Aşağıdaki prosedür, genetik olarak tasarlanan bir fare modelini kullanarak, murine dorsal deride melansitik tümör başlamasını uzamsal ve temporal kontrol etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol makroskopik ve mikroskopik kutanöz Melanom inisiyasyonu açıklanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Mutant melanosit kök hücrelerinden Murine Melanoma başlangıcı uzamsal ve temporal kontrol
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Kutanöz Melanom en agresif cilt kanseri olarak bilinir. Risk faktörleri ve büyük genetik değişiklikler artan derinlik ile belgelenmeye devam etse de, kutanöz Melanom insidansı oranı son yıllarda hızlı ve sürekli bir artış göstermiştir. Etkili önleyici yöntemler bulmak için, Deride Melanom başlaması erken adımlarını anlamak önemlidir. Önceki veriler, Yetişkin deri dokularında foliküler melanosit kök hücrelerinin (MCSCs) Onkojenik mutasyonlar ve Genetik değişikliklerin ifade edildiğinde Orijin Melanom hücreleri olarak hareket edebilecektir göstermiştir. Meloma eğilimli MCSCs 'den kaynaklanan tumorigenesis, MCSCs 'nin sessiz bir şekilde aktif duruma geçişinde indüklenir. Melanoma eğilimli MCSCs bu geçiş ya saç folikül kök hücrelerinin modülasyon tarafından teşvik edilebilir ' aktivite devlet veya ultraviyole-b (UV-b) gibi ekstrensek çevresel faktörler aracılığıyla. Bu faktörler suni kimyasal epilasyon ile laboratuvarda manipüle edilebilir, hangi saç folikül kök hücreleri ve MCSCs bir sessiz aktif duruma geçiş neden, ve UV-B pozlama bir tezgah ışığı kullanarak. Bu yöntemler, murine dorsal deride kutanöz Melanom başlamasını başarılı bir uzamsal ve temporal kontrol sağlar. Bu nedenle, bu in vivo model sistemleri, kutanöz Melanom başlatılması erken adımlarını tanımlamak için değerli olacak ve tümör önleme için potansiyel yöntemleri test etmek için kullanılabilir.
Giriş
Melanom, melositik tümörlerin malign formu, deri kanseri ölümlerinin çoğunluğu için sorumlu kutanöz melanom ile deride en agresif kanserdir1. Amerika Birleşik Devletleri 'nde, melanom yaygın tanısı; 20182' de tahmin edilen yeni kanser vakaları arasında en yaygın kanser tipi olan 5 ila 6inci olarak tahmin edilmektedir. Ayrıca, genel kanser olayları son yıllarda kademeli azalma eğilimi gösterirken, son birkaç on yıldır kutanöz Melanom insidansı oranları her iki cinsiyette de sürekli ve hızlı bir artış göstermektedir2.
Kutanöz melanom daha verimli bir....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan prosedürleri Cornell Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıAYUC) uyarınca gerçekleştirilir.
1. hazırlık
-
12 günlük postnatal farelerden kuyruk kliplerini toplayın ve 400 μL 'de 0,05 N NaOH 'da 1 saat için 95 °C ' de sindirin. Vortex ve 1 M Tris-HCl, pH 7 ' nin 32 μL 'i ekleyin. Jackson Laboratuvarı aracılığıyla sağlanan PCR protokollerine göre genotip fareler ve ilgi genotip ile fareler tanımlamak6.
- Tyr-creer – gemizigotnyh (+/creer)
- LSL-BRAFV600E – heterozigot (+/LSL-V600E)
- PTEN- homozigot Flox (F....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Kimyasal epilasyon ile indüklenen kutanöz Melanom başlatılması
Kimyasal epilasyon prosedürü Şekil 2' de tasvir edilir. Fareler 7 haftalık postnatal olduğunda, onların dorsal deri telogen içinde. Telogen sırasında, saç folikül kök hücreleri ve MCSCs bir sessiz, istirahat durumda olduğu bilinmektedir. Cilt tıraş sonrası önemli bir saç büyümesi göstermemelidir. Öte yandan, kimyasal epi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kutanöz Melanom tümörlerinde sık görülen Hallmark genetik değişiklikler13' ü iyi nitelendirdi. En dominant sürücü mutasyonu BRAFV600E, ve BRAFV600E-aracılı melanom için genetiği tasarlanan fare modeli Bosenberg grubu tarafından oluşturulan14 ve Jackson Laboratuvarı yatırıldı. Bu fare modelini kullanarak, son çalışmada dorsal cilt6 BRAFV600E-aracılı Melanom önemli başlangıcı için tümör eğilim.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiç bir ilgi çatışması bildirmiyor.
Teşekkürler
Bu çalışma, sağlık Işleri Savunma Bakanı Yardımcısı tarafından tarafından desteklenmektedir, ödül W81XWH-16-1-0272 altında peer gözden kanser araştırma programı aracılığıyla. Görüşler, Yorumlar, sonuçlar ve öneriler yazarlar vardır ve mutlaka Savunma Bakanlığı tarafından onaylanan değildir. Bu çalışma Cornell kök hücre programından A.C. White 'a bir tohum hibe tarafından da destekleniyordu. H. Moon, Cornell vertebra Genomics öğretim programı Merkezi tarafından destekleniyordu.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sistemik enjeksiyon için | Tamoksifen | Sigma | T5648-1G |
| Sistemik enjeksiyon için | Tamoksifen | Cayman Chemical | 13258 |
| Mısır yağı | Sigma | 45-C8267-2.5L-EA | |
| 4OH-tamoksifen | Sigma | H7904-25MG | Topikal tedavi için |
| 26 G 1/2 "iğneler | çeşitli | Veteriner sınıfı | |
| 1 mL şırınga | çeşitli | Veteriner sınıfı | |
| Pet saç düzeltici | Wahl | 09990-502 | |
| Epilasyon kremi | Nair | n/a | Çoğu eczanede bulunur |
| Pamuklu çubuklar | çeşitli | ||
| Ultraviyole ampul | UVP | 95-0042-08 | model XX-15M orta kademe UV lambası |
| 200 geçirmez etanol | çeşitli | saf etanol | |
| Histoplast PE | Fisher Scientific | 22900700 | parafin peletleri |
| Nötr Tamponlu Formalin,% 10 | Sigma | HT501128-4L | |
| Clear-Rite 3 | Thermo Scientific | 6901 | ksilen ikamesi |
| OCT Bileşik | Termo | 23730571 | |
| Doku Kaseti | Sakura | 89199-430 | FFPE işleme |
| Kriyokalıplar | Sakura | 4557 | 25 x 20 mm |
| FFPE metal kalıp | Leica | 3803082 | 24 mm x 24 mm |
| İzofluran | çeşitli | Veteriner sınıfı | |
| Anestezi inhalasyon sistemi | çeşitli | Veteriner sınıfı | |
| İnce makas | FST | 14085-09 | Düz, keskin/keskin |
| İnce makas | FST | 14558-09 | Düz, keskin/keskin |
| Metzenbaum | FST | 14018-13 | Düz, künt/künt |
| Forcep | FST | 11252-00 | Dumont #5 |
| Forcep | FST | 11018-12 | Micro-Adson |
| Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten-f/f | Jackson Labs | 13590 | |
| LSL-tdTomato | Jackson Labs | 007914 | ai14 |
| Cre-1 | n/a | GCATTACCGGTCGATGCAACGA GTGATGAG | |
| Cre-2 | n/a | GAGTGAACGAACCTGGTCGAA ATCAGTGCG | |
| Braf-V600E-1 | n/a | TGAGTATTTTTGTGGCAACTGC | |
| Braf-V600E-2 | n/a | CTCTGCTGGGAAAGCGGC | |
| Kras-G12D-1 | n/a | AGCTAGCCACCATGGCTTGAGT AAGTCTGCA | |
| Kras-G12D-2 | n/a | CCTTTACAAGCGCACGACT GTAGA | |
| Pten-1 | n/a | ACTCAAGGCAGGGATGAGC | |
| Pten-2 | n/a | AATCTAGGGCCTCTTGTGCC | |
| Pten-3 | n/a | GCTTGATATCGAATTCCTGCAGC | |
| tdTomato-1 | n/a | AAGGGAGCTGCAGTGGAGTA | |
| tdTomato-2 | n/a | CCGAAAATCTGTGGGAAGTC | |
| tdTomato-3 | n/a | GGCATTAAAGCAGCGTATCC | |
| tdTomato-4 | n/a | CTGTTCCTGTACGGCATGG |
Kaynaklar
- Wernli, K. J., Henrikson, N. B., Morrison, C. C., Nguyen, M., Pocobelli, G., Blasi, P. R. Screening for skin cancer in adults: updated evidence report and systematic review for the US preventive services task force. The Journal of the American Medical Association. 316 (4), 436-447 (2016).
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
