Bazı gen manipüle hayvanlarda, tek bir protokol kullanarak serebellar Purkinje hücrelerinde LTD neden başarısız olabilir, ve LTD ve motor öğrenme arasında bir tutarsızlık olabilir. Gen lemanlı hayvanlarda LTD indüksiyonu değerlendirmek için birden fazla protokol gereklidir. Standart protokoller gösterilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Erişkin Serebellar Dilimlerde Uzun Süreli Depresyon İndüksiyonunun Değerlendirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Sinaptik plastisite öğrenme ve bellek için bir mekanizma sağlar. Serebellar motor öğrenme için, paralel liflerden (PF) Purkinje hücrelerine (PC) sinaptik iletimlerin uzun süreli depresyonu (LTD) motor öğrenmenin temeli olarak kabul edilir ve hem LTD hem de motor öğrenme nin eksiklikleri çeşitli genle manipüle edilmiş hayvanlar. Motor öğrenme yeteneğinin değerlendirilmesi için optokinetik refleks (OKR), vestibüler-göz refleksi (VOR) ve rotarod testi gibi yaygın motor öğrenme setleri kullanıldı. Ancak, GluA2 karboksi sonlandırıcı modifiye knock-in fareler elde edilen sonuçlar, PF-LTD olmamasına rağmen, VOR ve OKR normal adaptasyon gösterdi. Bu raporda, LTD indüksiyon uymuş sadece oda sıcaklığında stimülasyon protokolü bir tür kullanılarak denendi. Böylece, serebellar LTD indüklemek için koşullar yakın fizyolojik sıcaklıkta çeşitli protokoller kullanılarak aynı knock-in mutantlar araştırıldı. Son olarak, LTD'nin bu gen letimli farelerde indüklenebileceği stimülasyon protokolleri bulduk. Bu çalışmada, LTD-indüksiyonu değerlendirmek için bir dizi protokol önerilmiştir, bu da LTD ile motor öğrenimi arasındaki nedensel ilişkinin daha doğru bir şekilde incelenmesine olanak sağlayacaktır. Sonuç olarak, gen leilgili farelerde LTD değerlendirilirken deneysel koşullar çok önemlidir.
Giriş
Serebellar korteksin ayrıntılı nöronal ağların sinaptik organizasyonu, bilgisayarları oluşan, moleküler tabaka internöronlar (sepet ve stellat hücreleri), Golgi hücreleri, granül hücrelerinden PFs, yosunlu lifler ve tırmanma lifleri (CFs), aydınlatılmış edilmiştir uyarma / inhibisyon ve divergence / yakınsama açısından, ve iyi organize devre diyagramı beyincik bir "nöronal makine"1olduğunu ileri sürmüştür , bu "makine" amacı hakkında daha önce hiçbir fikrim olmamasına rağmen. Daha sonra Marr, PC'lere yapılan PF'lerin üçlü kat bir çözümleme ağı2oluşturduğunu ileri sürüler. Ayrıca her CF elemental hareket....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneysel prosedürler, deneylerde hayvanların bakımı ve kullanımı konusunda RIKEN komitesi tarafından onaylanmıştır. Fareler, RIKEN Beyin Bilimi Merkezi'nin hayvan tesisinde iyi kontrollü sıcaklık (23-25 °C) ve nem (%45-%65) altında tutuldu. Koşul -ları. Hem erkek hem de dişi WT fareler (C57BL/6, 3-6 ay) kullanıldı.
1. Deneylerde Kullanılan Çözümlerin Hazırlanması
NOT: Tüm çözümler metaliçermeyen ultra saf suda (direnç > 18,2 MΩ) ve diğer kirlerde (toplam organik karbon (TOC) < 5,0 ppb) yapılmalıdır. Dilim kesme ve kayıt için yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) çalışma ACSF 10 kez (x10) stok dene....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu çalışmada serebellar LTD.'yi ikna etmek için dört protokol kullanılmıştır. İlk iki protokolde (protokol 1 ve 2), pf-stimülasyon ve CF-stimülasyon un birleşimi akım kelepçesi koşullarında uygulandı. Diğer iki protokolde (protokol 3 ve 4), somatik depolarizasyon gerilim-kelepçe koşullarında CF-stimülasyon yerine geçildi. Konjonktif stimülasyon sırasında gerilim-iz veya akım izleri karşılaştırıldı (Şekil 2).
1 PF-stimülasyon ve 1 CF-stimülasyon akım-kelepçe koşull.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Dört protokol arasındaki farklar
LTD-inducing protokolleri 1 ve 2, Cjs 300 kez 1 Hz serebellar LTD stimülasyon frekansı ikna etmek için yeterli dir. Cf stimülasyon frekansı fizyolojik bir aralıkta gibi görünüyordu, uyarı yetişkin farelerde karmaşık başak atış hızı olduğu bildirilmiştir çünkü (P60) 1.25 Hz36olduğu bildirilmiştir . Ancak, CF stimülasyon tek başına PF-CF sinaps uzun vadeli plastisite neden olmadı, protokol1 ve 2 kullanılan gibi(Şekil 4
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
A. Oba'ya teknik yardımları için teşekkür ederiz. Bu araştırma kısmen Bilimsel Araştırma Hibe-in-Aid (C) 17K01982 k.y tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Amplifikatör | Moleküler Cihazlar-Akson | Multiclamp 700B | |
| Borosilikat cam kılcal | Sutter | BF150-110-10 | |
| Sayısallaştırıcı | Moleküler Cihazlar-Axon | Digidata1322A | |
| Elektrot çektirme | Sutter | Modeli P-97 | |
| İzofluran | FUJIFILM Wako Saf Kimyasal | 26675-46-7 | |
| İzolatör | A.M.P.I. | ISOflex | |
| Doğrusal dilimleyici | Dosaka EM | PRO7N | |
| Mikroskop | NIKON | Eclipse E600FN | |
| Peristaltik pompa | Gilson | MP1 Tek Kanallı Pompa | |
| Pikrotoksin | Sigma-Aldrich | P1675 | |
| Saf su yapıcı | Merck-Millipore | MilliQ 7000 | |
| Deney yazılımı | İstatistik için moleküler prob-Axon | pClamp 10 | |
| Yazılımı | KyensLab | KyPlot 5.0 | |
| Stimülatör | WPI | DS8000 | |
| Sıcaklık kontrolörü | Warner | TC-324B | |
| Tetrodotoksin | Tocris | 1078 |
Kaynaklar
- Eccles, J. C., Ito, M., Szentagothai, J. The Cerebellum as a Neuronal Machine. , Springer. New York. (1967).
- Marr, D. A theory of cerebellar cortex. Journal of Physiology. 202 (2), 437-470 (1969).
- Albus, J. S.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
