Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bakterilerde Hücre Altı Protein Lokalizasyonu ve Hücre Morfolojisi Değişikliklerini Araştırmak Için Canlı Hücre Floresan Mikroskobu

7.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/59905

⸱

23 Kasım 2019

 ,  , 
1Department of Cell Biology, Microbiology and Molecular Biology, University of South Florida

Bu makalede

Özet

Bu makalede, protein subselliyerizasyon dinamiklerini araştırmak ve Bacillus subtilis ve Staphylococcus aureus'ta yüksek çözünürlüklü floresan mikroskobu kullanarak morfolojik değişiklikleri izlemek için adım adım kılavuz verilmektedir.

Özet

Bakterilerde hücre bölünmesi ve hücre şeklini etkileyen faktörlerin araştırılması genellikle yüksek çözünürlüklü floresan mikroskobu ile birlikte yapılır, çünkü popülasyon düzeyinde yapılan gözlemler tek bir hücre düzeyinde meydana gelen leri tam olarak yansıtmayabilir. Canlı hücre timelapse mikroskopisi, araştırmacıların hücre bölünmesi veya hücre morfolojisindeki değişiklikleri izlemelerine olanak sağlar ve bu da proteinlerin hücre altı lokalizasyonu ve gen ekspresyonunun zamanlaması ile ilgili değerli içgörüler sağlar, ki bu da önemli biyolojik soruların cevaplanmasında potansiyel olarak yardımcı olur. Burada, bacillus subtilis ve Staphylococcus aureus'taki henotibik değişiklikleri yüksek çözünürlüklü dekonvolution mikroskobu kullanarak izlemek için protokolümüzü açıklıyoruz. Bu raporun amacı, bakterilerin yanı sıra diğer organizmalarda farklı biyolojik süreçleri incelemek için floresan mikroskobu deneyleri yapmak la ilgilenen diğer araştırmacılar tarafından benimsenebilecek basit ve net bir protokol sağlamaktır.

Giriş

Bakteri hücre biyolojisi alanı önemli ölçüde mikroskopi teknikleri son gelişmeler ile geliştirilmiştir1,2. Diğer aletlerin yanı sıra, timelapse floresan mikroskobik deneyler icra edebilen mikroskoplar değerli bir araç olmaya devam etmektedir. Araştırmacılar gibi floresan proteinler kullanarak gerçek zamanlı olarak çeşitli fizyolojik olayları izleyebilirsiniz, yeşil floresan protein (GFP) tabanlı transkripsiyonel ve çevirisel muhabir füzyon, floresan D-amino asitler (FDAA)3, ya da hücre duvarı, membran ve DNA etiketleme için diğer lekeler kullanın. Bu nedenle floresan mikroskopimikrobiyal hücre biyologları arasında popüler liğini sürdürdüğünü hiç de şaşırtıcı değildir. Sadece son fenotipleri göstermenin yanı sıra, gözlenen fenotiplerin timelapse mikroskobu kullanılarak nasıl ortaya çıkarabileceğine dair bilgi sağlamak bulgulara önemli bir değer katacak ve potansiyel olarak potansiyel olarak potansiyel olarak potansiyel uyuşturucu adayları tarafından hangi hücresel süreçlerin hedeflendiğine dair ipuçları sunabilir4.

Bu makalede, tam motorlu, ters, geniş alan floresan mikroskobu (Malzeme Tablosunabakınız) kullanılarak yüksek çözünürlüklü görüntüleme yapmak için protokoller verilmiştir. Bu protokoller timelapse mikroskoplar yapma yeteneğine sahip diğer floresan mikroskopların ihtiyaçlarına uyacak şekilde uyarlanabilir. Burada tartışılan yazılım, Malzeme Tablosu'ndabelirtildiği gibi üretici tarafından sağlanan özel yazılıma karşılık geliyor olsa da, genellikle diğer mikroskop üreticileri veya serbestçe kullanılabilen ImageJ5tarafından sağlanan yazılım, mikroskopi verilerini analiz etmek için eşdeğer araçlara sahiptir. Zaman aşımının elverişli olmadığı durumlar için, zaman-kurs deneyleri bu makalede açıklandığı şekilde yapılabilir. Burada açıklanan protokoller iki farklı bakteri türündeki henotik değişiklikleri incelemek için ayrıntılı bir kılavuz sağlar: B. subtilis ve S. aureus. Kullanılan suşlar için Tablo 1'e bakınız.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Genel büyüme koşulları

  1. Uygun büyüme ortamının 2 mL'sini antibiyotiklerle desteklendirin (gerektiğinde) tek bir suş kolonisi ile görüntülenin. Bu tohum kültürlerini bir gecede 22 °C'de sallayarak bir kuluçka makinesinde kuluçkaya yatırın.
    NOT: Bu makalede kullanılan özel bakteriyel büyüme koşulları temsili sonuçlar bölümünde sağlanmaktadır.
  2. Bir gecede kültürleri seyreltin 1:20 taze ortamda 125 mL şişe, antibiyotik ile ek (gerektiğinde).
  3. 37 °C'de orta logaritmik faza (OD600 = 0.5) kadar sallanan bir kuluçka makinesinde kültür(ler) yetiştirin.
    NOT: İndükleyici veya inhibitör uygun büyüme aşamasında büyüyen kültür(ler) doğrudan eklenebilir.
  4. Aşağıdaki bölümde açıklandığı gibi mikroskopi numune sipresiyonu için istenilen kültür koşullarında hasat hücreleri.

2. Örnek hazırlama

  1. Moleküler biyoloji notu 0.25 g, düşük EEO, agarose ile 25 mL büyüme ortamı ile zaman atlamalı mikroskobik veya steril su için uygun antibiyotikler (gerektiğinde) ile takviye birleştirerek% 1 agarose hazırlayın. Karışımı mikrodalga yardımıyla yaklaşık 30 s ısıtın ve steril 100 mm x 15 mm Petri kabına dökün ve katılamasına izin verin.
  2. Hücre kültürünün ihtiyacına bağlı olarak 5-50 μL aliquot alın ve hücreleri leke. Bu aşamada uygun boyalarla leke hücreleri (örneğin, bir deney için floresan boya FM4-64 (membran lekesi) ekleyin(Şekil 1)).
    1. Pipet, 35 mm'lik cam alt kültür çanağının altına (14 mm mikrokuyu çapı ve kaplamasız No. 1.5 kapaklı; Malzeme Tablosunabakınız) görüntülenecek kültür numunesinin veya lekeli numunenin 5 μL aliquot'udur.
      DİkKAT: Farklı büyüme deseni (biz de poli-D-lizin ile gözlemledik; veriler gösterilmez) ve /veya protein dinamiklerini etkileyebileceği için özellikle timelapse mikroskobu için poli-L-lizin kaplı kapakları kullanmayın6.
    2. Boya kullanımını en aza indirmek için, 3-4 μL hücre süspansiyonu (OD600 = 0,5; b. subtilis ve S. aureus için sırasıyla 1 mL kültür için yaklaşık 2,7 x 107 ve 3,4 x 107 hasat) doğrudan cam alt çanak üzerinde.
    3. Önceden kesilmiş bir agarose levha (11 mm çapında veya coverslip alanı örtüşmek için istenilen boyutta; steril bir tüp veya jilet açık ucunu kullanarak kesilmiş) örnek üstüne yerleştirin ve yavaşça agarose levha kapak karşı düz yalan olduğundan emin olmak için dokunun.
  3. Görüntülemeden sonra (aşağıdaki bölüme bakınız), görüş alanındaki hücre sayısı istenmiyorsa, seyreltme veya konsantrasyon yoluyla numunenin hücre yoğunluğunu santrifüj ile ayarlayın ve gerektiğinde büyüme ortamı/tampon kullanarak numunedeki hücrelerin oranını değiştirin.
    NOT: Kültür ortamından yayılan otofloresansı en aza indirmek için hücreler tamponda yıkanabilir (örneğin standart 1x fosfat tampon uline) ve görüntülemeden önce uygun miktarda tampon olarak yeniden askıya alınabilir. Bu adımda santrifüjden sonra küçük hücrelerin veya veziküllerin tutulmaması ve bu nedenle kaybedilmesi mümkündür.
  4. Agarose pedin kurumasını önlemek ve özellikle zaman atlamalı deneylerde görüntü edinimi sırasında nemi korumaya yardımcı olmak için kültür çanağının içindeki boşluğa (coverslip etrafında) pipet (~5°L damla) kullanarak su ekleyin.
  5. Kültür yemeklerinin, üretici tarafından sağlanan dahili opak bir bölme olan kuluçka odasının içindeki ısıya 15-20 dakika boyunca mikroskobun sıcaklığına dengelemesine izin verin.
    NOT: Isıtma elemanını açın ve kuluçka odasını görüntülemeden birkaç saat önce istenilen sıcaklığa ayarlayın. Bu, donanımın yeni sıcaklığa sabitolmasını sağlar. Uzun süreli görüntüleme için, nem korumak için mikroskop odasının içine, çalışma alanından uzakta su içeren bir kabı veya şişe yerleştirin.

3. Görüntüleme

  1. Deney günü, mikroskop sistemini açın. Masaüstündeki uygun simgeyi tıklatarak görüntüleme yazılımını başlatın (Bkz. Malzeme Tablosu). Yazılımın başlangıç iletişim kutusundaki Initialize Microscope seçeneğini (üzerinde mikroskop la betimlenen düğme) tıklayarak mikroskobu başlatın. Başlatmadan önce mikroskop kabası ayarı kullanılarak hedefin tamamen düşürüldüğından emin olun.
    NOT: Başlatma menüsüne ek olarak üç ek iletişim kutusu görüntülenmelidir: çözümleme3D, veri toplama ve filtre monitörü.
  2. Üretici tarafından sağlanan 100x yağ daldırma hedefine 1,517 (kırılma indisi) yağı bir düşüş yerleştirin (Sayısal Diyafram = 1,4, Çalışma Mesafesi = 0,12 mm; bkz. Malzemeler Tablosu).
    NOT: Görüntülemenin yapıldığı sıcaklık için uygun daldırma yağının seçimi önemlidir.
  3. Numune içeren cam alt kabı metal gövdeye (tabut) yükleyin ve sahne kelepçesine yavaşça kaydırın.
  4. Yağ yemeğin cam alt ile temas edene kadar hedefi yükseltmek için kaba ayar topuz kullanın. Örneği odak haline getirmek için göz parçasını ve ince ayar topuzlarını kullanın. Hücreler odaklandıktan sonra, mikroskop gövdesinin önünde bulunan seçici anahtarı sola doğru hareket ettirerek düğmeyi göz parçasından kamera moduna çevirin.
  5. Görüntüleme yazılımını kullanarak denemeye başlayın. Çözümlü 3D penceresinde, bir şişeyle betimlenen Tasarım/çalıştır deneme simgesini seçin. Yeni bir iletişim kutusu tasarım/çalıştır denemesibaşlıklı görünmelidir.
    1. Tasarım ve ardından tasarım/çalıştır deneme iletişim kutusundaki bölüm sekmesini kullanarak Z yığınlarının sayısını ve örnek kalınlığını ayarlayın.
      NOT: Temsili sonuçlar bölümündeyapılan deneylerde, hareketsiz görüntüler için 200 nm aralıkta 17 Z-deste, timelapse mikroskopi için 200 nm aralığında dört Z-deste kullanılmıştır.
    2. Örnekteki hücrelerin kalınlığını ölçmek için, çözümlenmiş 3D iletişim kutusundaki yukarı ve aşağı okları kullanarak Z düzlemini el ile artımlı olarak ayarlayın. Hücrelerin görüntü edinimi için üst ve alt sınır olarak odak dışı gittikleri yeri işaretleyin. Denemeyi çalıştırmadan önce bu bilgileri aktarın.
    3. Timelapse görüntüleme sırasında fototoksisite ve fotobeyazrlama en aza indirmek için, Z-yığınları sayısını azaltmak ve görüntü edinimi için hücrelerin orta düzlemi seçin.
  6. Tasarımı kullanarak deneme için uygun filtre kümesini seçin ve ardından tasarım/çalıştır deneme iletişim kutusundaki kanallar sekmesini seçin (TRITC: EX 542/27; EM 597/45; FITC/GFP: EX 475/28; EM 525/48; mKiraz: EX 575/25; EM 632/60; Cy5: EX 632/22; EM 676/34).
    1. Ayrıca, POL/DIC bilgilerinin toplanması için bir başvuru seçin. Çözümleme 3D iletişim kutusunda ki uygun seçenekleri seçerek görüntülemeden önce seçilen tek tek kanallar için yüzde iletimini (ışık yoğunluğunu) ve maruz kalma süresini ayarlayın.
      NOT: Seçili parametrelerin zayıf sinyali kaçırmadan veya aşırı doyatmadan anlamlı floresan verileri elde edip etmediğini belirlemek için deney için düşünülmeyen bir görünüm alanında bu ayarları test edin. Daha sonra deneysel kurulum için bu parametreleri aktarın.
  7. Çözümlü 3D iletişim kutusundaki Puanlistesi düğmesini seçerek puan listesini açın. Yeni bir iletişim kutusu, başlıklı puan listesigörünmelidir. Mikroskop aşaması denetimlerini kullanarak uygun görünüm alanlarını bularak ve puan listesi iletişim kutusundaişaret noktası seçeneğini seçerek denemede kullanılacak çeşitli görünüm alanlarını işaretleyin.
    NOT: Mikroskobun puan listesindeki bir noktaya yeniden odaklandığı her seferde bir değiştirme noktası nın seçilmesi gerekir. Bu, mikroskobu listedeki uygun noktaya odaklayarak ve daha sonra değiştir noktası düğmesini seçerek yapılabilir. Yeniden odaklama yaparken analog kaba/ince ayar tonuna dokunmamak önemlidir; odağı ayarlamak için yalnızca yazılımı kullanın.
  8. Önce tasarım ve ardından deneme iletişim kutusundaki timelapse sekmesini seçerek zaman atlama parametrelerini ayarlayın. Zaman atlamalı onay kutusunu seçin. Zaman atlamalı görüntüler/toplam zaman açısından uygun zaman atlamalı parametreleri girin.
  9. Önce tasarımı seçerek puan listesinden görüntülenecek noktaları ve ardından tasarım/çalıştır deneme iletişim kutusundaki noktalar sekmesini ayarlayın. Ziyaret noktaları listesi seçeneğini seçin ve tam bir sıra ise virgül veya tire ile ayrılmış metin kutusuna görüntülenecek noktaları girin.
  10. Denemebaşlamadan önce, tasarım/çalıştır iletişim kutusundaki çalıştır sekmesini kullanarak dosya adlarını ve dosya konumlarını düzenleme. Dosya konumu ayarlar düğmesini seçerek, veri klasörünü seçerek ve daha sonra uygun klasörü seçerek veya yeni bir klasör oluşturarak değiştirilebilir. Resim dosyası adı metin kutusuna yeni dosya adını girerek dosya adlarını değiştirin.
  11. Denemeyi başlat iletişim kutusundaki oynat düğmesini seçerek denemeyi başlatın.
    NOT: Timelapse için, DIC ayarını kullanarak (gereksiz fotobeyazrlamayı önlemek için) deneme boyunca her görüş alanında odağı sürekli olarak denetleyin ve hücreler zaman içinde odak dışına çıkma eğiliminde olduğu için puan listesindeki bilgileri yeniden odaklayıp güncelleyin.

4. Görüntü işleme

  1. Şekil oluşturma için istenilen ham (R3D) görüntü dosyalarını açın.
    NOT: Son zamanlarda kaydedilen dosyalar, görüntüleme yazılımının başlangıç iletişim kutusundaki veri klasörü düğmesini kullanarak bulunabilir.
  2. Deconvolution programı çalıştırın, bir deconvolved D3D görüntü dosyası üretmek için odak dışı floresan ışık kaldırmak için7,8, . Başlat iletişim kutusundaki işlem sekmesini seçin ve ardından deconvolve'useçin. Yeni bir iletişim kutusu deconvolvebaşlıklı görünecektir.
    1. Deconvolution parametrelerini, dekonvolution iletişim kutusundaki girişe uygun görüntü numarasını (her görüntü dosyasının sol üst köşesinde bulunan) sürükleyerek ayarlayın. Deconvolution iletişim kutusunda, daha fazla seçenek düğmesini seçin ve onay kutusunu işledikten sonra kırpma kenarlığı rolloff'unu seçin (aksi takdirde görüntüler ilgili DIC dosyasının üzerine eklenemez).
    2. Ham resim dosyasını deconvolve için deconvolution iletişim kutusunda yap düğmesini tıklatın.
      NOT: Deconvolution parametreleri istenilen sonuçlar için yazılım üreticisinin kılavuz kılavuzunda belirtildiği şekilde ayarlanabilir.
  3. Gerekirse, herhangi bir veya tüm dalga boyu (renk) kanallarında manuel arka plan gürültüsü çıkarma ve parlaklık/kontrast ayarı gerçekleştirin. Deconvolved resim dosyasındaki kontrast ayarlama düğmesini seçerek bunu yapın.
  4. Önce D3D iletişim kutusunun üst kısmındaki dosya seçeneğini seçerek görüntüyü TIFF dosyası olarak kaydedin. Ardından TIFF olarak kaydet'i seçin, uygun Z-yığınlarını (odak içinde olan), istenen filtre kümelerini seçin veya seçin.
  5. Üretici tarafından sağlanan herhangi bir yazılımı veya ImageJ5gibi serbestçe kullanılabilen programları kullanarak veri nicelleştirme gerçekleştirin.
    1. Hücre boyutu ölçümü için uygun D3D resim dosyasındaki araç sekmesine tıklayın ve ardından ölçü mesafeleri seçeneğini belirleyin. Sol tıklamalarla fareyi kullanarak istenilen resim dosyasındaki başlangıç ve bitiş noktalarını seçerek mesafeleri ölçün.
      NOT: Hücre boyutu nicelemesi sırasında görüntüyü yakınlaştırmak en iyisidir.
    2. Floresan sinyal nicelliği için, uygun D3D görüntü dosyasındaki araç sekmesinin altındaki veri denetçisi seçeneğini kullanın.
      NOT: En iyisi görüntüyü yakınlaştırmak ve floresan sinyal miktarını tamamlarken yalnızca ilgili filtrelerin seçilmesidir.
    3. Floresan sinyalini ölçmek için, belirli boyuta ayarlanmış sütun/satır seçeneğine sahip bir kutu çizin. Ölçülecek sinyaliçeren bir alan seçin ve değeri kaydedin. Hücrelerin hemen dışında bir alan seçmek için aynı boyut kutusunu kullanarak arka plan sinyalini ölçün. Hücre içinde elde edilen floresan sinyalinden kaydedilen değerden arka plan değerini çıkarın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

GpsB fenotipleri
Daha önce sa-GpsB hücre lysis bir antisense RNA sonuçları kullanarak GpsB tükenmesi gibi önemli bir protein olduğunu göstermiştir9. Burada çeşitli hücre bölünmesi fenotiplerinin ortaya çıkışının ve protein lokalizasyonundaki değişikliklerin bu makalede açıklanan timelapse mikroskopi protokolü kullanılarak nasıl yakalanabileceği açıklanmaktadır. Bu amaçla, S. aureus suşları RB143 [SH1000 barındıran pEPSA5 (boş vektör)] ve GGS8 [SH1000 harboring pGG59 (<...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mikroskopi mikrobiyal organizmalarla ilgili çalışmalarda dayanak noktası olarak kalmıştır. Mikron ölçekli hücre büyüklükleri göz önüne alındığında, tek hücre düzeyinde çalışmalar geleneksel olarak elektron mikroskobu (EM) dayanıyordu. EM son yıllarda oldukça güçlü bir teknik haline gelmiş olsa da, sınırlı kullanıcı erişimi16ek olarak kendi içsel sınırlamaları vardır. Floresan mikroskobu tekniklerinde gelişmeler ve FDAA3gibi farklı floresan probların geliştirilmesi, canlı hü...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Laboratuvar üyelerimize bu yazıdaki yorumları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, Güney Florida Üniversitesi'nin (PE) başlangıç ödeneği ile finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AgaroseFisher BioReagentsBP160-100Moleküler Biyoloji Sınıfı - Düşük EEO
DAPIInvitrogenD3571Mikroskopi
FM4-64InvitrogenT3166Mikroskopi
Cam alt tabakMatTekP35G-1.5-14-CMikroskopi
IPTGFisher BioReagentsBP1755-10Dioksan içermez
MikroskopGEDeltaVision EliteÖzelleştirilmiş Olympus IX-71 Ters Mikroskop Standı; Özel aydınlatma kulesi ve iletilen ışık aydınlatıcı modülü. Hedefler: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X YAĞ (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); 100X Hedefi için DIC Prism Nomarski; CoolSnap HQ2 kamera; SSI Meclisi 7 renkli; Çevre kontrol odası - opak.
PC190723MilliporeSigma3445805MGFtsZ inhibitörü
SoftWorxGEÜretici tarafından sağlanan görüntüleme yazılımı

Kaynaklar

  1. Coltharp, C., Xiao, J. Superresolution microscopy for microbiology. Cellular Microbiology. 14 (12), 1808-1818 (2012).
  2. Holden, S. Probing the mechanistic principles of bacterial cell division with super-resolution microscopy. Current Opinion in Microbiology. 43, 84-91 (2018).
  3. Hsu, Y. P., et al. Full color palette of fluorescent d-amino acids for in situ labeling of bacterial cell walls. Chemical Science. 8 (9), 6313-6321 (2017).
  4. Nonejuie, P., Burkart, M., Pogliano, K., Pogliano, J. Bacterial cytological profiling rapidly identifies the cellular pathways targeted by antibacterial molecules. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 110 (40), 16169-16174 (2013).
  5. Rueden, C. T., et al. ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data. BioMed Central Bioinformatics. 18 (1), 529(2017).
  6. Colville, K., Tompkins, N., Rutenberg, A. D., Jericho, M. H. Effects of poly(L-lysine) substrates on attached Escherichia coli bacteria. Langmuir. 26 (4), 2639-2644 (2010).
  7. McNally, J. G., Karpova, T., Cooper, J., Conchello, J. A. Three-dimensional imaging by deconvolution microscopy. Methods. 19 (3), 373-385 (1999).
  8. Wallace, W., Schaefer, L. H., Swedlow, J. R. A workingperson's guide to deconvolution in light microscopy. Biotechniques. 31 (5), 1076-1082 (2001).
  9. Eswara, P. J., et al. An essential Staphylococcus aureus cell division protein directly regulates FtsZ dynamics. Elife. 7, (2018).
  10. Haeusser, D. P., Margolin, W. Splitsville: structural and functional insights into the dynamic bacterial Z ring. Nature Reviews Microbiology. 14 (5), 305-319 (2016).
  11. Du, S., Lutkenhaus, J. At the Heart of Bacterial Cytokinesis: The Z Ring. Trends in microbiology. , (2019).
  12. Haranahalli, K., Tong, S., Ojima, I. Recent advances in the discovery and development of antibacterial agents targeting the cell-division protein FtsZ. Bioorganic and Medicinal Chemistry. 24 (24), 6354-6369 (2016).
  13. Brzozowski, R. S., et al. Deciphering the Role of a SLOG Superfamily Protein YpsA in Gram-Positive Bacteria. Frontiers in Microbiology. 10, 623(2019).
  14. Elsen, N. L., et al. Mechanism of action of the cell-division inhibitor PC190723: modulation of FtsZ assembly cooperativity. Journal of the American Chemical Society. 134 (30), 12342-12345 (2012).
  15. Haydon, D. J., et al. An inhibitor of FtsZ with potent and selective anti-staphylococcal activity. Science. 321 (5896), 1673-1675 (2008).
  16. Pilhofer, M., Ladinsky, M. S., McDowall, A. W., Jensen, G. J. Bacterial TEM: new insights from cryo-microscopy. Methods in Cell Biology. 96, 21-45 (2010).
  17. Ni, Q., Mehta, S., Zhang, J. Live-cell imaging of cell signaling using genetically encoded fluorescent reporters. Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (2), 203-219 (2018).
  18. Weiss, C. A., Hoberg, J. A., Liu, K., Tu, B. P., Winkler, W. C. Single-Cell Microscopy Reveals That Levels of Cyclic di-GMP Vary among Bacillus subtilis Subpopulations. Journal of Bacteriology. 201 (16), (2019).
  19. Schneider, J. P., Basler, M. Shedding light on biology of bacterial cells. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 371 (1707), (2016).
  20. Yao, Z., Carballido-Lopez, R. Fluorescence imaging for bacterial cell biology: from localization to dynamics, from ensembles to single molecules. Annual review of microbiology. 68, 459-476 (2014).
  21. Ettinger, A., Wittmann, T. Fluorescence live cell imaging. Methods in Cell Biology. 123, 77-94 (2014).
  22. Fredborg, M., et al. Automated image analysis for quantification of filamentous bacteria. BioMed Central Microbiology. 15, 255(2015).
  23. Ursell, T., et al. precise quantification of bacterial cellular dimensions across a genomic-scale knockout library. BioMed Central Biology. 15 (1), 17(2017).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Bakteriyel H cre MorfolojisiProtein Lokalizasyon AnaliziZaman Atlamal G r nt lemeY ksek z n rl kl Dekonvols yonH cre Uzunlu u NicelendirmesiFloresan Sinyal NicelendirmesiBacillus SubtilisStaphylococcus Aureusmmersiyon Objektifi
Bakterilerde Hücre Altı Protein Lokalizasyonu ve Hücre Morfolojisi Değişikliklerini Araştırmak Için Canlı Hücre Floresan Mikroskobu
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.