Biz transplantasyon için basit ve verimli bir yöntem sağlamak 2 '-deoxyguanosine bir çıplak fare renal kapsül içine e 18.5 timus tedavi. Bu yöntem, hem timik epitelyal hücreler fonksiyon ve T hücrelerinin olgunlaşma çalışmada Yardımcısı olmalıdır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Çıplak farelerde 2 '-Deoxyguanosine tedavi Murine embriyonik Thymus renal subkapsüler nakli
Bu makalede
Özet
Özet
Timus, T hücrelerinin gelişiminde ve farklılaşması konusunda önemli bir rol oynayan büyük bir merkezi bağışıklık organıdır. Thymus transplantasyonu tymik epitelyal hücre fonksiyonunu ve T hücrelerinin olgunlaşma in vivo araştırılması için önemli bir yöntemdir. Burada laboratuvarımızda 2 '-deoksinozin (donör lenfositleri tüketmek için) nakli için kullanılan deneysel yöntemleri açıklayacağız bir korele çıplak fare renal kapsül içine embriyonik timus tedavi. Bu yöntem hem basit hem de etkilidir ve özel beceriler veya aygıtlar gerektirmez. Bu basit yöntem ile elde edilen sonuçlar, nakledilen timus 'un alıcının T hücrelerinin üretimini etkili bir şekilde destekleyebilildiğini göstermiştir. Ayrıca, protokole ilişkin birkaç önemli nokta daha da uzatın.
Giriş
Timus merkezi bağışıklık organı, timus timositleri içinde pozitif ve negatif seçim geçmesi, ve olgun T hücreleri olmak1,2. Anormal pozitif veya negatif seçim sonucu immünyetmezlik veya otoimmün patolojiler sırasıyla3,4. Bu nedenle, timus organ nakli, bağışçının timus 'ta T hücrelerinin seçimi sürecini incelemek için önemli bir yaklaşımdır. Bu yöntem özellikle mutasyona uğramış embriyonik ölümcül fenotip neden gen mutasyonlar tarafından aracılı thymik epitelyal fonksiyon analiz ederken önemlidir5.
Nakl....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Sunulan protokol, Jinan Üniversitesi 'nin hayvan bakımıyla ilgili etik komitesinin yönergelerine bağlıdır.
Not: kullanılan malzemeler malzeme tablosunda listelenir.
1. embriyonik timus izolasyonu
- Deney öncesi tüm cerrahi aletler otoklav ve 70% etanol ile Bench/Hood sterilize.
- Karbondioksit kullanarak, anestezi ve hamile kadın fare ötenize (18,5 gün başarılı çiftleşme sonrası). Ardından karın bölgesini% 70 etanol ile silin.
Not: burada Insm1+/lacz kadın ve Insm1+/lacz erkeklerde montaj ilişkili. Her embriyo için embr....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada iki tam lob (Şekil 1) içeren izole e 18.5 timus gösterir. Ayrıca, biz infüzyon tüpü üzerinde bir eğim oluşturmak için kırpılmış olan kafa derisi ven iğne göstermek (Şekil 2). Sonra, aynı zamanda böbrek Kapsülü (Şekil 3A) ve timus (şekil3B) alıcı fareler içinde büyüme 8 hafta sonra nakledilen timus konumunun temsili bir görüntü göstermektedir. T hücrelerinin bir timus ile nakledilen çıplak fareler.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Embriyonik timus renal subkapsüler transplantasyonu, thymik epitelyal hücrelerin fonksiyonunun ve T hücrelerinin olgunlaşma sürecinin içinde vivo olarak incelenmesi için önemli bir yöntemdir. Embriyonik timus organ kültürü ve transplantasyon6,7üzerinde çeşitli deneysel çalışmalar olmasına rağmen, protokolümüz, murin embriyonik timus kültürü ve renal subkapsüler üzerinde basit bir alternatif prosedür sağlar. Eski timus dokusu için transplantasyon.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Herhangi bir ilgi çakışması ilan edildi.
Teşekkürler
Bu çalışma, Jinan Üniversitesi başlangıç paketi ile S.J. ve bilim ve teknoloji programı Guangzhou Çin (Grant No 201704020209 için S.J.) tarafından desteklenmektedir. Biz yazma redaksiyon ve düzenleme için Amy botta (Biyoloji bölümü, York Üniversitesi, Toronto, on M3J 1p3, Kanada) teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 0.5 Povidone iyot | Shanghai Likang Distinfectant Hi-Tech Co.Ltd | 20171113 | |
| % 0.9 Sodyum Klorür Enjeksiyonu | Shandong Qilu Pharmaceuyical Co.Ltd | 2C17112101 | |
| 1 mL Steril şırınga | Solarbio | YA1090 | |
| 2'-Deoksiguanozin | MEC | HY-17563 | DMSO'da 1M, 1:800 (son 1.25mM) |
| 24 Kuyulu Plaka | Corning Incorporated | Costar 3524 | |
| 4-0 İplikli cerrahi sütür iğneleri | NingBo Cheng-He Mikrocerrahi Aletler Fabrikası Çin | YY0166-2002 | |
| 60mm Hücre Kültürü Tabağı | Corning Incorporated | 430166 | |
| 70 ETOH | LIRCON | 20181221 | |
| APC anti-fare CD8a antikorları | Biolegend | 100711 | 1:100 |
| Bükülmüş uçlu ince forseps, JZ 10 cm | Şangay Tıbbi Cihazlar Group Co., Ltd. | JD1060 | Kullanmadan önce sterilize etmek için |
| Enjeksiyon için Sefmetazol Sodyum | Sichuan Hexin Pharmaceutical co, Ltd | 0.5ml %0.9 NaCl çözeltisinde 079 6mg, 7.5ul/g vücut ağırlığı | |
| Diseksiyon makası, JZ 10 cm | Şangay Tıbbi Cihazlar Group Co., Ltd. | JC2303 | kullanmadan önce sterilize etmek |
| için (FBS? | GIBCO | 10270-106 | |
| İnce forseps, JZ 10 cm | Şangay Tıbbi Cihazlar Group Co., Ltd. | JD1050 | Kullanmadan önce sterilize etmek için |
| Akış sitometrisi | BD | FACSCanto II | |
| Flunixin meglumine | MACLIN | F810147 | 1ml içinde 1 mg %0.9 NaCl çözeltisi, 2ul/g vücut ağırlığı |
| Forseps, Dumont#5 | World Precision Instruments | 14098 | Kullanmadan önce sterilize etmek için |
| Kızılötesi lamba | OTLAN | MT-810 | |
| İğne tutucu, JZ 14 cm | Şangay Tıbbi Cihazlar Group Co., Ltd. | J32010 | Kullanmadan önce sterilize etmek için |
| PE anti-fare CD4 | Biolegend | 100511 | 1:100 |
| Penisilin-Streptomisin karışımı | GIBCO | 15140122 | 1:100 |
| Pentobarbital sodyum tuzu | Sigma | P3761 | PBS'de %1.5 çözelti, 75ug/g vücut ağırlığı |
| RPMI1640 Orta | GIBCO | C14-11875-093 | |
| Kafa derisi damar iğnesi | Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd | XC001 | |
| Yaylı makas | VANNAS | S11014-12 | Stereomikroskop kullanmadan önce sterilize etmek için |
| OLYMPUS | SZ61 | ||
| Steril 15cm pamuklu çubuk | Guangzhou Haozheng | 20150014 | |
| Steril gazlı bez 5 cm x 7 cm-8P | Guangzhou Haozheng | 20172640868 | |
| Steril PBS (1x) | GENOM | GNM20012 | |
| Doku forsepsleri, JZ 12,5 cm | Şangay Tıbbi Cihazlar Group Co., Ltd. | J41010 | Kullanmadan önce sterilize etmek için |
Kaynaklar
- Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don't see). Nature Reviews Immunology. 14, 377-391 (2014).
- Hogquist, K. A., Baldwin, T. A., Jameson, S. C.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
