Yöntem makalesi

Coxsackievirus 'a karşı antiviral adayların tanımlanması için viral giriş analizinin kullanımı ve moleküler yerleştirme Analizi A16

DOI:

10.3791/59920

⸱

15 Temmuz 2019

 ,  ,  , 
1Department of Molecular Biosciences, University of Texas at Austin, 2School of Pharmacy, College of Pharmacy, Kaohsiung Medical University, 3Graduate Institute of Medical Sciences, College of Medicine, Taipei Medical University, 4Department of Microbiology and Immunology, Dalhousie University, 5Department of Microbiology and Immunology, School of Medicine, College of Medicine, Taipei Medical University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokol amacı, aday viral giriş inhibitörleri tanımlamak için kullanılabilecek viral giriş ile ilgili farklı deneyleri göstermek için.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Antiviral bir mekanik viral giriş incelemek için hangi adım değerlendirilen ajanlar en etkili olduğunu ayırt etmek için uygun olduğunu, ve aday viral giriş inhibitörleri tanımlanması için izin asdiyor. Burada, virüs parçacıklarını veya erken viral girişteki belirli adımları hedefleyerek, zarfsız coxsackievirus A16 (CVA16) tarafından enfeksiyonun engellenebilen küçük moleküllerin tanımlanması için deneysel yaklaşımlar sunuyoruz. Assays zaman-of-ilaç-ilavesi analizi, akış sitometri tabanlı viral bağlayıcı tahlil ve viral inaktivasyon assay içerir. Ayrıca, antiviral bileşiklerin hedeflediği potansiyel kalıntıları tahmin etmek için virüs kapsid proteinlerini kullanan bir moleküler yerleştirme Protokolü sunuyoruz. Bu tanıtım viral giriş üzerinde hareket aday antiviral ajanlar tanımlanmasını yardımcı olmalıdır. Gelecek yönleri daha fazla ilaç gelişimi için bu olası inhibitörleri keşfedebilirsiniz.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

El, ayak ve ağız hastalığı (HFMD), küçük çocuklarda coxsackievirus A16 (CVA16) ve enterovirüs 71 (EV71) tarafından en sık neden olan bir hastalıktır. Son zamanlarda Asya-Pasifik Bölgesi genelinde, CVA16 kaynaklı HFMD 'de önemli bir Uptick olmuştur. Belirtiler hafif olabilir iken, şiddetli komplikasyonlar beyin ve kalp etkileyen oluşabilir, potansiyel Fatality ile1,2. Şu anda, hiçbir lisanslı antiviral tedaviler veya aşılar CVA16 için mevcut, ve bu nedenle bir baskı ihtiyacı gelecek salgınlar ve ilişkili komplikasyonlar frenlemek için antiviral stratejiler geliştirmek için vardır.

CVA16 bir icosahedral kapsid her biri 4 yapısal proteinleri yani VP1, VP2, VP3 ve VP4 içeren pentam montajlı bir olmayan zarflı virüs. Pentamer her beş kat ekseni çevreleyen bir ' Kanyon ' bölge bir depresyon olarak gösterir ve reseptör bağlayıcı rolü için belirtilmiştir3. Bu kanyon altında bir hidrofobik cep yatıyor VP1 bölgede doğal bir yağ ligand adlı sphingosine (SPH) içerir. Cellular reseptörleri, insan P selektin glikoprotein ligand 1 (psgl-1) ve çöpçü reseptör sınıf B üyesi 2 (SCARB2) gibi, bu ligand yerinden tarafından viral bağlayıcı bir rol oynamak için önerilmiştir hangi kapsid ve Konformasyonel değişiklikler sonuçlanır viral genomu daha sonra ev sahibi hücreye4,5,6. Viral giriş sürecinde ardışık olayları engelleyen olası inhibitörleri tanımlamak CVA16 enfeksiyonuna karşı potansiyel terapötik stratejiler sağlayabilir.

Virüs yaşam döngüsünde adımlar, mod özgü antiviral ajanlar tanımlamanıza yardımcı olmak için hedefler olarak deneysel yaklaşımlar üzerinden disseke olabilir. Bir zaman-of-ilaç-ek analiz viral enfeksiyon sırasında farklı zamanlarda ilaç tedavi etkisini inceler, ön giriş de dahil olmak üzere (virüs enfeksiyonu önce eklendi), giriş (virüs enfeksiyonu eşzamanlı eklendi), ve sonrası giriş (aşağıdaki eklendi virüs enfeksiyonu)7. Etkisi her tedavi koşullarında oluşan viral plaklar sayısını quantitating standart bir plak tahlil kullanılarak değerlendirilebilir. Akış cytometry tabanlı viral bağlayıcı tahlil ilaç ev sahibi hücrelere viral eki önler Eğer belirler. Bu, insan virüsü enfeksiyonlarının çoğunun oluştuğu 37 °C ' den gelen sıcaklığı, viriyonların ana hücre yüzeyine bağlanabildiği ancak hücreleri7' ye giremeyeceği 4 °c ' ye kadar kaydırarak elde edilir. Hücre membranı bağlı virüs parçacıkları daha sonra viral antijenlere karşı immünostatif ile ölçülmüş ve akış sitometri tarafından değerlendirilir. Diğer taraftan viral inaktivasyon assay ücretsiz virüs parçacıkları ile ilacın potansiyel fiziksel etkileşimlerini değerlendirmek için yardımcı olur, ya kalkanlama ya da virions nötralize, ya da neden toplamalardan ya da onları etkin hale getirmek Konformasyonel değişiklikleri enfeksiyon sırasında ana hücre yüzeyi ile sonraki etkileşimleri8,9. Bu deneyde, viral inokulumunu ilk ilaç ile ana hücre tek tabakalı enfekte ve standart bir plak tahlil8gerçekleştirmeden önce ilaç dışarı titrat için seyreltilmiş olmak için izin verilir. Son olarak, moleküler yerleştirme virion yüzeyinde potansiyel uyuşturucu etkileşimi sitelerini tahmin etmek için güçlü bir araçtır, zarflı virüslerden viral glikoproteinler ve non-zarf virüslerden viral kapsid proteinleri dahil, Hesaplamalı kullanarak Algoritma. Bu mekanik ilaç eylem modu hedeflerini belirlemek için yardımcı olur ve daha fazla aşağı akım assays tarafından doğrulanabilir yararlı bilgiler sağlar.

Son zamanlarda etkili olmayan zarflı CVA169tarafından enfeksiyon bloke antiviral bileşikler tanımlamak için yukarıda açıklanan yöntemleri istihdam. Burada, kullanılan ayrıntılı protokoller açıklanmıştır ve tartışılmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Not: Tüm hücre kültürü ve virüs enfeksiyonları, işlenen numunelerin Biyogüvenlik düzeyine uygun sertifikalı Biyogüvenlik davlumbazlarında yapılmalıdır. Küçük moleküllerin chebulagik asit (CHLA) ve punicalagin (PUG) iki tannin-sınıfı, etkili CVA16 enfeksiyon9engellemek için gözlenen, aday inhibitör ajanlar örnekleri olarak kullanılır. Viroloji teknikleri, virüs yayılma, virüs titer belirlenmesi ve plak şekillendirme birimleri (PFU) veya enfeksiyon çokluğu (MOı) kavramları temel ilkeler için, okuyucu referans10denir.

1. hücre kültürü, virüs hazırlama, bileşik hazırlama ve bileşik sitotoksisite

  1. İnsan rhabdomiyoskomi (RD) hücreleri CVA16 enfeksiyon11için ev sahibi hücrelerdir. RD hücrelerini, 10 ml 'lik Dulbecco 'nun modifiye kartal Orta (dmem) ile 10% fetal sığır serumu (FBS) ile tamamlayıcı olarak büyütün, 200 U/ml penisilin G, 200 μg/ml streptomisin ve 0,5 μg/ml Amfoterisin B, T-75 ' d a% 5 Co2 ' de 37 °c ' de flsorat.
  2. RD hücrelerinde virüsü yaymak ve PFU/ml viral titresi belirlemek tarafından CVA16 hazırlayın. Optimize edilmiş protokol için lütfen11' e başvurunuz.
  3. Test bileşiklerini ve denetimlerini ilgili çözücüleri kullanarak hazırlayın: Örneğin, CHLA ve PUG 'yi dimetil sülventide (DMSO) içinde çözülür. Tüm enfeksiyon adımları için, bazal orta DMEM artı 2% FBS ve antibiyotikler oluşur.
    Not: Test bileşik tedavilere DMSO son konsantrasyonu eşit veya% 0,25 altında deneyler; 0,25% DMSO karşılaştırılması için deneyleri bir negatif kontrol tedavisi olarak dahildir.
  4. RD hücrelerinde XTT ((2, 3-bis [2-metoksi-4-Nitro-5-sulfophenyl] 5-fenylamino)-karbonil]-2H-tetrazolium hidroksit) gibi reaktif belirlenmesi ile ilgili test bileşiklerinin sitotoksisite tahlili gerçekleştirin. Ayrıntılı protokol için lütfen12' ye başvurun. Üreticinin protokolüne göre GraphPad Prism gibi bir analitik yazılım kullanarak test bileşiklerinin sitotoksisite konsantrasyonlarını belirleyin. Hücre kalabilirliği önemli ölçüde etkilemez ilaç konsantrasyonları (≥ 95% uygun hücreler) çalışmanın geri kalanı için kullanılır.

2. zaman-of-ilaç-ek assay

  1. Viral enfeksiyondan önce ev sahibi hücrelerde ilaçların etkisini değerlendirmek için (ön tedavi)
    1. 2 x 105 hücreli/iyi bir tohumlama yoğunluğu 12-kuyu plakaları IÇINDE tohum RD hücreleri. Bir monolayer elde etmek için% 5 CO2 kuluçko içinde bir gecede 37 °c ' de inkübe.
    2. RD hücrelerini, 1 h veya 4 h için 1 mL bazal medya hacminde sitotoksisik olmayan konsantrasyonlarda (adım 1,4 ' den belirlenir) test bileşikleri ile tedavi edin.
    3. 1-2 ml PBS ile yıkama hücreleri eklenmeden önce 50 PFU/Well bazal orta virüs (inokulumunu son hacmi olan 300 μL) için 1 h. her 15 dakikada bir taş plaka.
    4. Enfeksiyonun ardından, PBS kullanarak monolayerleri tekrar yıkayın, sonra% 5 CO2 kuluçte 37 °c ' de daha fazla inkübasyon için% 0,8 metilselüloz Içeren 1 ml bazal medyaya bindirin.
    5. 72 sonra inkübasyon, bindirme medyayı çıkarın ve 2 mL PBS kullanarak kuyuları yıkayın.
    6. 15 dakika boyunca 0,5 mL% 37 formaldehit kullanarak kuyuları düzeltin.
    7. Süpernatant çıkarın ve PBS kullanarak tekrar yıkayın.
    8. 0,5 mL% 0,5 kristal menekşe çözeltisi kullanarak kuyuları lekeleyin. Sonra 2 dakika içinde leke solüsyonu çıkarın ve hava kurutmadan önce hafif bir su akışı ile kuyuları yıkayın.
    9. Plaka beyaz ışık kutusuna yerleştirerek viral plakları saymak. Yüzde (%) hesaplayın CVA16 enfeksiyon aşağıdaki gibidir: (ortalama # plak virüsü + ilaç /Mean # plak virüsü + DMSO kontrol) × 100%.
  2. İlaçlar ve virüsün aynı anda eklenmesi etkisini değerlendirmek için (ortak ilavesi)
    1. 2 x 105 hücreli/iyi bir tohumlama yoğunluğu 12-kuyu plakaları IÇINDE tohum RD hücreleri. Bir monolayer elde etmek için% 5 CO2 kuluçko içinde bir gecede 37 °c ' de inkübe.
    2. RD hücrelerini uygun konsantrasyonlarda test bileşikleri ile tedavi edin ve 50 PFU/Well CVA16 (inokulumunu son hacmi 300 μL 'dir) aynı anda 1 h. her 15 dakikada bir plaka kaya.
    3. 1 mL PBS ile yıkayın ve sonra% 5 CO2 kuluçko Içinde 37 °c ' de daha fazla kuluçl için 0,8% metilselüloz içeren bazal medya 1-2 ml ile bindirme.
    4. 72 h sonrası enfeksiyon sonra kristal menekşe ile leke viral plaklar ve yukarıda açıklandığı gibi% CVA16 enfeksiyon belirler.
  3. Viral giriş sonrası ilaç tedavisi etkisini değerlendirmek için (enfeksiyon sonrası)
    1. 2 x 105 hücreli/iyi bir tohumlama yoğunluğu 12-kuyu plakaları IÇINDE tohum RD hücreleri. Bir monolayer elde etmek için% 5 CO2 kuluçko içinde bir gecede 37 °c ' de inkübe.
    2. RD hücrelerini 50 PFU/Well CVA16 (inokulumunu son hacmi 300 μL) ile inoculate 1 h. her 15 dakikada bir plakayı kaya.
    3. 1-2 mL PBS ile kuyuları yıkayın ve 0,8% metilselüloz ve test bileşiklerinin uygun konsantrasyonları içeren bazal medya ile hücreleri bindirme.
    4. Kristal menekşe ile leke viral plaklar ve 72 h sonrası enfeksiyon sonra saymak ve yukarıda açıklanan% CVA16 enfeksiyon inküsyon belirlemek.
      Not: Hücrelerin kaldırılması önlemek için yavaşça tüm PBS yıkanıyor gerçekleştirin.

3. akış sitometri bazlı bağlayıcı tahlil

  1. 2 x 105 hücreli/iyi bir tohumlama yoğunluğu 12-kuyu plakaları IÇINDE tohum RD hücreleri. Bir monolayer elde etmek için% 5 CO2 kuluçko içinde bir gecede 37 °c ' de inkübe edin.
  2. 1 saat için 4 °c ' de hücre tek tabakalı ön Chill.
  3. 4 °C ' de 3 h için test bileşiklerinin varlığı ve yokluğunda CVA16 (MOı = 100) ile RD hücrelerini bulaştırın.
    Not: 4 °c ' de sıcaklık korumak için 4 °c ' de buz üzerinde viral aşı ve ortaya çıkan inkübasyon gerçekleştirin, bu da viral bağlamaya izin verir, ancak giriş yapmaz.
  4. Virüs inokulumunu çıkarın ve 1-2 ml buz soğuk PBS ile bir kez yıkayın.
  5. Hücreleri toplamak ve buz-soğuk akış sitometri tampon (1x PBS artı 2% FBS) onları resuspending önce, 3 dakika buz kuyuları için buz-soğuk ayrışma tampon 1 ml ekleyerek hücreleri kaldırın.
  6. Buz-soğuk akış sitometri tamponunu kullanarak hücreleri iki kez yıkayın ve buz üzerinde 20 dakika boyunca 0,5 mL% 4 paraformaldehit ile hücreleri düzeltin.
  7. Herhangi bir ilişkisiz veya zayıf bağlı virüsleri kaldırmak için PBS kullanarak hücreleri yıkayın ve sonra hücreleri leke Anti-VP1 antikor 1 mL (1:2000;% 3 BSA içeren PBS seyreltilmiş) 1 h için buz üzerinde, ikinci bir Alexa 488-konjuza Anti-fare IgG (1:250 ile inkübasyon izledi; 1 h için buzda% 3 BSA içeren PBS 'de seyreltilir. her antikor tedavisinin ardından PBS yıkasları (3 kez) gerçekleştirin.
  8. 0,5 mL 'Lik buz-soğuk akış sitometri tamponunun hücrelerini resuspend ve standart prosedürler kullanılarak bir akış sitometre üzerinde akış sitometri analizi gerçekleştirin. İlişkili Yazılım ve çubuk grafik gösterimi için quantitate kullanarak histogram verileri mevcut.

4. viral Inaktivasyon assay

  1. Daha önce açıklanan12 aşağıdaki koşulları kullanarak viral inaktivasyon assay gerçekleştirin:
    -106 PFU/ml CVA16 bir başlangıç konsantrasyonu.
    -2 x 105 hücre/iyi bir tohumlama yoğunluğu 12-kuyu plakaları RD hücre monolayers.
    -50-50 PFU/Well son virüs konsantrasyonu sonuçlanan ilaç bileşikleri titreyme için Fold seyreltme.
    -1-2 mL PBS kullanarak yıkama adımları.
    -% 0,8 metilselüloz içeren kaplama ortamı.
  2. Yukarıda ayrıntılı olarak viral plaklar prosedürün kristal menekşe boyama kullanarak viral enfeksiyon son okuma gerçekleştirin.

5. moleküler yerleştirme Analizi

  1. PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) test bileşiklerinin 3D molekülleri indirin. Moleküllerin yüklenmiş bir 3B yapısı yoksa, 2B yapıları indirin veya gülme dize dizisini kullanın ve bir moleküler program (örneğin CORıNA) ile 3D moleküllere dönüştürün.
  2. RCSB protein veri bankasından viral biyolojik montaj birimini indirin (https://www.rcsb.org/) ve viral yapı modelini bir biyobilgisayar programı (örneğin, UCSF Chimera) kullanarak hazırlayın. Örneğin, CVA16 olgun virion kristal yapısı (PDB: 5C4W)3durumunda, pdb dosyasından çözücüleri silin, Dunbrach 2010 Rotamer Kütüphanesi 'nden veri kullanarak tamamlanmamış yan zincirleri değiştirin ve yapıya hidrojenler ve masraflar ekleyin daha önce13bildirdi. Yerleştirme hedefleri, biyolojik montaj bilgileri (protein veri Bankası) ile amaçlanan analiz için herhangi bir ilgili viral proteinler olabilir.
  3. Örnek UCSF Chimera kullanarak hazırlanmış virüs ünitesi üzerine Dock test bileşikleri, ve bir görselleştirme yazılımı ile çıktı dosyaları analiz (örneğin, AutoDock Vina, PyMol):
    1. ' Ligand ' olarak UCSF Chimera içine test bileşik dosyasını yükleyin ve ' reseptör ' olarak hazırlanmış tüm viral protein seçerek kör yerleştirme gerçekleştirin. Arama hacmini tüm ' reseptör ' ile yeniden boyutlandırmak için bilgisayar fareyi veya trackpad 'i kullanın. ' Gelişmiş Seçenekler ' içinde, bağlama modlarının sayısının maksimum olmasını sağlar. Yerleştirme çerçeveleri otomatik olarak en yüksek en düşük bağlayıcı enerji sıralanır.
    2. Isteğe bağlı Daha da kör yerleştirme, arama hacmini azaltmak için tekrar fare veya trackpad kullanarak kör yerleştirme sonuçlarından türetilen ilgi bölgelerindeki virüs proteini üzerine yerleştirme site Confine (örneğin, 100 Å x 100 Å x 100 Å). Bu adım, kör yerleştirme sonuçlarının onaylanması ve özgüllüğü artırır yardımcı olur.
    3. Yerleştirme dosyasını yükleyerek bağlayıcı modların konumlarını çözümlemek için bir moleküler grafik sistemi (örn. PyMol) kullanın. ' Ligand ' seçerek ve ' herhangi bir atom ' seçeneği ile kutup kişileri tanımlayarak viral protein bileşik kutup kişileri bulun; sonuçları inceleyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zaman-of-ilaç-ek tahlil Şekil 1 ' de belirtilir ve küçük moleküller CHLA ve pug CVA16 enfeksiyon ya pre-viral giriş (pretreatment), viral giriş sırasında (Co-ilavesi), veya post-viral giriş kullanarak tedavinin etkisini gösterir ( enfeksiyon sonrası). Hem küçük moleküller sadece CVA16 infeksiyonuna karşı marjinal bir etki yaratıp viral enfeksiyondan önce ev sahibi hücrelerin ön tedavisinde (Şekil 1a) veya enfeksiyon sonrası tedav...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu raporda, viral giriş hedefleyen antiviral adayların tanımlanması için yararlı olan protokolleri tarif, özellikle olmayan zarflı CVA16 karşı. Deneyleri viral giriş sırasında erken olayları incelemek için şekillerde tasarlanmıştır, hangi eylem mekanizması (ler) açıklığa kavuşturmak için yararlıdır ve potansiyel hedef (ler) test ajanları ' antiviral aktivite. ' Zaman-of-ilaç-ek tahlil ' büyük ölçüde test bileşiklerinin potansiyel hedefini belirlemek için izin verir, örneğin enfekte olmayan konak hücreleri (ön tedavi Anal...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, hiç bir ilgi çatışması olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar Dr Joshua Beckham için Austin Texas Üniversitesi 'nde moleküler yerleştirme ile teknik destek için minnettar. Bu çalışmada, Tayvan bilim ve Teknoloji Bakanlığı (MOST107-2320-B-037-002-C.-JL ve L.-m. ' den fon tarafından kısmen destekleniyordu; MOST106-2320-B-038-021 ve MOST107-2320-B-038-034-MY3 için L.-m).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
% 4 ParaformaldehitSigmaAL-158127-500G
Alexa 488-konjuge anti-fare IgGInvitrogenA11029
Amfoterisin BGIBCO15290-018
Anti-VP1 antikoruMerck-MilliporeMAB979Anti-Enterovirüs 71 Antikor, Coxsackie A16 ile çapraz reaksiyona girer, klon 422-8D-4C-4D
Beckman Coulter SitometreBeckman CoulterFC500
CorinaMoleküler Ağlar GmbH
Kristal menekşeSigmaC3886-100G
DMEMGIBCO11995-040
DMSOSigmaD5879
FBSGIBCO26140-079
FormaldehitSigmaF8775
Graphpad PrizmaGraphPad
Heparin sodyum tuzuSigmaH3393
İn vitro toksikoloji test kiti, XTT bazlıSigmaTOX2
MetilselülozSigmaM0512-100G
PBS pH 7.4GIBCO10010023
Penisilin-StreptomisinGIBCO15070-063
PyMolSchrö dinger
UCSF ChimeraKaliforniya Üniversitesi, San Francisco

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Legay, F., et al. Fatal coxsackievirus A-16 pneumonitis in adult. Emerging Infectious Diseases. 13, 1084-1086 (2007).
  2. Wang, C. Y., Li Lu,, Wu, F., H, M., Lee, C. Y., Huang, L. M. Fatal coxsackievirus A16 infection. Pediatric Infectious Disease Journal. 23, 275-276 (2004).
  3. Ren, J., et al. Structures of coxsackievirus A16 capsids with native antigenicity: implications for particle expansion, receptor binding, and immunogenicity. Journal of Virology. 89, 10500-10511 (2015).
  4. Nishimura, Y., et al. Human P-selectin glycoprotein ligand-1 is a functional receptor for enterovirus 71. Nature Medicine. 15, 794-797 (2009).
  5. Yamayoshi, S., et al. Scavenger receptor B2 is a cellular receptor for enterovirus 71. Nature Medicine. 15, 798-801 (2009).
  6. Yamayoshi, S., et al. Human SCARB2-dependent infection by coxsackievirus A7, A14, and A16 and enterovirus 71. Journal of Virology. 86, 5686-5696 (2012).
  7. Lin, L. T., et al. Hydrolyzable tannins (chebulagic acid and punicalagin) target viral glycoprotein-glycosaminoglycan interactions to inhibit herpes simplex virus 1 entry and cell-to-cell spread. Journal of Virology. 85, 4386-4398 (2011).
  8. Lin, L. T., et al. Broad-spectrum antiviral activity of chebulagic acid and punicalagin against viruses that use glycosaminoglycans for entry. BMC Microbiology. 13, 187(2013).
  9. Lin, C. J., et al. Small molecules targeting coxsackievirus A16 capsid inactivate viral particles and prevent viral binding. Emerging Microbes & Infections. 7, 162(2018).
  10. Flint, S. J., Enquist, L. W., Racaniello, V. R., Skalka, A. M. Principles of Virology. , 3rd edn, ASM Press. (2008).
  11. Velu, A. B., et al. BPR-3P0128 inhibits RNA-dependent RNA polymerase elongation and VPg uridylylation activities of Enterovirus 71. Antiviral Research. 112, 18-25 (2014).
  12. Tai, C. J., Li, C. L., Tai, C. J., Wang, C. K., Lin, L. T. Early Viral Entry Assays for the Identification and Evaluation of Antiviral Compounds. Journal of Visualized Experiments. , e53124(2015).
  13. Lang, P. T., et al. DOCK 6: combining techniques to model RNA-small molecule complexes. RNA. 15, 1219-1230 (2009).
  14. Zhang, X., et al. Coxsackievirus A16 utilizes cell surface heparan sulfate glycosaminoglycans as its attachment receptor. Emerging Microbes & Infections. 6, 65(2017).
  15. Waterhouse, A., et al. SWISS-MODEL: homology modelling of protein structures and complexes. Nucleic Acids Research. 46, W296-W303 (2018).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

la Ekleme ZamanAk Sitometrisi Ba lanmasViral naktivasyon AnaliziRD H creleriPlak Olu turucu BirimlerKristal Viyole BoyamaPubChem Bile ikleri

İlgili makaleler