıhtılaşma basamakıyla ilişkilidir. Ayrıca, kateter ucunun sürekli hareketi ve fistül akışından artan akış, kayma stresini değiştirebilir, trombosit birikimi ve venöz duvar kalınlaşması10' a neden olabilir. Merkezi venöz stenozun neden olduğu AVF yetmezliği temel mekanizmaları anlamak için, bir AVF ile Merkezi venöz stenozu taklit eden bir hayvan modeli gereklidir.

Biz gerçekleştirmek ve Master ve insan AVF klinik ders recapitir kolay bir murine aokaval fistül modeli kurduk. 11 biz, venöz stenoz ile yeni bir MURINE AVF modeli oluşturmak için daha önce kurulan birkaç duvar modelinin kavramları ve tekniği uygulandı. Biz Merkezi venöz stenozis çalışması için kullanılabilecek çıkış fistül bir ıVC stenozu ile bir murine aokaval fistül modeli tanıtmak.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneyler Yale Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıAYUC) onayı ile yapıldı.

1. anestezi ve ameliyat öncesi prosedürler

  1. Tüm cerrahi aletleri ve malzemeleri otoklavlama ile sterilize edin. Sıcak olduğundan emin olmak için termal destek cihazını açın (40 – 42 °C).
  2. Bir akrilik indüksiyon odasına bir 9 – 11-hafta eski C57BL/6 fare yerleştirin ve buharlaşmış 2,5% Isoflurane ve 0,8 L/min oksijen ile anestezize. Anestezi indüksiyon yaklaşık 3 dakika sürer.
  3. Fare odasından çıkarın. Bir ayak tutam, bir kulak tutam ve bir kuyruk tutam ile anestezi derin bir düzlem onaylayın. Fare cerrahi alanda sırtüstü konumuna yerleştirin ve 2,5% Isoflurane silikon maske kullanarak teslim. 0,1 mg/kg analjezik olarak buprenorfik sağlayın ve gözlere oftalmik merhem uygulayın.
  4. Bir saç çıkarıcı nair kullanarak alt karın için boyun ventral tarafında kürk çıkarın.
  5. % 10 povidone-iyot ve 70% isopropanol ile iki adımlı bir fırçalama kullanarak cerrahi siteyi temizleyin ve dezenfekte edin. Cerrahi bir örtü uygulayın.

2. operatif prosedürler

  1. Kelepçe ve delinme siteleri pozlama
    1. Cerrahi boyunca sterilitesi korumak için steril aletler hazırlayın ve steril eldiven giyin.
    2. Alt karaciğer kenarı seviyesinden pubis sadece üzerinde bir neşter ile bir cilt-derin orta çizgi abdominal kesi olun. Karın boşluğu açmak için makas ile kas kesme.
    3. Karına bir Retraktörü takın ve bağırsakları sağ tarafa çekin. Tuzlu ıslatılmış bir gazlı bezle sararak onları nemli tutun. Mesane ve seminal veziküller (erkek fareler) retreive ve onları kaudal tarafına çekin. Aort ve IVC tam bir görünüm elde etmek için bir mikro-iğne tutucu ile rektum ve Retroperiton arasında mezenter incelemek.
    4. İnfra-renal aort ve ıVC en bloğunu, yan ve dorsal çevreleyen retroperitoneal dokulardan, mikro iğne tutucu ile birbirine çapraz kelepçeli bir şekilde keserler.
    5. Sol renal ven aort bifurksiyon için yaklaşık üç-çeyreğinde aort delinme site ortaya çıkarmak için çevredeki dokulara incelemek.
  2. IVC diseksiyonu
    1. Sol böbrek damarına hemen distal infra-renal IVC ve aort arasında ara. Diseksiyonu, sol böbrek ven ve aort bifurkasyonu arasındaki yarıya kadar uzatın, böylece infra-renal ıVC, hem upstream hem de stenoz için aşağı doğru, postoperatif olarak gözlemlenebilir.
      Not: ıVC ve aort arasındaki künt diseksiyonu, ıVC ile aort arasındaki bağ dokusu nispeten gevşek olduğu için hemen distal sol renal ven ile yapılmalıdır.
    2. Bu düzeyde aort ıVC ayırmak ve çevredeki dokudan ıVC incelemek için bir pencere olun. Bir 8-0 yerleştirin İlk olarak ıVC ve aort altında Polyamid monofilament sütür (Şekil 1a), daha sonra dikişle sadece IVC altında konumlandırın (Şekil 1B) sütür ucunu pencereden çekerek.
      Not: ıVC kırılgan olduğu için, aort adventis boyunca diseksiyon, ıFC yanı sıra küçük ıVC veya aort dalları hasar görmesini önlemek için bir pencere yapmak yararlıdır. Kanama oluşursa, kontrol edilemez olması muhtemeldir. IFC farklı yan dalları varsa, bir 8-0 yer dallara distale sütür.
  3. AVF oluşturma
    1. Bir 25 G iğnesini bir noktadan 45 – 60 ° açı ile iğne ucunu ~ 4 mm viraj.
    2. Mikrocerrahi klip uygulayarak infra-renal aort ve ıVC kelepçe.
    3. Aort delinme alanı ortaya çıkarmak için bifurksiyon çevreleyen bağ dokusu saplayarak aort mediale ve kaudal döndürün biraz ventral tarafına gergin.
    4. Aort 'u uygun bir pozisyonda tutarak, hazırlanan 25 G iğnesi (Şekil 1C) kullanılarak aort ile IVC 'ye delinmesi.
    5. Aort bırakın ve çevredeki doku aort sol tarafında yukarı çekerek delinme site kapak. İğne dışarı atın ve yavaşça hemostaz için bir pamuk uçlu çubukla kullanarak delinme sitesine basın.
  4. IVC stenozu oluşturulması
    1. 22 G IV kateterin ucunu ( malzeme tablosunaBAKıN) İVC 'ye uzunlamasına yerleştirin. IV kateter ve ıVC ile birlikte bir 8-0 ile ligate (Şekil 1D) ve ardından IV kateteri çıkarın.
    2. Primer hemostazı onaylayın (Şekil 1e) ve sonra aort ve IVC 'yi gevşetilmeli. Hemostaz sağlamak için 1 dk daha delinme site kapak.
      Not: stenozu distal ıVC trombozu önlemek için çok uzun süre kelepçe etmeyin.
    3. Organları orijinal pozisyonlarına geri dönün ve 6-0 sütürler ile karayı kapatın.

3. ameliyat sonrası prosedürler

  1. Karın yarasının kapanmasından sonra, ısofluran inhalasyonu durdurma. Tek bir yatak ücretsiz kafes içine fareyi koymak ve hipotermi önlemek için bir termal destek cihazına kafes yerleştirin.
    Not: fare onlar elde ve sternal recumbency korumak kadar gözlenir. Yerel ıANUC 'un tavsiyelerine uygun olarak analjezi ve yara bakımı dahil olmak üzere ameliyat sonrası bakım uygulayın. Analjezi için biz 0,1 mg/kg intrasmuscularly her 12 saat 48 h için cerrahi prosedürler takip ve daha sonra gerektiğinde buprenorfik kullanın.
  2. Doppler ultrasonu (bkz. malzeme tablosuna) kullanarak AVF patenslerini postoperatif olarak onaylayın. Buna ek olarak, gerekli diğer gemi ve akış özelliklerini ölçmek.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Erkek fareler, hem AVF hem de ıVC stenozu oluşturmak için yukarıda bahsedilen operasyondan dolayı yapıldı. Kontrol fareleri, ıVC 'yi çevreleyen dokularda sadece laparotomi ve diseksiyon uygulandı, örn. bir sahte prosedür veya bir AVF 'nin eşzamanlı oluşturulması olmadan sadece bir ıVC stenozu yaratılması.

IVC, cerrahi işlemden sonra 7. gün Doppler ultrason ile gözlemlenmiştir (Şekil 2). IVC 'nin fis...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Murine AVF modeli,13,14olgunlaşma yol açan temel mekanizmalar ve moleküler olayları incelemek için kullanılmıştır. Bu çalışmada, fistül çıkış yolu içinde bir ıVC stenozu ile yeni bir murine aokaval fistül modeli oluşturmak için kurulan bir murine AVF modelini değiştirdik. Bizim ligasyon modeli vasküler ligasyon kullanan birkaç önceden açıklanan murine modelleri benzer. Derin ven trombozu bir duvar modeli 30 G iğne spacer ile kısmi ıVC ligasyon kullanılarak oluştu...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Teşekkürler

Bu çalışma ABD Ulusal Sağlık Enstitüsü (NıH) Grant R01-HL128406 tarafından desteklenmektedir; Amerika Birleşik Devletleri Gaziler Işleri bölümü Biyomedikal Laboratuar Araştırma ve geliştirme programı Merit Inceleme Ödülü ı0d-BX002336; yanı sıra kaynakları ve VA Connecticut sağlık sistemi, Batı Haven, CT tesisleri kullanımı ile.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
20-60 Mhz tarama kafasıVisualSonics Inc.RMV-704
8-0 Steril Mikro Sütür, 6mm (140 &mikro;), 3/8 Daire, TAP Nokta İğnesiAROSutureT06A08N14-13poliamid monofilament sütürler
İndüksiyon Odası, 2 Litre
3,75"G x 9,00"D x 3,75"Y		VetEquip941444
Isoflo, İzofluran sıvıZoetis26675-46-7
Fareler, C57BL/6JJackson Laboratuvar664
Pet Yatak Mikrodalga Isıtma YastığıSnuggle Safe6250
PrecisionGlide İğne 25GBD305122
Surflo IV Kateter 22GTerumoSR-OX2225CA0.85mm dış çap
Vasküler kelepçeRoboz Cerrahi AletRS-5424
Vevo770 Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme SistemiVisualSonics Inc.770
adet

Kaynaklar

  1. Dember, L. M., et al. Effect of clopidogrel on early failure of arteriovenous fistulas for hemodialysis: a randomized controlled trial. JAMA. 299 (18), 2164-2171 (2008).
  2. Dixon, B. S. Why don't fistulas mature? Kidney International. 70 (8), 1413-1422 (2006).
  3. Wilmink, T., Hollingworth, L., Powers, S., Allen, C., Dasgupta, I. Natural History of Common Autologous Arteriovenous Fistulae: Consequences for Planning of Dialysis. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 51 (1), 134-140 (2016).
  4. Al-Jaishi, A. A., et al. Patency rates of the arteriovenous fistula for hemodialysis: a systematic review and meta-analysis. American Journal of Kidney Diseases. 63 (3), 464-478 (2014).
  5. Rocco, M. V., Bleyer, A. J., Burkart, J. M. Utilization of inpatient and outpatient resources for the management of hemodialysis access complications. American Journal of Kidney Diseases. 28 (2), 250-256 (1996).
  6. Roy-Chaudhury, P., Sukhatme, V. P., Cheung, A. K. Hemodialysis vascular access dysfunction: a cellular and molecular viewpoint. Journal of the American Society of Nephrology. 17 (4), 1112-1127 (2006).
  7. Quencer, K. B., Arici, M. Arteriovenous Fistulas and Their Characteristic Sites of Stenosis. AJR: American Journal of Roentgenology. 205 (4), 726-734 (2015).
  8. Kian, K., Asif, A. Cephalic arch stenosis. Semin Dial. 21 (1), 78-82 (2008).
  9. Agarwal, A. K. Central vein stenosis. American Journal of Kidney Diseases. 61 (6), 1001-1015 (2013).
  10. Glanz, S., et al. Axillary and subclavian vein stenosis: percutaneous angioplasty. Radiology. 168 (2), 371-373 (1988).
  11. Yamamoto, K., et al. The mouse aortocaval fistula recapitulates human arteriovenous fistula maturation. American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 305 (12), H1718-H1725 (2013).
  12. North American Symptomatic Carotid Endarterectomy Trial. Methods, patient characteristics, and progress. Stroke. 22 (6), 711-720 (1991).
  13. Kuwahara, G., et al. CD44 Promotes Inflammation and Extracellular Matrix Production During Arteriovenous Fistula Maturation. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (6), 1147-1156 (2017).
  14. Protack, C. D., et al. Eph-B4 regulates adaptive venous remodeling to improve arteriovenous fistula patency. Scientific Reports. 7 (1), 15386(2017).
  15. Payne, H., Brill, A. Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis. J Vis Exp. (130), (2017).
  16. Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 297 (4), H1535-H1543 (2009).
  17. Ene-Iordache, B., Remuzzi, A. Disturbed flow in radial-cephalic arteriovenous fistulae for haemodialysis: low and oscillating shear stress locates the sites of stenosis. Nephrology, Dialysis, Transplantation. 27 (1), 358-368 (2012).
  18. Yamamoto, K., et al. Disturbed shear stress reduces Klf2 expression in arterial-venous fistulae in vivo. Physiological reports. 3, (2015).
  19. Remuzzi, A., Ene-Iordache, B. Novel paradigms for dialysis vascular access: upstream hemodynamics and vascular remodeling in dialysis access stenosis. Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 8 (12), 2186-2193 (2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Murin AVF ModeliIVC StenozuCerrahi İşlemDoppler UltrasonVenöz Greft StenozuPrimer Hemostazİnfrarenal AortaVenöz Fistül
Bir outflow stenozu ile Aokaval fistül kullanarak Merkezi venöz stenozis murine modeli
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.