Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

In Vitro ELISA Testi Kuduz Aşısı Potens Değerlendirmek için

13.1K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/59641

⸱

11 Mayıs 2020

 , 
1Unit Antiviral Strategies, OIE Reference Laboratories for Rift Valley Fever Virus & Crimean Congo Hemorrhagic Fever Virus, Institut Pasteur, 2Institut Pasteur de Guinée, Conakry

Bu makalede

Özet

Burada kuduz aşılarında immünojenik glikoprotein içeriğini belirlemek için dolaylı bir ELISA sandviç immünoyakalama açıklar. Bu test glikoprotein düzelticileri tanıyan nötralize monoklonal antikor (mAb-D1) kullanır. Üretim sırasında aşı potens tutarlılığını takip etmek için in vivo NIH testine alternatiftir.

Özet

Hayvan refahı için giderek artan küresel endişe üreticileri ve Ulusal Kontrol Laboratuvarları (OMCLs) Değiştirme, Azaltma ve Laboratuvar hayvan testleri arıtma için 3Rs stratejisi takip teşvik etmektedir. Kuduz aşısı nın gücünü değerlendirmek için NIH testine alternatif olarak dSÖ ve Avrupa düzeylerinde in vitro yaklaşımların geliştirilmesi önerilmektedir. Kuduz virüsü (RABV) partikülünün yüzeyinde glikoprotein indükleyicileri Viral Nötralize Antikorları (VNAb) oluşturmak için büyük immünojeni oluşturur. Monoklonal Antikorların (mAb-D1) glikoproteinin trimerik formunu tanıdığı bir ELISA testi, aşı serilerinin üretimiyle birlikte yerli katlanmış trimerik glikoproteinin içeriğini belirlemek için geliştirilmiştir. Bu in vitro potens testi NIH testi ile iyi bir uyum gösterdi ve RABV aşı üreticileri ve OMCLs tarafından ortak çalışmalarda uygun bulunmuştur. Hayvan kullanımından kaçınmak yakın gelecekte ulaşılabilir bir hedeftir.

Sunulan yöntem, trimerik RABV glikoproteininin iii (aa 330-338) antijenik bölgelerini tanıyan mAb-D1 kullanılarak dolaylı elisa sandviç immünoyakalamasına dayanmaktadır. mAb-D1, aşı da bulunan glikoprotein düzelticilerin hem kaplaması hem de tespiti için kullanılır. Epitop konformasyonel özellikleri nedeniyle tanındığından, potansiyel olarak denatüre glikoprotein (daha az immünojenik) mAb-D1 tarafından yakalanıp tespit edilemez. Test edilecek aşı mAb-D1 ile duyarlı bir plaka içinde kuluçkaya yatırılır. Bağlı trimerik RABV glikoproteinler tekrar mAb-D1 eklenerek tanımlanır, peroksidaz ile etiketlenir ve daha sonra substrat ve kromojen varlığında ortaya çıkar. Test edilen aşı ve referans aşı için ölçülen emiciliğin karşılaştırılması immünojenik glikoprotein içeriğinin belirlenmesine olanak sağlar.

Giriş

50 yıldan fazla olduğundan, NIH testi1 toplu yayından önce kuduz aşısı gücünü değerlendirmek için altın standart bir yöntem olarak kullanılır. Bu test, 14 gün sonra kuduz virüsü (RABV) türü olan Challenge Virus Standard (CVS) ile birlikte test edilecek aşı ile fare gruplarının intraperitoneal bağışıklamalarından oluşur. Potens IC meydan hayatta farelerin oranında değerlendirilir. Who2 ve Avrupa Farmakopesi3 hala aşı potens değerlendirmek için NIH testi gerektirir rağmen, Bu test çeşitli engeller uğrar: sonuçlar son derece değişken4; enfeksiyöz RABV meydan okuma sırasında kullanılır ve bu hem teknik beceri hem de sıkı biyogüvenlik önlemleri gerektirir; hayvanların çok sayıda kullanılır ve meydan şiddeti ciddi etikendişeleri5 yükseltir. Bu testin daha az ciddi bir varyasyonu geliştirilmiştir: intra-periton bağışıklama iki hafta sonra, fareler IC tarafından meydan değil ama kanama lı ve serumda spesifik RABV nötralize antikorların varlığı için test edilmiştir (VNAbs) bir in vitro nötralizasyon testi kullanarak. Ancak, bu test hala veteriner aşıları için kullanımda olmasına rağmen laboratuvar farelerin çok sayıda kurban gerektirir6,7 ve insan aşıları için kabul edilmiştir8.

Şu andan itibaren, hem Uluslararası9 hem de Avrupa10 önerisi, üreticileri ve Ulusal Kontrol Laboratuvarlarını (Official Medicine Control Laboratories - OMCLs) 3R stratejisi olarak adlandırılan laboratuvar hayvan testlerinin değiştirilmesi, azaltılması ve iyileştirilmesi konusunda teşvik etmektedir. Avrupa Direktifi 2010/63/EU (2013/01/01 yılından bu yana yürürlükte) hayvanların korunması ve refahı ile ilgili de kuduz aşılarının Kalite Kontrolü ile ilgili aşı üreticileri ve laboratuvarları için kısıtlamaları güçlendirdi yanı sıra kuduz araştırma11. Sonuç olarak, alternatif in vitro yaklaşımların geliştirilmesi, doğrulanması ve kullanımı artık bir öncelik haline gelmiştir. Bu sadece etik olarak sağlam değil, aynı zamanda toplu test maliyetlerini azaltabilir ve hafta yerine saat sonuçları için süre kısaltmak3.

RABV parçacığının yüzeyinde, glikoprotein trimerik formu benimser12,13,14,15,16. Kuduz aşısında, bu yerli trimerik form vnabs indükleyen büyük immünojen oluşturur17 ise monomerik, çözünür veya denatüre glikoproteinler kötü immünojenik18,19. Bu nedenle, aşı üretim süreci boyunca glikoprotein düzelticilerin korunması optimal immünojenik potansiyelin korunması için iyi bir göstergedir. Antikor-bağlayıcı-test20,,21, tek radyal immünodiffüzyon (SRD) testi22 ve ELISA testi23,24,,25,26,,27 gibi çeşitli immünokimyasal yöntemler, kuduz aşılarında antijen içeriğini ölçmek için WHO Teknik Rapor Serisi2 ve Avrupa monografisi3 tarafından tavsiye edilir.24 Bu aşı üretiminin tutarlılığını izlemek için üreticiler tarafından kullanılan ve OMCL tarafından insan aşıları28toplu tutarlı formülasyon değerlendirmek için, NIH testi hala potens için kabul olsa bile.

Ancak, tüm bu immünokimyasal yöntemler eşdeğer değildir. SRD testi membran demirli süsleyiciler değiştirebilir ve glikoprotein,22,29çözünür veya denatüre formu neden olabilir bir ön tedavi gerektirir. Bu nedenle, SRD bir aşı çok immünojenite kusurlu bir değerlendirme ile sonuçlanan immünojenik ve non-immünojenik glikoproteinler arasında ayrım çok verimli değildir. Buna karşılık, ELISA testi dahaduyarlıdır 22, glikoproteinin doğal yapısını korur, ve glikoprotein doğal katlanmış trimers içeriğini belirlemek için daha uygundur. ELISA testi tavşan poliklonal veya fare monoklonal anti-glikoprotein antikorları saflaştırılmış veya amonyum sülfat ile konsantre kullanabilirsiniz. Çalışmalar, NIH testi ile aşılarda ELISA tarafından değerlendirilen antijen içeriği arasında iyi bir uyum olduğunu göstermiş ve ELISA yöntemlerinin in vitro potens testi için uygun olduğu sonucuna varmıştır. Bu ELISA testleri en azından ek olabilir ya da hatta NIH testi4,26,27,30,31,32,33değiştirebilirsiniz savunucuları ., Bugün, Avrupa Farmakopesi NIH testi3alternatif olarak doğrulanmış serolojik veya immünokimyasal tahlillerin kullanılmasını önerir. Aşı potens için hayvan kullanımıtam kaçınma gerçekçi bir bakış açısı haline gelmiştir.

Aşağıda sunulan yöntem, trimerik RABV glikoprotein15,34antijenik siteleri III (aa 330-338) tanır bir fare monoklonal antikor klonu (mAb-D1) kullanarak dolaylı bir ELISA sandviç immünoyakalama dayanmaktadır. Bu yöntem başlangıçta Institut Pasteur26geliştirilmiştir ,30 sonra optimize edilmiş ve Agence Nationale de Sécurité du Médicament et des produits de santé tarafından doğrulandı (ANSM) laboratuvar, yani, Fransız OMCL4,33. mAb-D1 hem plakayı algılamak hem de yakalanan antijeni tespit etmek için kullanılır. Bu glikoprotein düzelticiler, yani, immünojenik RABV antijeninin spesifik niceliklenmesine olanak sağlar. Algılama için kullanılan mAb-D1 peroksidaz ile etiketlenir, hangi substrat ve kromojen varlığında ortaya çıkar. Test edilen aşı ve referans aşı için ölçülen emiciliğin karşılaştırılması immünojenik glikoprotein içeriğinin belirlenmesine olanak sağlar. RABV glikoprotein35'infarklı antijenik bölgelerini tanıyan farklı mAb'ler için aynı tip bir titreşme uygulanabileceği dikkat ivedidir. Amonyum sülfat anti-glikoprotein poliklonal tavşan immünglobulinleri G (IgG) veya monoklonal fare globulinleri elde etme ve arındırma veya konsantre etme yöntemi, peroksidaz ile antikorları bir araya getirmek için kullanılan yöntemle birlikte daha önce36 olarak açıklanmıştır37.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Güvenlik önlemleri

NOT: Bu yöntem hem canlı RABV hem de inaktive aşı için geçerlidir.

  1. İyi Laboratuvar Uygulamaları ve Güvenlik prosedürleri kullanın.
  2. Tek kullanımlık palto, eldiven, maske, gözlük vb. dahil olmak üzere yeterli Kişisel Koruma Ekipmanı (PPE) giyin.
  3. Canlı virüs titre edildiğinde, sınıf II biyolojik güvenlik kabini kullanın.
    1. Numunelerle temas eden herhangi bir malzemeyi (reaktifler, yıkama solüsyonları, vb.) enfeksiyöz malzeme olarak düşünün.
    2. Dekontaminasyon için 30 dakika boyunca çamaşır suyu çözeltisi (sodyum hipokloritin %2,5'i) içine daldırarak kirlenmiş malzemeyi tedavi edin.
  4. İyi Laboratuvar Uygulamasına uygun olarak kimyasalları sapla.

2. Hazırlık

  1. Mümkün olduğunca analitik sınıf reaktifler kullanın.
  2. Kaplama tamponu/karbonat tamponu, passiv tamponu, dilüent ve sitrat tamponunun(Tablo 1),0,45 veya 0,22 μm filtrelerden süzülüğe taze çözeltiler hazırlayın ve analitik saflıklarını korumak için kullanımdan önce 4 °C'de bir gün saklayın.
  3. Reaktiflerin kullanımdan 30 dk önce oda sıcaklığına (+18 °C ila +25 °C) ulaşmasını bekleyin ve kullanımdan önce hafif bir karıştırma ile homojenize olun.

3. Mikroplaka duyarlılığı

NOT: Yüksek miktarda İmmünoglobulin bağlamak için optimize edilmiş 96 iyi adsorpsiyon immünoassay plakası kullanın (örn. Bkz. Malzeme Tablosu).

  1. Her kuyuiçin, karbonat tamponunda seyreltilmiş monoklonal antikor (mAb-D1) 200 μL ekleyin.
    NOT: Yaklaşık 1 μg/mL'lik optimal konsantrasyon deneysel olarak belirlendi ve saflaştırılmış mAb-D1'in yaklaşık 1/2000 seyreltilmesine karşılık gelmektedir. Bu önerilen konsantrasyon her mAb-D1 toplu iş için gösterilir ve periyodik olarak pozitif kontrol ile doğrulanmalıdır.
  2. Plakayı yapışkan bir filmle kaplayın ve mikro plakayı nemli bir atmosferde 37 °C'de 3 saat kuluçkaya yatırın.
  3. Kuyu içeriğini dikkatlice aspire edin ve %2,5 sodyum hipoklorit çözeltisi içeren bir alıcıya aktarın.
  4. Mikroplakaters ve 5 dakika oda sıcaklığında bir adsorbent kağıt üzerinde kurumaya bırakın.

4. Mikroplaka passivation

  1. Her kuyuya, passivation arabelleği 300 μL ekleyin.
  2. Plakayı yapışkan bir filmle kaplayın ve 37 °C'de 30 dakika kuluçkaya yatırın.
  3. İyi içeriği dikkatlice aspire edin ve %2,5 sodyum hipoklorit çözeltisi içeren bir alıcıya aktarın.
  4. Mikroplakaters ve 1 dakika oda sıcaklığında bir adsorbent kağıt üzerinde kurumaya bırakın.
    NOT: Mikroplaka, kullanıma kadar 3 ay süreyle -20 °C'de kullanılabilir veya saklanabilir.

5. ELISA tsası

NOT: Referans aşının kontrol eğrisinin oluşturulması için Adım 5.3 gerekli değildir; test edilen aşıyı titreetmek için tüm Adımlar 5.1 ile 5.6 arasında gereklidir.

  1. Hassaslaştırılmış mikroplakanın yıkanması
    1. Her kuyuya 300 μL yıkama tamponu ekleyin.
    2. İyi içeriği dikkatlice aspire edin ve %2,5 sodyum hipoklorit çözeltisi içeren bir alıcıya aktarın.
    3. Duyarlı plakayı kapsamlı bir şekilde yıkamak için 5.1.1 ve 5.1.2 adımlarını beş kez daha tekrarlayın.
    4. Mikroplakaters ve 1 dakika oda sıcaklığında bir adsorbent kağıt üzerinde kurumaya bırakın.
  2. Kontrol eğrisi için referans aşının seyreltilmesi
    1. 1 mL distile su daki referans aşıyı (doğrulama antijeni Lot 09) yeniden oluşturmak, kuduz virüsü glikoproteininin 10 μg/mL konsantrasyonuna karşılık gelen distile suyun.
    2. Kuduz virüsü glikoproteininin 1 μg/mL'sine ulaşmak için seyrelticide yeniden oluşturulmuş referans aşının on kat seyreltilmesini hazırlayın.
    3. Tablo 1'debelirtildiği gibi seyreltici de bu referans aşının 6 seri iki kat seyreltme hazırlayın.
    4. Boş bir denetim olarak hizmet vermek için 200 μL'lik ayrıştırmayı yinelenen (kuyu1H/2H) dağıtın.
    5. Her referans aşı seyreltme kuyusu başına 200 μL'yi yinelenen olarak dağıtın (G1/G2'den A1/A2'ye kadar olan kuyular).
  3. Titrasyonu için test edilen aşının seyreltmeleri
    1. Seyreltici de test edilen aşının on kat seyreltilmesini hazırlayın.
    2. Test edilen aşının 7 iki kat seri seyreltmelerini Tablo 2'debelirtildiği gibi seyreltici olarak hazırlayın.
    3. Her test aşısı seyreltme kuyusu başına 200 μL'yi yinelenen olarak dağıtın (H3/H4'tan A3/A4'e kadar olan kuyular).
  4. ELISA plakasının Kuluçka/Yıkama
    1. Mikro plakayı yapışkan bir filmle kaplayın ve 37 °C'de 1 saat kuluçkaya yatırın.
    2. Filmi çıkarın, dikkatlice aspire edin ve her kuyunun içeriğini %2,5 sodyum hipoklorit çözeltisi içeren bir alıcıya aktarın.
    3. Her kuyu için 300 μL yıkama tamponekleyin.
    4. Aspire dikkatle ve her kuyunun içeriğini% 2,5 sodyum hipoklorit çözeltisi içeren bir alıcıya aktarın.
    5. Bağlanmamış antijeni çıkarmak ve kaplanmış antikora bağlı G protein düzelticilerini (mAb D1) korumak için 5.4.3 ve 5.4.4 adımlarını beş kez tekrarlayın.
    6. Mikroplakaters ve 1 dakika oda sıcaklığında bir adsorbent kağıt üzerinde kurumaya bırakın.
  5. Peroksidaz konjuge mAb-D1'in bağlanması
    1. Önerilen seyreltme kuyubaşına 200 μL (1/2000) peroksidaz etiketli mAb-D1'i seyreltici olarak dağıtın (yaklaşık 1μg/mL konsantrasyonu). Önerilen konsantrasyon her mAb-D1 toplu iş için gösterilir ve periyodik olarak pozitif kontrol ile doğrulanmalıdır.
    2. Mikro plakayı yapışkan bir filmle kaplayın ve 37 °C'de 1 saat kuluçkaya yatırın.
    3. Filmi çıkarın, dikkatlice aspire edin ve her kuyunun içeriğini %2,5 sodyum hipoklorit çözeltisi içeren bir alıcıya aktarın.
    4. Her kuyuya, 300 μL yıkama tamponu ekleyin.
    5. Aspire dikkatle ve her kuyunun içeriğini% 2,5 sodyum hipoklorit çözeltisi içeren bir alıcıya aktarın.
    6. Bağlı olmayan peroksidaz etiketli antikorları (mAb D1) çıkarmak için 5.5.4 ve 5.5 adımlarını beş kez tekrarlayın.
    7. Mikroplakaters ve 1 dakika oda sıcaklığında bir adsorbent kağıt üzerinde kurumaya bırakın.
  6. Bir substrat-kromojen kullanarak vahiy
    1. Substrat-kromojen çözeltisi kuyubaşına 200 μL dağıtın.
    2. Bir film ile mikroplaka mühür ve 30 dakika oda sıcaklığında karanlıkta kuluçka. Sarı-turuncu renk, bağlı peroksidaz etiketli antikor (mAb D1) miktarıile orantılı olan yoğunluğu nu geliştirir.
    3. Kuyu başına 50 μL durdurma çözeltisi ekleyerek reaksiyonu durdurun.
    4. Mikroplakanın altını dikkatlice silin ve kullanılan tüm kuyuların 492 nm'deki optik yoğunluğunu (OD) belirlemek için bir spektrofotometreye yerleştirin: negatif kontrol (boş), referans aşı ve test edilmiş aşı.
    5. Analiz için OD verilerini .xls veya .xlsx dosya biçimi olarak toplayın.
  7. Referans aşı eğrisi, trimerik glikoprotein içeriği, optik yoğunluğu (492 nm) bir fonksiyonu olarak çizin
    1. Referans aşının farklı seyreltmelerinde her yineleme için ortalama OD'yi 492 nm olarak hesaplayın (Tablo 2'dekiG1/G2'den A1/A2'ye kadar)
    2. Hesaplanan her ortalama OD'den Boş 'un (kuyular, Tablo 2'dekiH1/H2) ortalama OD'sini çıkarın.
    3. Ortaya çıkan OD değerlerini dikey eksen (doğrusal ölçek) ve glikoprotein düzelticilerde (ng/mL) yatay eksen (logaritmik ölçek) ile ilgili konsantrasyonu çizin.
    4. Noktaları birleştirerek referans eğrisiçizin (Şekil 1).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Aşağıdaki örnekte saflaştırılmış inaktive kuduz virüs partiküllerinden (PV aşısı türü) oluşan referans aşı Lot 09 kullanılmaktadır. Bu nda glikoprotein düzelticiler (10 μg/mL) içeriği, toplam viral protein miktarının (BCA testi) belirlenmesi ve glikoprotein insiat yüzdesi SDS-poliakrilamid jel elektroforezi ile değerlendirildikten sonra oluşturulmuştur. Alternatif olarak, kuduz Aşısı için WHO6'ncı Uluslararası Standart (IS) (NIBSC kodu: 07/162) kalibre edilmiş bir referans aşı ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

mAb-D1 tarafından tanınan epitop, rabv glikoproteininin antijenik bölgesi III'te yer alır ve bu sadece VNAb'lerin indüksiyonu için immündominant olmakla kalmamış, aynı zamanda nörovikurallılık, patojenite40,41 ve reseptör tanıma42'deyer almaktadır. Glikoprotein boyunca başka bir önemli antijenik site vardır, site II43, karşı birkaç MAbs mAb-WI-111235gibi izole edilmiştir. Bunlar benzer türde ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Dr. Sylvie Morgeaux ve Dr. Jean-Michel Chapsal, aşı serileri konusunda ELISA titreşmelerini oluşturmak ve uluslararası çalıştaylar ve işbirlikçi çalışmalar düzenlemek için temel katılımları için kabul edilmelidir. Sabrina Kali'ye el yazmasının eleştirel okuması için teşekkür ederiz. Dr. Pierre Perrin mAb-D1'in izolasyon ve karakterizasyonundan sorumluydu. Bu çalışma ağırlıklı olarak Institut Pasteur finansmanı tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Sınıf II Biyolojik Güvenlik KabiniThermoFisher Scientific10445753canlı virüs titrasyonu yapılıyorsa
Şeffaf Düz Tabanlı İmmüno Steril Olmayan 96 Kuyulu Plakalar, 400 & L, MAXISORPThermoFisher Scientific439454 yüklü antikora bağlanmak için iyi
Sülfürik asitLabo Polipropilen Laboratuvar ÇekerOcak, ThermoFisher Scientific12576606
Güçlü
Adsorpsiyon MAXISORP Düz Tabanlı
Kuyusu F96		Dutscher55303yüklü antikora bağlanmak için iyi
Mikroplaka Sızdırmazlığı Bant (100 yaprak)ThermoFisher Scientific15036
Mikroplaka ve nbsp; tek modlu okuyucu SunriseTECAN
Mikroplaka çalkalayıcı-inkübatörDutscher441504
Mikroplaka yıkayıcı WellwashThermoFisher Scientific5165000
Çok kanallı pipet (30-300 ve mikro; L) 12 kanallıThermoFisher Scientific4661180N
pipetler (Kit 2: Finnpipettes F2 0.2-2 & mu; L mikro, 2-20 & mu; L, 20-200 μ L & 100-1000 & mu; L)ThermoFisher Bilimsel4700880
İmmünoloji Plakasının hazırlanması için donatın Tek Kanallı

Kaynaklar

  1. Seligmann, E. B. The NIH test for potency. Laboratory Techniques in Rabies. , 3rd Edition, WHO Geneva. 279-286 (1973).
  2. Annex 2. Recommendations for inactivated rabies vaccine for human use produced in cell substrates and embryonated eggs. WHO Technical Report Series. 941, WHO Geneva. 83-132 (2007).
  3. Rabies vaccine for human use prepared in cell cultures. European Pharmacopoeia. , (2008).
  4. Gibert, R., Alberti, M., Poirier, B., Jallet, C., Tordo, N., Morgeaux, S. A relevant in vitro ELISA test in alternative to the in vivo NIH test for human rabies vaccine batch release. Vaccine. 31, 6022-6029 (2013).
  5. Stokes, W., et al. Report on the international workshop on alternative methods for human and veterinary rabies vaccine testing: state of the science and planning the way forward. Biologicals. 40 (5), 369-381 (2012).
  6. Krämer, B., Bruckner, L., Daas, A., Milne, C. Collaborative study for validation of a serological potency assay for rabies vaccine (inactivated) for veterinary use. Pharmeuropa Bio & Scientific Notes. 2, 37-55 (2010).
  7. Krämer, B., Kamphuis, E., Hanschmann, K. M., Milne, C., Daas, A., Duchow, K. A multi-dose serological assay suitable to quantify the potency of inactivated rabies vaccines for veterinary use. Biologicals. 41, 400-406 (2013).
  8. Fitzgerald, E. A., Gallagher, M., Hunter, W. S., Seligmann, E. B. Jr Use of the antibody assay in immunized mice for the determination of rabies vaccine potency. Developments in Biological Standardization. 40, 183-186 (1978).
  9. Brown, F., Cussler, K., Hendriksen, C. WHO activities towards the three Rs in the development and control of biological products. Replacement, reduction and refinement of animal experiments in the development and control of biological products. , Karger. 31-39 (1996).
  10. Behr-Gross, M. E., Spieser, J. M. Contributions of the European OMCL Network and Biological Standardisation Programme to animal Welfare. ALTEX-Alternatives to Animal Experimentation. 23, 21-28 (2006).
  11. Directive 2010/63/EU of the European Parliament and the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official Journal of European Union. L276, 33-79 (2010).
  12. Whitt, M. A., Buonocore, L., Prehaud, C., Rose, J. K. Membrane fusion activity, oligomerization and assembly of the rabies virus glycoprotein. Virology. 185 (2), 681-688 (1991).
  13. Gaudin, Y., Ruigrok, R. W., Tuffereau, C., Knossow, M., Flamand, A. Rabies virus glycoprotein is a trimer. Virology. 187, 627-632 (1992).
  14. Roche, S., Gaudin, Y. Characterization of the equilibrium between the native and fusion-inactive conformation of rabies virus glycoprotein indicates that the fusion complex is made of several trimers. Virology. 297 (1), 128-135 (2002).
  15. Desmézières, E., Maillard, A. P., Gaudin, Y., Tordo, N., Perrin, P. Differential stability and fusion activity of Lyssavirus glycoprotein trimers. Virus Research. 91 (2), 181-187 (2003).
  16. Koraka, P., et al. A recombinant rabies vaccine expressing the trimeric form of the glycoprotein confers enhanced immunogenicity and protection in outbred mice. Vaccine. 32 (36), 4644-4650 (2014).
  17. Wiktor, T., Gyorgy, E., Schlumberger, D., Sokol, F., Koprowski, H. Antigenic properties of rabies virus components. Journal of Immunology. 110, 269-276 (1973).
  18. Gamoh, K., Senda, M., Itoh, O., Muramatsu, M., Hirayama, N., Koike, R., et al. Use of ELISA for in vitro potency test of rabies vaccines for animal use. Biologicals. 24, 95-101 (1996).
  19. Dietzschold, B., Wiktor, T., Wunner, W., Varrichio, A. Chemical and immunological analysis of the rabies soluble glycoprotein. Virology. 124, 330-337 (1983).
  20. Fitzgerald, E., Green, O., Seligmann, E. Rabies vaccine potency testing: a comparison between the antibody-binding test and the NIH test. Symposia Series in Immunobiological Standard. 21, 300-307 (1974).
  21. Barth, R., Groβ-Albenhausen, E., Jaeger, O., Milcke, L. The antibody-binding test, a useful method for quantitative determination of inactivated rabies virus antigen. Journal of Biological Standardization. 9, 81-89 (1981).
  22. Ferguson, M., Schild, G. A single-radial-immunodiffusion technique for the assay of rabies glycoprotein antigen: application for the potency tests of vaccines against rabies. Journal of General Virology. 59, 197-201 (1982).
  23. Atanasiu, P., Perrin, P., Delagneau, J. F. Use of an enzyme immunoassay with protein A for rabies antigen and antibody determination. Developments in Biological Standardization. 46, 207-215 (1980).
  24. van der Marel, P., van Wezel, A. Quantitative determination of rabies antigen by ELISA. Developments in Biological Standardization. 50, 267-275 (1981).
  25. Adamovicz, P., Aguillon, F., David, A., Le Fur, R., Mazert, M. C., Perrin, P., et al. The use of various immunochemical, biochemical and biological methods for the analysis of rabies virus production in tissue cultures. Developments in Biological Standardization. 55, 191-197 (1984).
  26. Lafon, M., Perrin, P., Versmisse, P., Sureau, P. Use of monoclonal antibody for quantification of rabies vaccine glycoprotein by enzyme immunoassay. Journal of Biological Standardization. 13, 295-301 (1985).
  27. Thraenhart, O., Ramakrishnan, K. Standardization of an enzyme immunoassay for the in vitro potency assay of inactivated tissue culture rabies vaccines: determination of the rabies virus glycoprotein with polyclonal antisera. Journal of Biological Standardization. 17, 291-309 (1989).
  28. Council of Europe. Official Authority Batch release of Rabies vaccines Guideline. , PA/PH/OMCL (11) 173 DEF (2019).
  29. Ferguson, M., Seagroatt, V., Schild, G. A collaborative study on the use of single radial immunodiffusion for the assay of rabies virus glycoprotein. Developments in Biological Standards. 12, 283-294 (1984).
  30. Perrin, P., Morgeaux, S., Sureau, P. In vitro rabies vaccine potency appraisal by ELISA: advantages of the immunocapture method with a neutralizing anti-glycoprotein monoclonal antibody. Biologicals. 18, 321-330 (1990).
  31. Rooijakkers, E. J., Uittenbogaard, J. P., Groen, J., Osterhaus, A. D. Rabies vaccine potency control: comparison of ELISA systems for antigenicity testing. Journal of Virological Methods. 58, 111-119 (1996).
  32. Rooijakkers, E. J., Uittenbogaard, J. P., Groen, J., van Herwijnen, J., Osterhaus, A. D. Development and evaluation of alternative testing methods for the in vivo NIH potency test used for the quality control of inactivated rabies vaccines. Brown, F., Cussler, K., Hendriksen, C. , Karger. 137-145 (1996).
  33. Fournier-Caruana, J., et al. Inactivated rabies vaccine control and release: use of an ELISA method. Biologicals. 31, 9-16 (2003).
  34. Sissoëff, L., Mousli, M., England, P., Tuffereau, C. Stable trimerization of recombinant rabies virus glycoprotein ectodomain is required for interaction with the p75NTR receptor. Journal of General Virology. 86, 2543-2552 (2005).
  35. Morgeaux, S., et al. Replacement of in vivo human rabies vaccine potency testing by in vitro glycoprotein quantification using ELISA - Results of an international collaborative study. Vaccine. 35 (6), 966-971 (2017).
  36. Lafon, M. Techniques for the production, screening and characterisation of monoclonal antibodies. Laboratory techniques in rabies, 4th Edition. Meslin, F. X., Kaplan, M. N., Kopowski, H. , WHO. Geneva. 133-144 (1996).
  37. Perrin, P. Techniques for the preparation of rabies confugates. Laboratory techniques in rabies, 4th Edition. Meslin, F. X., Kaplan, M. N., Kopowski, H. , WHO. Geneva. 433-444 (1996).
  38. Barth, R., Diderrich, G., Weinmann, E. NIH test, a problematic method for testing potency of inactivated rabies vaccine. Vaccine. 6, 369-377 (1988).
  39. Jallet, C., et al. Chimeric lyssavirus glycoproteins with increased immunological potential. Journal of Virology. 73, 225-233 (1999).
  40. Dietzschold, B., et al. Characterization of an antigenic determinant of the glycoprotein that correlates with pathogenicity of rabies virus. Proceedings of the National Academy of Science U.S.A. 80, 70-74 (1983).
  41. Seif, L., Coulon, P., Rollin, P., Flamand, A. Rabies virulence: effect on pathogenicity and sequence characterization of rabies virus mutations affecting antigenic site III of the glycoprotein. Journal of Virology. 53, 926-934 (1985).
  42. Lafon, M. Rabies virus receptors. Journal of Neurovirology. 11, 82-87 (2005).
  43. Benmansour, A., Leblois, H., Coulon, P., Tuffereau, C., Gaudin, Y., Flamand, Y., Lafay, A. Antigenicity of the rabies virus glycoprotein. Journal of Virology. 65, 4198-4203 (1991).
  44. Rabies Vaccine Workshop Summary. , http://ntp.niehs.nih.gov/iccvam/meetings/rabiesvaccwksp-2011/rabiesvaccinewkspsumm-30nov11.pdf (2011).
  45. De Mattia, F., et al. The Vaccines Consistency Approach Project: an EPAA initiative. Pharmeuropa Bio & Scientific Notes. 2015, 30-56 (2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

n Vitro TestN tralize Edici AntikorlarGlikoprotein TrimeriMonoklonal AntikorSeri Dil syonOptik Yo unlukReferans AA Serisi
In Vitro ELISA Testi Kuduz Aşısı Potens Değerlendirmek için
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.