Yöntem makalesi
Bu makale, birden fazla maksiller molar içeren bir ligatür kaynaklı murine periodontitis modeli nin oluşturulması için bir protokol sunmaktadır, sonraki analizler için ilgili dişeti dokusu ve kemik daha geniş alanlarda sonuçlanan yanı sıra azaltılmış hayvan kullanımı. Oral nötrofilleri insan deneklere benzer bir şekilde değerlendirme tekniği de tanımlanmıştır.
Murine modellerini kullanarak periodontal hastalığın patofizyolojisini incelemenin başlıca avantajları hayvanların düşük maliyeti, genetiği değiştirilmiş suşlar dizisi, hasat edilen yumuşak ve sert dokularda yapilebilen çok sayıda analizdir. Ancak, bu sistemlerin çoğu usule yönelik eleştirilere tabidir. Alternatif olarak, periodontal hastalığın ligatür kaynaklı modeli, lokalize gelişim ve bir disbiyotik oral mikrobiyom tutma tarafından tahrik, istihdam edilebilir, hangi hızla indüklenen ve nispeten güvenilir. Ne yazık ki ligatürkaynaklı murine periodontitis protokolünün varyantları periodontiumun odak bölgelerine izole edilmiştir ve kurulu ligaturun erken avulsiyonuna tabidir. Bu, sonraki analizler için kullanılabilir doku miktarını en aza indirir ve çalışma için gerekli hayvan sayısını artırır. Bu protokol, yukarıda bahsedilenleri azaltan alternatif bir yaklaşımla farelerde oral nötrofillerin kurtarılması için daha iyi tutma ve yeni bir durulama tekniği nin kullanımı ile uzun molar ligatürler yerleştirmek için gerekli kesin manipülasyonları açıklar teknik zorluklar.
Periodontal hastalık (PH) önemli konak morbidite ve ekonomik yük ile ilişkili bir osteolitik durumdur, hangi dişeti iltihabı ve etkilenen dentition için hem yumuşak doku eki ve osseous destek kaybı ile kendini gösterir1,2,3,4. Bu süreç, oral mikrobiyota ve konak doğuştan gelen bağışıklık sistemi arasındaki etkileşimler tarafından yönetilir. Ayrıca diyabet, kardiyovasküler hastalık ve kanser5,6,7,8dahil olmak üzere ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm murine çalışmaları ilgili etik düzenlemelere uygun ve Toronto Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi ve Araştırma Etik Kurulu (Protokol 2001930) tarafından onaylanmıştır.
1. Ligatür kurulumu
NOT: Bu standart bir ameliyathanede yapIlebilen steril olmayan bir cerrahi işlemdir. Mikropsuz hayvanların kullanımı (burada kapsanmayan) bir biyogüvenlik kabini içinde işleme, steril aletlerin kullanımı ve periodontal patojenler ile oral kavitenin aşılanması periodontitin klinik belirtilerine neden olmayı zorunlu kılır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Oral durulama örneklerinden(Şekil 3A)ve iltihaplı (Şekil 3B) bağ kaynaklı periodontite sekonder olan murine oral kaviteden temsili akış sitometri verileri sağlanır. PmN'lerin yüklü bir ligatürden geri kazanımı da gösterilmiştir (Şekil 3C). Akış sitometre kanal gerilimleri manuel olarak kalibre edildi ve tek lekeli kompanzasyon boncukları ile telafi yapıldı. PMN'ler Ly6G+ve
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Periodontitin murin ligatür kaynaklı modelinin kullanımı ile ilişkili en kritik unsur, kurban veya kasıtlı olarak çıkarılma zamanına kadar bağın tutulması etrafında ortalanır. Yüklü biyofilm-retentive ligatür az 6 gün içinde alveoler kemik yüksekliği önemli bir kayıp indükleyen yeteneğine sahiptir, 11-16 günlük dönem arasında platolama39. Kemik kaybının en üst düzey döneminden önce hayvan denekleri kurban etme kararı, bunu ligatür kaynaklı periodontitin çok daha kısa bir modeli haline getirerek, k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
J. W. C. Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri (CIHR) tarafından desteklenir. Yazarlar trypan mavi boyama performans onu yardım için Dr Chunxiang Sun teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Anti-fare F4 / 80 Antikor | BioLegend | 123131 | BV421, Klon BM8 |
| Anti-fare Ly6G Antikor | BD | 560602 | PerCP-Cy5.5, Klon 1A8 |
| C57BL / 6 Erkek Fareler | Charles River | 8 ila 12 haftalık | |
| Konik Santrifüj Tüpü | FroggaBio | TB15-500 | 15 mL |
| Konik Santrifüj Tüpü | FroggaBio | TB50-500 | 50 mL |
| FACS Tampon Çoklu | %1 BSA (BioShop), 2mM EDTA (Merck), 1x HBSS-/- (Gibco) | ||
| FACSDiva | BD | v8.0.1 | |
| Fibre-Lite | Dolan-Jenner | Model 180 | |
| FlowJo | Tree Star | v10.0.8r1 | |
| Isı Terapi Pompası | Hallowell | HTP-1500 | |
| Sıcak Cam Boncuk Sterilizatörü | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 66118-10 | Çimlendirici 500 |
| İris Makas | Almedic | 7602-A8-684 | Düz |
| Ketamin | Vetokinol | 100mg / mL | |
| LSRFortessa | BD | X-20 | |
| Fare Serumu | Sigma | M5905-5ML | |
| Naylon Mesh Filtre | Fisher Scientific | 22-363-547 | 40 & mikro; m |
| Paraformaldehit | Fisher Scientific | 28908 | %16 (a/h), Metanolsüz |
| Fosfat Tamponlu Salin | Sigma D1408-500ML | CaCl < sub > 2 < / sub> ve MgCl < sub > <2 / sub >, 10x | |
| Plastik Tek Kullanımlık Şırınga | BD | 309659 1 mL | |
| Sıçan Serumu | Sigma | R9759-5ML | |
| İpek Sütür | Covidien | SS652 | C13 USP 5-0 |
| Kıymık Forseps Almedic | 7726-A10-700 | #1 | |
| Kıymık Forseps | Almedic | 7727-A10-704 | #5 |
| Stereo Diseksiyon Mikroskobu | Carl Zeiss | 28865 | Photo-Zusatz |
| Steril Hipodemik İğne | BD | 305111 | 26G X 1/2" |
| Şırınga | BD | 309659 | 1 mL |
| Ksilazin | Rompun | 20mg / mL |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste