Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İmmünficient Farelerde Karaciğer Ortotopik İnsan Uveal Melanom Xenograft Platformu Üretimi

8.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/59941

⸱

6 Kasım 2019

 ,  , 
1Department of Diagnostic and Interventional Radiology, Osaka City University Graduate School of Medicine, 2Department of Surgery, National Hospital Organization, Kure Medical Cancer Center, 3Department of Medical Oncology, Sidney Kimmel Cancer Center, Thomas Jefferson University

Bu makalede

Özet

Ortotopik insan karaciğeri metastatik uveal melanom ksenogreft fare modelleri, hasta kaynaklı tümör öbek ve kültürlü insan uveal melanom hücre hatları ile iğne enjeksiyon teknikleri ile cerrahi ortotopik implantasyon teknikleri kullanılarak oluşturulmuştur.

Özet

Son yıllarda, subkutan implante hasta kaynaklı ksenogreft tümörleri veya kültürlü insan hücre hatları giderek geleneksel kurulan insan hücresi daha immüneksik farelerde insan kanserleri çalışma için daha temsili modeller olarak kabul edilmiştir satırlar in vitro. Son zamanlarda farelerde ortotoik implante edilen hasta kaynaklı tümör ksenogrefti (PDX) modelleri hasta tümörlerinin özelliklerini daha iyi çoğaltmak için geliştirilmiştir. Bir karaciğer ortotopik ksenogreft fare modeli yararlı bir kanser araştırma platformu olması bekleniyor, tümör biyolojisi ve ilaç tedavisi içine anlayışlar sağlayan. Ancak, karaciğer ortotopik tümör implantasyonu genellikle komplikedir. Burada hasta kaynaklı karaciğer-metastatik üveal melanom tümörlerinin ortotopik implantasyonu için protokollerimizi açıklıyoruz. İnsan karaciğerini metastatik üveal melanom hücre çizgilerini immünoeksik farelere dönüştürdük. Protokoller, hasta kaynaklı uveal melanom tümörü parçaları içeren cerrahi ortotopik implantasyon tekniği veya kültürlü insan hücre hattı ile iğne enjeksiyon tekniği kullanılarak sürekli olarak yüksek teknik başarı oranlarına neden olabilir. Ayrıca iç karaciğer tümörlerini saptamak için BT taraması protokollerini ve kriyosrezerv tümörleri kullanarak yeniden implantasyon tekniklerini yeniden engraftment elde etmek için açıklıyoruz. Birlikte, bu protokoller çeviri araştırmakaraciğer metastatik uveal melanom karaciğer ortotopik tümör fare modelleri için daha iyi bir platform sağlar.

Giriş

Uveal melanom batı dünyasında yetişkinler arasında en sık görülen göz içi malign tümördür. Son 50 yıl içinde, uveal melanom insidansı (milyonda 5.1 olgu) Amerika BirleşikDevletleri'ndeistikrarlı kalmıştır 1,2. Uveal melanom iris melanositler doğar, silikal vücut, veya koroid, ve metastaz gelişir zaman son derece ölümcül bir hastalıktır. Uveal melanom metastazı olan hastaların ölüm oranı metastazların ilk tanısından 2 yıl sonra 1 yılda %80, 2 yıl sonra %92 idi. Metastaz tanısı ve ölüm arasındaki süre genellikle kısa, az 6 ay, tedavi ye bakılmaksızın3,4. Kanser kan yoluyla yayılır ve baskın karaciğermetastaz eğilimindedir (89-93%)4,5. Etkili bir fare modeli acilen karaciğer-metastatik uveal melanom daha fazla araştırma için gereklidir. Çeviri araştırma için, karaciğer lokalize metastatik üveal melanom fare modeli oluşturmak için net bir talep vardır.

Hasta kaynaklı tümör ksenogrefti (PDX) fare modellerinin bireyselleştirilmiş tıp stratejileri sağlaması beklenmektedir. Bu modeller klinik sonuçların tahmincisi olabilir, klinik öncesi ilaç değerlendirmesi için yararlı olabilir ve tümörlerin biyolojik çalışmalar için kullanılabilir6. Temsili PDX modelleri ektonik tümör implante ksenogreft fareler, deri altı sitelerde tümör var. Çoğu araştırmacı özel uygulama olmadan deri altı implantasyon için cerrahi yapabilirsiniz7,8. Ayrıca deri altı tümörleri kolayca izleyebilirler. Deri altı PDX modelleri araştırma aşamasında popüler hale gelmiş olsa da, pratik kullanıma geçişte bazı engelleri vardır. Subkutan implantasyon hasta kaynaklı tümörleri tümör kökenli farklı bir mikroortamda engraft için zorlar, böylece engreftasyon yetmezliği ve yavaş tümör büyümesine yol açar 9,10,11, 12,13,14. Ortotopik engraftment orijinal tümör15,16aynı organı kullandığı için bir PDX modeli için daha ideal ve rasyonel bir yaklaşım olabilir.

Son zamanlarda, nod kültürlü bir insan karaciğer-metastatik uveal melanom hücre hattı ile hasta kaynaklı karaciğer-metastatik uveal melanom tümörlerinin cerrahi ortotopik implantasyon teknikleri ve iğne enjeksiyon teknikleri için protokoller geliştirdik. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) fareler17,18. Protokoller sürekli olarak yüksek teknik başarı oranları ile sonuçlanır. Ayrıca iç karaciğer tümörlerini tespit etmek için yararlı olan BT tarama tekniklerini oluşturduk ve PDX platformunda kriyosayrılmış tümörlerin yeniden implantasyonu geliştirdik. Uveal melanom tümörü ksenogreft modellerinin histopatolojik ve moleküler özellikleri de dahil olmak üzere orijinal hasta karaciğer tümörü özelliklerini koruduğunu bulduk. Birlikte, bu teknikler çeviriaraştırmada uveal melanom için karaciğer ortotopik tümör modelleri için daha iyi bir platform sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Çalışmaya kayıtlı hastalar, Kurumsal İnceleme Kurulu onaylı bir protokole göre, atılan cerrahi numunelerin araştırma amaçlı ve genetik çalışmalar için kullanılmasına izin veren yazılı izin vermelidir. Bu protokol, Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'ndaki tavsiyelere uygun olarak yürütülmüş ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1. Taze Hasta Kaynaklı Tümör Dokusunun Toplanması

  1. Ameliyattan veya bir hastane ameliyathanesinde iğne biyopsisinden hasta kaynaklı tümör dokusu elde edin.
  2. Tümör dokusunu Hanks'in dengeli tuz çözeltisini (HBSS) buz üzerine içeren 100 mL'lik bir kapta koyun.
  3. Bir laboratuvarda dokuyu steril bir kaputa (Biyogüvenlik seviyesi 2) aktarın.
  4. En kısa sürede adım 2'ye geçin.
    NOT: Güvenlik nedenlerinden dolayı, bilinen HIV veya Hepatit B veya C enfeksiyonları olan hastaları hariç tinler.

2. Taze Hasta Kaynaklı Tümör Dokusunun İşlenmesi

  1. Dokuyu 50 mL'lik fosfat tamponlu salin (PBS) içeren bir tüpe koyun. Dokuyu yıkamak için, tüpe PBS ekleyin ve pbs'yi tüpten iki kez atın.
  2. Dokuyu buz üzerinde PBS içeren bir Petri kabına aktarın.
  3. Steril forceps ve makas kullanarak, dokunun nekrotik parçaları çıkarın. 2.3 ila 2.5 adımları sırasında dokuyu nemli ve soğuk tutun. İğne biyopsisi örnekleri için adım 2.3 ve 2.5'i atlayın ve örnekleri kesmeyin.
    NOT: Nekrotik doku genellikle dokunulduğunda kolayca parçalanır.
  4. Cerrahi karaciğer implantasyonu için 1 mm3 küpler halinde dokuyu kesin.
  5. Petri kabında 2 mm küpler halinde doku geri kalanı kesin.
  6. Histolojik analiz için %4 formalin içeren 1,7 mm'lik bir mikrotüpe ve genomik ve proteomik analiz için başka bir tüpe aktarın.
  7. Mikrotüpleri sıvı nitrojen içeren bir sıvı nitrojen kavanozuna koyun. Tüpleri kalıcı depolama için -80 °C'lik bir dondurucuya aktarın.
    NOT: Hastadan numune alınması ile doku işleme arasındaki süre 30 dakikayı geçmemelidir.

3. Hasta Kaynaklı Tümör Dokusu ile Cerrahi Karaciğer İmplantasyonu

  1. Ameliyat için kaputa gelen tüm nesneleri % 70 etil alkol ile püskürtün.
    NOT: Bu cerrahi aletler, ısıtma pedleri ve anestezi makineleri içerir.
  2. Bir pamuklu bez ve kumaş levha ağırlığını ölçün.
  3. Bir fareyi %3-5 izofluran buharlaştırıcı ile indüksiyon odasına yerleştirerek anesthetize edin.
  4. Fare tamamen anestezi edildikten sonra, bir ısıtma yastığı üzerinde supine pozisyonda yerleştirin. Anestezi bakımı için% 1.5-3 isoflurane teneffüs etmek için farenin burnunu nisme üzerinde izofluran koni yerleştirin.
    NOT: Fare tüm işlem sırasında ısıtma yastığı üzerinde olması gerekir. Isıtma eksikliği hipotermiye neden olabilir.
  5. Farenin ayağı ultra ince forceps ile dikilmiş olduğunda hiçbir tepki ile uygun anestezi onaylayın.
  6. Ameliyattan önce mikro şırıngaüzerinde 27 G iğne kullanarak kanadına buprenorfin (0.6 mg/kg) deri altına enjekte edin.
  7. Karın% 70 etil alkol uygulayın ve yukarı ve aşağı kürk yayıldı. Kürk yayıldıktan sonra, daha kolay bir kesim için sol subkostal alanın altında cildin daha kolay görselleştirme onaylamak. Kürkü karından kesmeyin.
    NOT: Kürk, ameliyattan sonra kesi bölgesini gizleyecek ve farenin kesi sonrası ameliyatı tırmalaymasını önleyecektir. Ancak, kurumsal standartlara göre kesi alanı enfeksiyonu önlemek için kürk tıraş olabilir.
  8. Iyot uygulayın ve cilde emilir sağlar.
  9. Fare üzerinde 2 cm delik li steril bir cerrahi örtü yerleştirin.
  10. Kavisli ultraince forseps ile karın derisi kaldırın ve kavisli makas ile 1 cm enine sol subkostal deri kesi yapmak.
  11. Kesinin derisinin altına kavisli makasın ucunu yerleştirin ve peritonu deriden ayırmak için hafifçe açın. Makasları kesikten kapalı bıçaklarla geri çek.
    NOT: Farenin içindeki makasların açılması ve kapanması hasara ve kanamaya neden olabilir.
  12. Periton altında karaciğer bulun. Periton aracılığıyla koyu kırmızımsı bir renk onaylayın.
  13. Kavisli makas ile, periton bir 1 cm enine kesi yapmak. Bir periton arter kesme kenarından kanarsa, hemen kateter ile kanamayı durdurun.
  14. Bir elinizle kavisli ultraince forsepskullanarak yağ dokusunu alın, sol karaciğer lobunun altına pamuklu bir bezin kenarını yerleştirin ve karaciğeri ortaya çıkarmak için diğer elinizle bezi aşağı doğru yuvarlayın.
    NOT: Yağ dokusu kapma pamuklu bez yapışmasını yağ dokusu tutmak için önemlidir.
  15. Pamuklu bez üzerinde karaciğer dışlaştırmak ve olmayan dokuma emici kumaş levha üzerine karaciğer yerleştirin.
    NOT: Kumaş levha karaciğer stabilize ve kanama emici iki temel rol oynar.
  16. Parankimde bir cep oluşturmak için steril no. 11 neşter bıçağı kullanarak 5 mm genişlik ve derinlikte bir kesi yapın ve kesi bölgesine pamuklu bezle hafifçe bastırın.
    1. Bıçağı karaciğer yüzeyine paralel olarak yerleştirin ve yatay olarak kesin.
    2. Herhangi bir kanamayı durdurmak için kesi bölgesine pamuklu bezle basın.
      NOT: Bıçak dikey tutmayın, aksi takdirde karaciğer kırmak ve karaciğer ortasında büyük damarları zarar.
  17. Kesi bölgesini açmak için pamuk lu bezi yukarı doğru yuvarlayın ve kavisli ultra ince forceps ile cebine 1 mm3 küp tümör dokusu yerleştirin. Pamuk bezi ters döndürme de yuvarlar ken ve aşağı bastırırken forcep'leri geri çekin.
    NOT: Forceps geri çekerken pamuklu bez ile kesi yerinde bastırarak cebiiçinde tümörün yerinden önlemeye yardımcı olur.
  18. İmplantasyondan sonra pamuklu bezi kesi bölgesinden hafifçe alın. En kısa sürede adım 3.19'a geçin.
  19. Kesi bölgesine emilebilir bir hemostat koyun.
  20. Hemostazolduğunu doğrulayın. Kanama devam ederse, kesi bölgesine daha fazla hemostat ekleyin.
  21. Forceps ile kumaş levha kapalı karaciğer Peel (tercihen künt uçlu) ve karın boşluğuna geri karaciğer koymak.
  22. 5-0 emilebilir dikiş kullanarak çift ligatür ile dikiş periton.
  23. 5-0 emilebilir dikiş kullanarak üçlü ligature ile dikiş cilt.
    NOT: Üçlü ligatür cerrahi kesi dehiscence önlemeye yardımcı olur.
  24. Tamamen uyanana kadar faregözlemlemek ve kafese geri koymak.
  25. Ameliyat sırasında kanama hacmi için pamuklu bez ve kumaş levha nın ağırlığını kanla ölçün. Ameliyattan önce orijinal ağırlıkları ile karşılaştırın. Ameliyat sırasında kanamayı farede dolaşan kan hacminin %10'una düşürün.

4. Toplama ve Kültürlü İnsan Karaciğer Metastatik Uveal Melanom Hücre Hattı İşlenmesi

  1. Kültürlü hücreler hazırlayın.
  2. Hücreleri toplayın ve hücre sayacı kullanarak hücre numarasını hesaplayın.
  3. 15 mL'lik bir tüpte 10,0 x 106 hücre için uygun miktarda hücre süspansiyonu hazırlayın.
  4. Tüpü oda sıcaklığında bir santrifüjde 5 dk 300 x g'da döndürün.
  5. 15 mL tüpteki süpernatantı çıkarın. Hücre peletini tüpün alt kısmında bırakın.
  6. 1,7 mL'lik bir tüpe 50 μL RPMI 1640 orta ekleyin.
  7. Uç açıklığı büyütmek için 200 μL ucunun ucunu makasla kesin.
  8. RPMI olan 1,7 mL tüp içine kesme ucu ile bir pipet kullanarak bodrum membran matris 60 μL ekleyin.
  9. 1.7 mL tüpte RPMI ve matrisi karıştırın. Girdap yap.
  10. 15 mL tüpteki hücre peletinin içine karışımın 110 μL'sini ekleyin. Hücre süspansiyonuna yeni bir 1.7 mL tüp aktarın.
  11. İğne enjeksiyonundan önce tüpü buzda tutun.

5. Kültürlü İnsan Karaciğer Metastatik Uveal Melanom Hücre Hattının Karaciğere Cerrahi İğne İmplantasyonu

  1. Yukarıdaki protokolü 3.1'den 3.15'e kadar izleyin.
  2. 27 G iğne ile bir mikroşiniş ile hücre süspansiyon toplayın.
  3. İğneyi karaciğer yüzeyi boyunca takın ve iğnenin ucunu 5 mm daha derine doğru ilerletin.
  4. Karaciğere 20 μL hücre süspansiyonu enjekte edin.
  5. Enjekte edilen hücrelerin dışarı sızmasını önlemek için karaciğerin ekleme noktasını kauterize edin. Hemostazolduğunu doğrulayın.
  6. Yukarıdaki protokolü 3.21'den 3.24'e kadar izleyin.

6. CT Taraması

  1. Uyanık durumda bir dizginleyici içine fare yerleştirin.
  2. Dezenfeksiyon ve vazodilatasyon için steril bir alkol yastığı ile kuyruk silin.
  3. 1 mL şırıngaüzerinde 27 G iğne ile kuyruk damarına 100 μL CT kontrast maddesi enjekte edin.
  4. CT taraması almadan önce enjeksiyondan sonra 4 saat bekleyin.
    NOT: Bu ajan karaciğer Kupffer hücreleri tarafından alınır kadar 4 saat sürer.
  5. Enjeksiyondan dört saat sonra tümör taşıyan fareyi %3-5 buharlaştırılmış izofluran ile indüksiyon odasına yerleştirerek anestezi edin.
  6. Fare tamamen anestezi yedikten sonra, ct'ye yatkın konuma yerleştirin.
  7. Farenin ayağı ultra ince forceps ile dikilmiş olduğunda hiçbir tepki ile uygun anestezi onaylayın.
  8. 15 dakika boyunca ct taraması alın.
  9. CT taramasından sonra farenin tamamen uyanAna kadar olduğundan emin olun ve kafese geri koyun.
  10. Tümörün varlığını değerlendirin ve BT görüntülerinde tümör boyutunu ölçün.
    NOT: Kontrast madde, normal karaciğer parankimini geliştirir, böylece unenhanced tümör tanımak kolaydır. Safra kesesini ve mideyi tümör olarak yanlış yorumlamayın.

7. Hasat ve İşleme Doku

  1. CO2 kullanarak fareleri ötenazi yaparak, işaret parmağını ve başparmağını kafatasının arkasına yerleştirerek ve vücudu kuyruğun tabanından çekerek servikal çıkık ı takip edin. En kısa sürede adım 7.2'ye geçin.
  2. Fareyi bir supine pozisyonda yerleştirin ve% 70 etil alkol ile karın sprey.
  3. Karın organlarını ortaya çıkarmak için ksifoid sürecinin altında 3 cm'lik enine kesi yapmak için steril çiller ve steril makas kullanın.
  4. Tümör dokusunu çıkar ve 2.1-2.2 adımlarını gerçekleştirin.
  5. Petri kabında 2 mm küpler halinde tümörün geri kalanını kesin.
  6. Kriyopreservation sonra yeniden implantasyon için kriyomedium ile bir kriyojenik tüp e nakledin.
  7. Tüpleri iyopropanol dolu kriyojenik bir dondurucu kapta koyun.
  8. Geçici depolama için kabı -80 °C'lik bir dondurucuya aktarın. Kriyomedium içeren kriyotüpleri doğrudan sıvı nitrojen tankına koymayın. Tümör dokusunu korumak için -1 °C/dk soğuma hızında yavaşça dondurun.
  9. Ertesi gün, tüpleri kalıcı depolama için sıvı nitrojen tankına aktarın.

8. Yeniden implantasyon

  1. Tüpleri, doku implantına hazır olana kadar sıvı nitrojen içeren sıvı nitrojen kavanozunda dondurun. Canlılığı korumak ve engraftment şansını artırmak için oda sıcaklığına doku maruz ilerler.
  2. 37 °C'lik su banyosunda cryopreserved tüp eritme.
  3. 2.2-2.4 adımlarını gerçekleştirin.
  4. 3.1-3.24 adımlarında açıklandığı gibi çözülmüş tümörü farelere yerleştirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Karaciğer cep yöntemi kullanılarak cerrahi ortotopik implantasyon altı ay içinde% 80 yüksek başarı oranı ile fare karaciğeriçine insan karaciğer metastatik uveal melanom tümörü nakli yapabilirsiniz. Ksenogreft tümörü, kız nodülleri olmadan tek başına tümör olarak karaciğerde engreftler(Şekil 1 ve Şekil 3A). Mikroiğneler kullanılarak karaciğere yapılan cerrahi ortotopik enjeksiyon tekniği, her durumda karaciğerde kültürlü insan ka...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mevcut ortotopik ksenogreft modelleri emek yoğun, zaman alıcı ve oluşturmak için pahalı. Karaciğer kanseri için ortotopik tümör ksenograft fare modelleri fazla yirmi yıl önce kurulmuştur19,20,21. Ancak, bu teknik karmaşıktır ve mikro iğne tutucu ve 6-0-8-0 gibi özel ekipman kullanımını gerektirir bir mikroskop altında ince dikişler. Tümör ve normal karaciğer dokusu dikiş kırılgan karaciğer dokusuzarar vermez, böylece dikkatle di...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Taslağı gözden geçiren Mösyö Ohara, K. Saito ve M. Terai'ye müteşekkiriz. Yazarlar Fox Chase Kanser Merkezi'nde Dr R. Sato tarafından bu el yazması editoryal ve İngilizce yardım için eleştirel inceleme kabul. Burada açıklanan çalışma Bonnie Kroll Araştırma Fonu, Mark Weinzierl Araştırma Fonu, Thomas Jefferson Üniversitesi Göz Melanomaraştırma Fonu, Osaka Toplum Vakfı ve JSPS KAKENHI Grant Numarası JP 18K15596 Osaka City tarafından desteklendi Üniversitesi. Dr. Aplin'in laboratuvarındaki çalışmalar NIH hibe R01 GM067893 tarafından desteklenmiştir. Bu proje aynı zamanda Bir Dekan Dönüştürücü Bilim Ödülü, Thomas Jefferson Üniversitesi Programlı Girişim Ödülü tarafından finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
< güçlü > Malzemeler, dokular ve hayvanlar< / güçlü >
Buprenorfin
CO2 < / alt> tankı
Cryomedium
Exitron nano 12000 (Alkali toprak metal bazlı nanopartikül kontrast madde)Miltenyl Biotec130-095-700
HBSS 1x, kalsiyum ve magnezyumCorning21-020-CM
İnsan karaciğeri metastatik uveal melanom hücre hattı
KaraciğerdekiTüm doku işlemleri Biyogüvenlik Seviye 2 başlığında yapılmalıdır. İnsan dokusu ile çalışırken dikkatli olun; Daima eldiven kullanın ve doğrudan cilt temasından kaçının. Hastaların HIV veya diğer yüksek oranda bulaşıcı organizmalarla enfekte olmuş olabileceğini varsayalım. Enfeksiyon taşıdığı bilinen numuneleri işlemeyin.
İyot
İzofluranPurdue Ürünleri67618-150-17
İzopropanolFisher scientificA416-1Cilde ve göze doğrudan temasından ve anestezik ajanın solunmasından kaçının.
Sıvı nitrojen
Matrigel HCBD354248
NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) farelerJackson Lab55574 ila 8 haftalık
PBS 1x, kalsiyum ve magnezyum olmadanCorning21-031-CM
RPMI 1640Corning10-013-CV
Steril alkol hazırlama pedi (%70 izopropil alkol)Nice-Pak productsB603
% 4 paraformaldehit fosfat tampon çözeltisiWako163-20145
70 Etil alkol çözeltisiFisher Scientific04-355-122
Name<strong>CompanyKatalog NumarasıYorumlar
Equipments
Emilebilir hemostatJohnson and Johnson63713-0019-61
Otoklav
Vücut ağırlığı ölçümü
KoteryBovie MedicalMC-23009
Hücre sayacı
Santrifüj
Pamuklu çubuk
Kriyo dondurma kabıNALGENE5100-0001
KriyotüpSARSTEDT72.379
Kavisli makasKavisli
Hassas Aletler Dünya Hassas Aletler501302
Kumaş levha
Dondurucu
F / HAVA Filtre TenekeKutu Harvard Aparatı600979
Isıtma yastığı
İzofluran buharlaştırıcıArtisan Scientific66317-1
Sıvı nitrojen
Sıvı nitrojen kavanozuThermo Fisher Scientific2123
Mikro-CT taramasıSiemens
İğne tutucuDünya Hassas Aletler501246
Petri kaplarıFisher ScientificFB0875713
Pipet
Sprey şişesi
Steril başlıkBiyogüvenlik seviye 2 kabini
Steril No.11 neşterAD CerrahiA300-11-0
Düz forsepsWorld Precision Instruments14226
Cerrahi örtü
Kuyruk damar tutucuBraintree ScientificTV-150-STD
Su banyosu
27 G iğneli 1 mL TB şırıngaBD309623
1.7 mL tüpBioexpressC-3260-1
5-0 PDO SütürAD CerrahiS-D518R13
15 mL konik tüplerAZER BİLİMSELES-9152N
27 G iğneBD780301
27 G iğneHamilton7803-01
50 mL konik tüplerAZER SCIENTIFICES-9502N
50 & mikro; L mikro şırıngaBD80630
50 ve mikro; L mikro şırıngaHamilton7655-01
100 mL kapFisher Scientific12594997
200μ L ipucu
insan uveal melanom dokusu % ultra ince forseps 503247

Kaynaklar

  1. Aronow, M. E., Topham, A. K., Singh, A. D. Uveal Melanoma: 5-Year Update on Incidence, Treatment, and Survival (SEER 1973-2013). Ocular Oncology and Pathology. 4 (3), 145-151 (2018).
  2. Krantz, B. A., Dave, N., Komatsubara, K. M., Marr, B. P., Carvajal, R. D. Uveal melanoma: epidemiology, etiology, and treatment of primary disease. Clinical Ophthalmology. 11, 279-289 (2017).
  3. Gragoudas, E. S., et al. Survival of patients with metastases from uveal melanoma. Ophthalmology. 98 (3), 383-389 (1991).
  4. Diener-West, M., et al. Development of metastatic disease after enrollment in the COMS trials for treatment of choroidal melanoma: Collaborative Ocular Melanoma Study Group Report No. 26. Archives of Ophthalmology. 123 (12), 1639-1643 (2005).
  5. Collaborative Ocular Melanoma Study Group. Assessment of metastatic disease status at death in 435 patients with large choroidal melanoma in the Collaborative Ocular Melanoma Study (COMS): COMS report no. 15. Archives of Ophthalmology. 119 (5), 670-676 (2001).
  6. Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
  7. Kim, M. P., et al. Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice. Nature Protocols. 4 (11), 1670-1680 (2009).
  8. Némati, F., et al. Establishment and characterization of a panel of human uveal melanoma xenografts derived from primary and/or metastatic tumors. Clinical Cancer Research. 16 (8), 2352-2362 (2010).
  9. Wilmanns, C., et al. Modulation of Doxorubicin sensitivity and level of p-glycoprotein expression in human colon-carcinoma cells by ectopic and orthotopic environments in nude-mice. International Journal of Oncology. 3 (3), 413-422 (1993).
  10. Kang, Y., et al. Proliferation of human lung cancer in an orthotopic transplantation mouse model. Experimental and Therapeutic. 1 (3), 471-475 (2010).
  11. Fichtner, I., et al. Establishment of patient-derived non-small cell lung cancer xenografts as models for the identification of predictive biomarkers. Clinical Cancer Research. 14 (20), 6456-6468 (2008).
  12. Marangoni, E., et al. A new model of patient tumor-derived breast cancer xenografts for preclinical assays. Clinical Cancer Research. 13 (13), 3989-3998 (2007).
  13. Bergamaschi, A., et al. Molecular profiling and characterization of luminal-like and basal-like in vivo breast cancer xenograft models. Molecular Oncology. 3 (5-6), 469-482 (2009).
  14. Ho, K. S., Poon, P. C., Owen, S. C., Shoichet, M. S. Blood vessel hyperpermeability and pathophysiology in human tumour xenograft models of breast cancer: a comparison of ectopic and orthotopic tumours. BMC Cancer. 12, 579(2012).
  15. Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15 (8), 451-452 (2015).
  16. Rubio-Viqueira, B., Hidalgo, M. Direct in vivo xenograft tumor model for predicting chemotherapeutic drug response in cancer patients. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 85 (2), 217-221 (2009).
  17. Ozaki, S., et al. Establishment and Characterization of Orthotopic Mouse Models for Human Uveal MelanomaHepatic Colonization. American Journal of Pathology. 186 (1), 43-56 (2016).
  18. Kageyama, K., et al. Establishment of an orthotopic patient-derived xenograft mouse model using uveal melanomahepatic metastasis. Journal of Translational Medicine. 15 (1), 145(2017).
  19. Fu, X. Y., Besterman, J. M., Monosov, A., Hoffman, R. M. Models of human metastatic colon cancer in nude mice orthotopically constructed by using histologically intact patient specimens. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88 (20), 9345-9349 (1991).
  20. Rashidi, B., et al. An orthotopic mouse model of remetastasis of human colon cancer liver metastasis. Clinical Cancer Research. 6 (6), 2556-2561 (2000).
  21. Fan, Z. C., et al. Real-time monitoring of rare circulating hepatocellular carcinoma cells in an orthotopic model by in vivo flow cytometry assesses resection on metastasis. Cancer Research. 72 (10), 2683-2691 (2012).
  22. Jacob, D., Davis, J., Fang, B. Xenograftictumor modelsinmiceforcancer research, atechnical review. Gene Therapy and Molecular Biology. 8, 213-219 (2004).
  23. Ahmed, S. U., et al. Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice. Journal of Visualized Experiments. 25 (79), e50544(2013).
  24. Kim, M., et al. Generation of humanized liver mouse model by transplant of patient-derived fresh human hepatocytes. Transplantation Proceedings. 46 (4), 1186-1190 (2014).
  25. Lavender, K. J., Messer, R. J., Race, B., Hasenkrug, K. J. Production of bone marrow, liver, thymus (BLT) humanized mice on the C57BL/6 Rag2(-/-)γc(-/-)CD47(-/-) background. Journal of Immunological Methods. 407, 127-134 (2014).
  26. Boll, H., et al. Micro-CT based experimental liver imaging using a nanoparticulate contrast agent: a longitudinal study in mice. PLoS One. 6 (9), e25692(2011).
  27. Zhao, X., et al. Global gene expression profiling confirms the molecular fidelity of primary tumor-based orthotopic xenograft mouse models of medulloblastoma. Neuro-Oncology. 14 (5), 574-583 (2012).
  28. Rubio-Viqueira, B., et al. An in vivo platform for translational drug development in pancreatic cancer.Clinical. Cancer Research. 12 (15), 4652-4661 (2006).
  29. Siolas, D., Hannon, G. J. Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models. Cancer Research. 73 (17), 5315-5319 (2013).
  30. Alkema, N. G., et al. Biobanking of patient and patient-derived xenograft ovarian tumour tissue: efficient preservation with low and high fetal calf serum based methods. Scientific Reports. 6 (5), 14495(2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Ortotopik Karaciğer KsenogreftiUveal Melanom ModeliCerrahi İmplantasyon Tekniğiİğne Enjeksiyon YöntemiBT Taraması ile TespitKriyoprezerveli Tümör ReimplantasyonuHasta Kaynaklı TümörSubkostal İnsizyonAbsorbe Olabilir Sütür ile Kapatma
İmmünficient Farelerde Karaciğer Ortotopik İnsan Uveal Melanom Xenograft Platformu Üretimi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.