Biz bir insan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) - çeviriimmün-onkoloji araştırma için insanlaşmış ksenogreft fare modeli dayalı açıklar. Bu protokol, I-O terapi değerlendirmesi için benzer modellerin oluşturulması ve karakterizasyonu için genel bir kılavuz görevi görebılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Çevirisel İmmüno-onkoloji (I-O) Araştırma için İnsani Periferik Kan Mononükleer Hücre (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Modeli
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Son yıllarda immüno-onkoloji (I-O) tedavisinin keşfi ve geliştirilmesi kanser tedavisinde bir kilometre taşını temsil ediyor. Ancak, tedavi zorlukları devam etmektedir. Sağlam ve hastalıkla ilgili hayvan modelleri, bir dizi ek bağışıklık kontrol noktasını ele almak için klinik öncesi araştırma ve geliştirmenin sürdürülmesi için hayati kaynaklardır. Burada insan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) - insanlaşmış ksenogreft modeli tabanlı açıklar. BGB-A317 (Tislelizumab), geç evre klinik gelişimde insanlaşmış bir anti-PD-1 antikor, platform kurulumu, model karakterizasyonu ve ilaç etkinliği değerlendirmelerini tartışmak için örnek olarak kullanılır. Bu insanlaşmış fareler test edilen çoğu insan tümörü büyümesini destekleyerek, i-O terapilerinin hem insan bağışıklığı hem de insan kanserleri bağlamında değerlendirilmesini sağlar. Kurulduktan sonra, bizim model nispeten zaman ve maliyet-etkin, ve genellikle son derece tekrarlanabilir sonuçlar verim. Bu makalede özetlenen protokolün, insan PBMC ve I-O araştırmaları için tümörlerle yeniden oluşturulmuş fare modellerinin oluşturulmasıiçin genel bir kılavuz görevi görebildiğini önermekteyiz.
Giriş
İmmüno-onkoloji (I-O) hızla genişleyen bir kanser tedavisi alanıdır. Araştırmacılar son zamanlarda tümörlere saldırmak için bağışıklık sisteminin fonksiyonlarını modüle terapötik potansiyelini takdir etmeye başladı. Bağışıklık kontrol noktası blokajları melanom, böbrek hücreli karsinom, baş ve boyun, akciğer, mesane ve prostat kanserleri 1 dahil olmak üzere kanser türleri, çeşitli teşvik edici faaliyetleri göstermiştir1,2. Doğrudan kanser hücrelerini öldürmek hedefli tedavilerin aksine, I-O tedaviler tümörler3saldırmak için vücudun bağışıklık sistemini güçlendirmek .
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
İnsan katılımcıların katıldığı çalışmalarda gerçekleştirilen tüm prosedürler, BeiGene ve/veya ulusal araştırma komitesinin etik standartlarına ve 1964 Helsinki bildirgesi ve daha sonraki değişikliklere veya karşılaştırılabilir etik standartlara uygun du. Çalışmaya dahil edilen tüm bireysel katılımcılardan bilgilendirilmiş onam alındı. Hayvanlarla ilgili çalışmalarda yapılan tüm işlemler BeiGene'deki İç İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır. Bu protokol özellikle insanlaştırılmış NOD/SCID farelerde BGB-A317 (Tislelizumab) değerlendirilmesi için ayarlanmıştır.
1. İnsan PBMC tabanlı modelin kurulması
- Siklofosfamid....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada sunulan prosedürlerin ardından PBMC tabanlı insanlaştırılmış ksenogreft modeli başarıyla oluşturulmuştur. Kısaca, NOD/SCID farelerde CP miyeloablasyon etkileri, CP ve DS tedavisi sonrası nötrofil ve monosit popülasyonlarınınakış sitometri analizi ile saptandı (Şekil 1). 100 mg/kg CP artı 125 mg/kg DS optimal doz olarak belirlendi ve daha sonraki çalışmalarda kullanılan rejim, fareleriçin ciddi toksisiteye neden olmadan nötrofillerin ve monositlerin maksimum tükenmesine neden oldu. Dah.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kanser gelişimi ve ilerlemesi hakkındaki bilgimiz son yıllarda hem tümör hücrelerinin hem de ilişkili stromanın kapsamlı bir şekilde anlaşılmasına odaklanarak önemli ölçüde ilerlemiştir. Konak bağışıklık mekanizmaları harnessing kanser hücrelerine karşı daha büyük bir etkiye neden olabilir, umut verici bir tedavi stratejisi temsil eden. Singenik ve GEM modelleri gibi sağlam fare bağışıklık sistemlerine sahip murine modelleri, kontrol noktası aracılı bağışıklığı incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu modelleri .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Tüm yazarların BeiGene'e olan ilgisi vardır. Tong Zhang ve Kang Li bgb-A317 kapsayan bir patent mucitler bu çalışmada açıklanan vardır.
Teşekkürler
Yardımcı tartışmalar için laboratuvar üyelerimize teşekkür ederiz. Bu çalışma kısmen Hibe Anlaşması No altında Pekin Belediye Bilim ve Teknoloji Komisyonu Biyomedikal ve Yaşam Bilimi Yenilik ve Yetiştirme Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir. Z15110003915070 ("Yeni bir immün onkoloji anti-tümör ilacı BGB-A317 üzerinde klinik öncesi çalışma" projesi) ve aynı zamanda kısmen klinik öncesi araştırmalar için dahili şirket finansmanı tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| PBMC ayırma / hücre kültürü< / güçlü > | |||
| Histopaque-1077 | Sigma | 10771 | Hücre izolasyonu |
| DMEM | Corning | 10-013-CVR | Hücre kültürü |
| DPBS | Corning | 21-031-CVR | Hücre kültürü |
| FBS | Corning | 35-076-CV | Hücre kültürü |
| Penisilin-Streptomisin, Sıvı | Gibco | 15140-163 | Hücre kültürü |
| Tripsin-EDTA (%0.25), fenol kırmızısı | Gibco | 25200-114 | Hücre kültürü |
| Matrigel | Corning | 356237 | CDX aşılaması |
| FACS analizi | |||
| sığır pankreasından Deoksiribonükleaz I | Sigma | DN25 | Örneği hazırlık |
| Kollajenaz Tip | I Sigma | C0130 | Numune hazırlama |
| Anti-fare/insan CD11b (M1/70) antikoru | BioLegend | 101206 | FACS |
| Anti-fare Ly-6C (HK1.4) antikoru | BioLegend | 128008 | FACS |
| Anti-fare Ly-6G (1A8) antikoru | BioLegend | 127614 | FACS |
| Anti-insan CD8 (OKT8) antikoru | Sungene Biyoteknoloji | H10082-11H | FACS |
| Anti-insan CD279 (MIH4) antikoru | eBioscience | 12-9969-42 | FACS |
| Anti-insan CD3 (HIT3a) antikoru | 4A Biyoteknoloji | - | FACS |
| Guava easyCyte 8HT Masaüstü Akış Sitometresi | Millipore | 0500-4008 | FACS |
| < güçlü > Tümör / PDX implantasyonu / dozlama / ölçüm< / güçlü> | |||
| Siklofosfamid | J & K Cat | # 419656, CAS # 6055-19-2 | İn vivo etkinlik |
| Disülfiram | J & K | Cat # 591123, CAS # 97-77-8 | İn vivo etkinlik |
| Şırınga | BD | 300841 | CDX aşılaması |
| Hipodermik iğneler (14 G) | Shanghai SA Mediciall & Plastik Aletler Co., Ltd. | 0.7 * 32 TW SB | PDX aşılama |
| Sürmeli Kumpas (MarCal) | Mahr | 16ER | Tümör ölçümü |
| IVC bireysel havalandırmalı kafesler | Lingyunboji Ltd. | IVC-128 | Hayvan tesisi |
| IHC | |||
| Leica ASP200 Vakum doku işlemcisi | Leica | ASP200 | IHC |
| Leica RM2235 Rutin Kesit Alma için Manuel Döner Mikrotom | Leica | RM2235 | IHC |
| Leica EG1150 H Isıtmalı Parafin Gömme Modülü | Leica | EG1150 H | |
| IHC Ariol-Klinik IHC ve FISH Tarayıcı | Leica | Ariol | IHC |
| Anti-insan CD8 (EP334) antikoru | ZSGB-Bio | ZA-0508 | IHC |
| Anti-insan PD1 [NAT105] antikoru | Abcam | ab52587 | IHC |
| Anti-insan PD-L1 (E1L3N) antikoru | Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi | 13684S | IHC |
| Polink-2 plus Polimer HRP Tespit Sistemi | ZSGB-Bio | PV-9001/9002 | IHC |
Kaynaklar
- Pardoll, D. M. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).
- Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy. Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
