Yöntem makalesi

Oral Nötrofillerin Değerlendirilmesinde Mürin Periodontitin Sağlam Ligatür Kaynaklı Modeli

11.3K görüntüleme

DOI:

10.3791/59667

21 Ocak 2020

Bu makalede

Özet

Bu makale, birden fazla maksiller molar içeren bir ligatür kaynaklı murine periodontitis modeli nin oluşturulması için bir protokol sunmaktadır, sonraki analizler için ilgili dişeti dokusu ve kemik daha geniş alanlarda sonuçlanan yanı sıra azaltılmış hayvan kullanımı. Oral nötrofilleri insan deneklere benzer bir şekilde değerlendirme tekniği de tanımlanmıştır.

Özet

Murine modellerini kullanarak periodontal hastalığın patofizyolojisini incelemenin başlıca avantajları hayvanların düşük maliyeti, genetiği değiştirilmiş suşlar dizisi, hasat edilen yumuşak ve sert dokularda yapilebilen çok sayıda analizdir. Ancak, bu sistemlerin çoğu usule yönelik eleştirilere tabidir. Alternatif olarak, periodontal hastalığın ligatür kaynaklı modeli, lokalize gelişim ve bir disbiyotik oral mikrobiyom tutma tarafından tahrik, istihdam edilebilir, hangi hızla indüklenen ve nispeten güvenilir. Ne yazık ki ligatürkaynaklı murine periodontitis protokolünün varyantları periodontiumun odak bölgelerine izole edilmiştir ve kurulu ligaturun erken avulsiyonuna tabidir. Bu, sonraki analizler için kullanılabilir doku miktarını en aza indirir ve çalışma için gerekli hayvan sayısını artırır. Bu protokol, yukarıda bahsedilenleri azaltan alternatif bir yaklaşımla farelerde oral nötrofillerin kurtarılması için daha iyi tutma ve yeni bir durulama tekniği nin kullanımı ile uzun molar ligatürler yerleştirmek için gerekli kesin manipülasyonları açıklar teknik zorluklar.

Giriş

Periodontal hastalık (PH) önemli konak morbidite ve ekonomik yük ile ilişkili bir osteolitik durumdur, hangi dişeti iltihabı ve etkilenen dentition için hem yumuşak doku eki ve osseous destek kaybı ile kendini gösterir1,2,3,4. Bu süreç, oral mikrobiyota ve konak doğuştan gelen bağışıklık sistemi arasındaki etkileşimler tarafından yönetilir. Ayrıca diyabet, kardiyovasküler hastalık ve kanser5,6,7,8dahil olmak üzere ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm murine çalışmaları ilgili etik düzenlemelere uygun ve Toronto Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi ve Araştırma Etik Kurulu (Protokol 2001930) tarafından onaylanmıştır.

1. Ligatür kurulumu

NOT: Bu standart bir ameliyathanede yapIlebilen steril olmayan bir cerrahi işlemdir. Mikropsuz hayvanların kullanımı (burada kapsanmayan) bir biyogüvenlik kabini içinde işleme, steril aletlerin kullanımı ve periodontal patojenler ile oral kavitenin aşılanması periodontitin klinik belirtilerine neden olmayı zorunlu kılır.

  1. Onaylı kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi (IACUC) yönergelerine göre 0,5" 26 G steril hi....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Oral durulama örneklerinden(Şekil 3A)ve iltihaplı (Şekil 3B) bağ kaynaklı periodontite sekonder olan murine oral kaviteden temsili akış sitometri verileri sağlanır. PmN'lerin yüklü bir ligatürden geri kazanımı da gösterilmiştir (Şekil 3C). Akış sitometre kanal gerilimleri manuel olarak kalibre edildi ve tek lekeli kompanzasyon boncukları ile telafi yapıldı. PMN'ler Ly6G+ve

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Periodontitin murin ligatür kaynaklı modelinin kullanımı ile ilişkili en kritik unsur, kurban veya kasıtlı olarak çıkarılma zamanına kadar bağın tutulması etrafında ortalanır. Yüklü biyofilm-retentive ligatür az 6 gün içinde alveoler kemik yüksekliği önemli bir kayıp indükleyen yeteneğine sahiptir, 11-16 günlük dönem arasında platolama39. Kemik kaybının en üst düzey döneminden önce hayvan denekleri kurban etme kararı, bunu ligatür kaynaklı periodontitin çok daha kısa bir modeli haline getirerek, k.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

J. W. C. Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri (CIHR) tarafından desteklenir. Yazarlar trypan mavi boyama performans onu yardım için Dr Chunxiang Sun teşekkür etmek istiyorum.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Anti-fare F4 / 80 AntikorBioLegend123131BV421, Klon BM8
Anti-fare Ly6G AntikorBD560602PerCP-Cy5.5, Klon 1A8
C57BL / 6 Erkek FarelerCharles River8 ila 12 haftalık
Konik Santrifüj TüpüFroggaBioTB15-50015 mL
Konik Santrifüj TüpüFroggaBioTB50-50050 mL
FACS Tampon Çoklu%1 BSA (BioShop), 2mM EDTA (Merck), 1x HBSS-/- (Gibco)
FACSDivaBDv8.0.1
Fibre-LiteDolan-JennerModel 180
FlowJoTree Starv10.0.8r1
Isı Terapi PompasıHallowellHTP-1500
Sıcak Cam Boncuk SterilizatörüElektron Mikroskobu Bilimleri66118-10Çimlendirici 500
İris MakasAlmedic7602-A8-684Düz
KetaminVetokinol100mg / mL
LSRFortessaBDX-20
Fare SerumuSigmaM5905-5ML
Naylon Mesh FiltreFisher Scientific22-363-54740 & mikro; m
ParaformaldehitFisher Scientific28908%16 (a/h), Metanolsüz
Fosfat Tamponlu SalinSigma D1408-500MLCaCl < sub > 2 < / sub> ve MgCl < sub > <2 / sub >, 10x
Plastik Tek Kullanımlık ŞırıngaBD309659 1 mL
Sıçan SerumuSigmaR9759-5ML
İpek SütürCovidienSS652C13 USP 5-0
Kıymık Forseps Almedic7726-A10-700#1
Kıymık ForsepsAlmedic7727-A10-704#5
Stereo Diseksiyon MikroskobuCarl Zeiss28865Photo-Zusatz
Steril Hipodemik İğneBD30511126G X 1/2"
ŞırıngaBD3096591 mL
KsilazinRompun20mg / mL

Kaynaklar

  1. Hajishengallis, G. Immunomicrobial pathogenesis of periodontitis: keystones, pathobionts, and host response. Trends in Immunology. 35 (1), 3-11 (2014).
  2. Pihlstrom, B. L., Michalowicz, B. S., Johnson, N. W. Periodontal diseases. Lancet. 366 (9499), 1809-1820 (2005).
  3. <....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Ligat rle nd klenmi PeriodontitisOral N trofil Geri Kazan mMurin Periodontitis ModeliDi Eti Dokusu AnaliziAk SitometrisiMikrocerrahi AletleriCerrahi MikroskopParaformaldehit FiksasyonuAlveoler Kemik KaybA z Bo lu u Durulama

İlgili makaleler